甲喹司特

参考国标：农业部2086号公告-5-2014 饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定 液相色谱-串联质谱法前处理方法：Oasis HLB 200mg/6mL (P/N:WAT106202)1、 样品提取 — 参考国标准确称取饲料2g（预混合饲料1g）于50mL离心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL，涡旋1min，40度超声10min，9000rpm离心15min，收集上清液。残渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重复提取一次并合并提取液。精确量取5mL上述提取液在60度下氮吹至2mL，然后用4mL 0.1moL/L磷酸二氢钾充分溶解残余物，待净化。2、 样品净化 HLB （200mL/6CC）活化、平衡：3mL甲醇、3mL水上样：将上述备用液过柱淋洗：3mL 0.02mol/L 盐酸、3mL 5%甲醇洗脱：5mL 甲醇收集洗脱液后氮气吹干，用1mL 20%乙腈溶解后果0.22um 滤膜待上机色谱质谱条件色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm,2.1 mm，1.7μm) (P/N:186002353)柱温：30℃；进样量：10 μL流动相及参考梯度洗脱程序见下表。时间(min)流速(mL/min)0.1％甲酸溶液(％)乙腈(％)00.39551.00.39552.00.360403.00.360403.10.39590质谱采用ESI+检测方式，多反应监测（MRM）。毛细管电压为3.4 Kv； 源温度为150℃；脱溶剂气温度为550℃；脱溶剂气流速为800L/hr；锥孔气流速为20 L/hr。脱溶剂气、锥孔气、均为高纯氮气。碰撞气为氩气。定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见下表。 被测物名称定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压（V）碰撞能量（eV）喹乙醇264.2212.3264.2212.21615264.2177.120饲料空白样品与喹乙醇标准品对比谱图 液相方法分析喹乙醇代谢物喹噁啉-2-羧酸(QCA)、3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）参考国标：农业部781号公告-3-2006 动物源食品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸残留量的测定 高效液相色谱法前处理方法：使用Waters Oasis MAX 60mg/3mL (P/N:186001884)参考国标步骤1、 样品提取 — 参考国标称取肌肉样品5g于离心管中，加入8mL偏磷酸甲醇溶液，涡旋2min，在25度下6000rpm离心15min，取出上清液。然后重复提取一遍后合并两次上清液。向上清液中加入8mL乙酸乙酯，涡旋1min，4000rpm离心10min，取上层。再重复提取一遍后合并两次上清液。有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，涡旋1min，放置10min，使下层清晰，收集水相。然后再重复提取后合并，待净化。2、样品净化(MAX 60mg/3CC)活化、平衡：3mL甲醇、3mL水上样：备用液过柱淋洗：3mL 0.05mol/L 氢氧化钠、3mL甲醇洗脱：3mL 2%甲酸甲醇收集洗脱液后氮气吹干，用500uL甲醇溶解后过0.45μm 滤膜待上机仪器: Waters Alliance e2695仪器方法：流动相：1%甲酸水溶液+甲醇=60：40色谱柱：XBrige C18 250mm×4.6mm，粒径5μm (P/N:186003117)流速：1 mL检测器：2998紫外波长：320nm进样量：20μL柱温：30℃3-甲基喹噁啉-2-羧酸和喹噁啉-2-羧酸分离图谱

p 　　奎斯特诊疗公司(或：奎斯特诊断公司、探索诊断公司)Quest Diagnostics Inc.(NYSE:DGX)创立于1967年，总部位于美国新泽西州麦迪逊，全职雇员45,000人，从市值来讲，是仅次于美国实验室Laboratory Corp. of America Holdings(NYSE:LH)的美国排名第二的独立医学实验室公司(有时第一)。 /p p img width=" 600" height=" 313" title=" Quest-Diagnostics-Inc-DGX-Logo.jpg" style=" width: 600px height: 313px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/noimg/4e81271f-4eae-483c-a08f-1b0051d5e68d.jpg" border=" 0" vspace=" 0" hspace=" 0" / /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 奎斯特诊疗(探索诊断)Quest Diagnostics(DGX)： /strong /span /p p 　　Quest Diagnostics是美国排名前二(和美国实验室控股公司有时候你是老大，有时候我是老大)的独立医学实验室，也是是著名的生化医疗器材测试商，业务范围涵盖大部分的美国地区以及印度、英国、巴西和墨西哥。除了大量的临床检测服务，治疗资讯的临床实验服务，对于疾病和健康状况作诊断、监视和治疗。此外，Quest Diagnostics公司还涉及其他领域，包括制造和销售诊断试剂盒、POCT 产品，提供临床前研究检测服务，为保险公司进行风险评估服务等。 /p p 　　自1967年成立之初至今，奎斯特诊疗经历多次并购重组，于1996年在美国纽交所上市。Quest Diagnostics在美国拥有31个区域性大型诊断中心，155家快速反应实验室，超过2100个病人服务中心，每年诊断超过1亿个标本。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 奎斯特诊疗(探索诊断)Quest Diagnostics(DGX)历史沿革： /span /strong /p p 　　1967年，奎斯特诊疗Quest Diagnostics的前身Metropolitan Pathology Laboratory, Inc.成立 /p p 　　1997年，更名为Quest Diagnostics，并成为一家独立公司 /p p 　　1967年，奎斯特诊疗Quest Diagnostics的前身Metropolitan Pathology Laboratory, Inc.成立 /p p 　　1969年，更名为MetPath, Inc. /p p 　　1982年，MetPath被Corning Glass Works收购，并更名为Corning Clinical Laboratories /p p 　　1997年，Quest Diagnostics从Corning分拆，成为一家独立公司 /p p 　　1997年，奎斯特诊疗收购Branford, CT-based Diagnostic Medical Laboratory, Inc. (DML)的临床实验室部门 1999年，Quest Diagnostics收购SmithKline Beecham Clinical Laboratories，包括后者与CompuNet Clinical Laboratory的合资公司，GlaxoSmithKline仍然持有Quest Diagnostic的大部分股权 /p p 　　2000年，奎斯特诊疗开始6Sigma项目 /p p 　　2001年，奎斯特诊疗完成对俄亥俄州公司健康科技公司MedPlus, Inc. (NASDAQ: MEDP)的收购 /p p 　　2002年，Quest Diagnostics以5亿美金完成对弗吉尼亚州公司American Medical Laboratories, Inc. (AML) 和其一家附属公司LabPortal, Inc.的收购 /p p 　　2003年，奎斯特诊疗以8亿美金完成对加州Unilab Corporation (NASDAQ: ULAB)的收购 /p p 　　2005年，Quest Diagnostics以9.34亿美金完成对堪萨斯州公司LabOne, Inc. (NASDAQ: LABS)的收购 /p p 　　2005年，奎斯特诊疗与赛弗吉生物系统公司(Ciphergen Biosystems)结成战略联盟，以商业化的新蛋白质组测试 /p p 　　2006年，以1.85亿美金完成对弗吉尼亚州感染及免疫疾病实验室公司Focus Diagnostics, Inc.的收购 /p p 　　2007年，完成对瑞士诊断测试公司Hemocue的收购 /p p 　　2007年，从Welsh, Carson手中收购AmeriPath，成为癌症诊断测试服务的领先供应商 /p p 　　2011年，从Thermo Fisher Scientific手中收购Athena Diagnostics /p p 　　2011年，完成对Celera Corporation的收购 /p p 　　2012年，Quest Diagnostics收购UMASS Memorial Hospitals所有的实验室和资产 /p p 　　2014年，收购Solstas Lab Partners Group和所有的子公司 /p p 　　2014年，收购Summit Health, Inc。 /p

