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[font=宋体][color=#222222]1.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]PH值的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]因为卡波姆聚合物有大量的游离羧基,所以[/font][font=宋体]pKa值通常很小。如果介质的pH小于4,羧基很少分离,pH大于4,羧基开始分离,聚合物溶解,粘度增加,pH值为8[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]时[/color][/font][font=宋体][color=#222222],则基本[/color][/font][font=宋体][color=#222222]全部[/color][/font][font=宋体][color=#222222]分离,粘度最大。[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]介质[/font][font=宋体]pH值也影响卡波姆凝胶的粘附性,当pH值低于pKa时,凝胶的结合能力强,粘附性[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]就会加大[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]。同时介质的离子强度可以改变卡波姆凝胶对[/font][font=宋体]pH值的敏感性,当离子强度较高时,卡波姆容易释放质子,其pKa值[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]降低[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体],因此可以在较低的[/font][font=宋体]pH值下溶解。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]2.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]离子强度的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]在一些药物中,药物对凝胶周围介质的[/font][font=宋体]pH值和离子强度的影响也不容忽视。药物的酸性也影响凝胶的性质,因此酸性药物的作用更加明显。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]3.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]其他辅料的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]在卡波姆凝胶中同时使用聚乙烯吡咯烷和聚氧乙烯作为助剂,可以降低卡波姆凝胶的黏膜粘附力,这种减少与共存辅料的浓度和分子量有关,辅料浓度高[/font][font=宋体](5%)可以大大降低卡波姆凝胶的粘附力,浓度降至0.5%的话,影响较小。通常,介质的pH值不会改变聚乙烯吡咯和聚氧乙烯的这一特性。硬脂酸镁具有疏水性,因此也能降低卡波姆凝胶的粘附性。[/font][/color][/font]
【作者】 谢清春; 陈燕忠; 吕竹芬;【Author】 XIE Qingchun CHEN Yanzhong LV ZhufenInstitute of Material Medica, Guangdong Pharmaceutical College, Guangzhou 510006, Chin【机构】 广东药学院药物研究所;【摘要】 目的测定不同产地的紫草中β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁(以下简称阿卡宁)的含量,比较不同溶剂对紫草中阿卡宁的提取率,并对阿卡宁的乙醇溶液稳定性进行考察。方法采用高效液相色谱法测定阿卡宁的含量,色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水-甲酸(700:300:0.5)为流动相,流速1mL·min-1,检测波长275nm。测定了内蒙紫草、新疆紫草和云南紫草中阿卡宁的含量,考察了75%乙醇、乙醇、石油醚和液体石蜡对紫草中阿卡宁的提取率;将阿卡宁0.1mg·mL-1乙醇溶液于冰箱4℃存放,定期进样测定,并与新配制时测定的峰面积比较。结果测定的三种紫草中,以新疆紫草含量最高;乙醇和石油醚对阿卡宁的提取率高而75%乙醇和液体石蜡的提取率低;阿卡宁的乙醇溶液随存放时间的增加而峰面积变小。结论提取溶剂对紫草中阿卡宁提取率影响较大;由于阿卡宁溶液的不稳定性,选择阿卡宁作为评价含紫草药材制剂的指标成分并不合适。 更多还原【Abstract】 Objective To determine the β,β’-dimethylacrylalkannin in lithospermum erythrorhizon, compare the extractingrate of different solvents to β,β’-dimethylacrylalkannin and study the stability of standard β,β’-dimethylacrylalkanninsolution of alcohol. Methods A HPLC method was used to determine the β,β’-dimethylacrylalkannin. Dikma Diamonsil C18chromatogram column(200 mm×4.6 mm, 5μm) was used, Acetonitrile-water-Formic acid(700:300:0.5) as mobile phase, flowrate at 1mL·min-1, detection wavelength at ... 更多还原【关键词】 紫草; β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁; 提取率; 高效液相色语法; 稳定性; 【Key words】 Lithospermum erythrorhizon; β,β’- dimethylacrylalkannin; Extracting rate; HPLC; Stability; http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208201119_384576_2352694_3.jpg
一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练,初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等,而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质,主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子(近于球形)具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外;而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0~100%之间,其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav(分离化合物在内水和外水体积中的比例关系)表示,Kav值的大小和凝胶柱床的总体积(Vt)、外水体积(V0)以及分离物本身的洗脱体积(Ve)有关:Kav = (Ve-V0)/(Vt-V0) ----------- (1)在限定的层析条件下,Vt和V0都是恒定值,而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大,Ve值小,Kav值也小。反之,分子量小Ve值大,Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身(基质)体积(Vg)、外水体积(V0)、内水体积(Vi)及柱床总体积(Vt)的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数,同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下,被分离物质Kav值差异越大,分离效果越好。反之,分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中,我们可以实测出Vt、V0及Ve的值,从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶,在一定的分子量范围内,Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系:Kav =-b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到:Ve =-b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后,并根据上述的线性关系绘出标准曲线,然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂(一)器材1. 玻璃层析柱((20mm×60cm)2. 恒流泵(或下口恒压贮液瓶)3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml(或5ml)刻度试管(二)试剂1. 标准蛋白(1)牛血清白蛋白:Mw=67,000(上海生化所)(2)鸡卵清清蛋白:Mw=45,000(美国SIGMA公司)(3)胰凝乳蛋白酶原A:Mw=24,000(美国SIGMA公司)(4)溶菌酶:Mw =14,3002. 未知蛋白质样品:由实验室准备3. 0.025M KCl-0.1M HAC(乙酸)(洗脱液1000ml)4. 蓝色葡聚糖-2000