今年央视315爆出一些饲料企业瞒天过海地往饲料中非法添加各种“禁药”--喹乙醇，饲料原料表隐瞒喹乙醇等非法添加剂的问题，而且这种现象并非个例。什么是“喹乙醇”喹乙醇是1965年由德国人以邻硝基苯胺为原料合成的一种抗菌促生长剂。研究发现，大剂量的喹乙醇可能引起动物出现急性中毒、蓄积毒性以及亚慢性中毒等，进而影响人类健康。喹乙醇又称喹酰胺醇，商品名为倍育诺、快育灵，由于喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性，对大多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的三致性，即致畸形，致突变，致癌。因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂。《中国兽药典》(2005版)也有明确规定，喹乙醇被禁止用于家禽及水产养殖。fig.1 喹乙醇结构式本文参考《农业部2086号公告-5-2014饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了利用高通量全自动固相萃取仪（Reeko Fotector Plus）结合液相色谱/质谱检测饲料中喹乙醇的方法。检测方法仪器、耗材Reeko Fotector Plus 高通量全自动固相萃取系统；液相色谱-质谱联用仪（Agilent LC 1260-MS 6410）；Reeko AutoEVA-60全自动平行浓缩仪；Reeko AH-30全自动均质器；HLB固相萃取柱(200 mg, 6 mL, Oasis)或相当甲醇，乙腈（TEDIA色谱纯）；无水硫酸钠（优级纯），盐酸（优级纯）样品制备准确称取饲料(1 g-2 g，市售)，以及相同质量的基质空白，分别放置于50 mL聚丙烯离心管中。加入0.1 甲酸-乙腈溶液10 mL，采用Reeko AH-30全自动均质器均质30 s，另取一离心管放置清洗刀头液 3800 r/min离心5 min，收集上清液。残渣加入清洗刀头液进行再一次提取(10 mL)，3800 r/min离心5 min，合并两次提取液。取上清液5 mL放置于Reeko AutoEVA-60全自动平行浓缩仪进行富集，40℃条件下氮吹浓缩至2 mL，加入0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液4 mL，涡旋振荡溶解残留物。将上述样品液放置于Reeko Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪样品架上，通过WIFI连接，软件控制仪器进行固相萃取。依次以5 mL甲醇和5 mL水活化HLB固相萃取柱(200 mg, 6 mL, Oasis)，以2 mL/min 的速度进行上样，然后以5 mL盐酸（0.02 mol/L）和 5 mL 5%甲醇淋洗。用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，在AutoEVA-60全自动平行浓缩仪上氮吹浓缩至近干，加入10 %乙腈溶液定容至1 mL，涡旋振荡后过0.22 μm有机滤膜过滤，液相色谱-质谱/质谱联用仪（LC/MS/MS）上机测试。 固相萃取净化条件 Reeko Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪Reeko Fotector Plus 运行程序Reeko AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪Reeko AutoEVA-60 运行程序液相色谱/质谱联用仪条件MRM参数 结果与讨论为了验证该方法的回收率，本实验向空白饲料(2 g)中加入上述喹乙醇标品进行加标回收验证(n=4)。测试结果如下表所示，喹乙醇的回收率在82.1%-95%之间，说明该方法能够很好地运用于饲料中喹乙醇检测。表. 空白饲料中喹乙醇标品加标回收率及RSD值(40 μg/kg)总结1、Reeko AH-30均质器能够自动对样品进行均质，清洗刀头等操作，解放实验人员的双手，节省实验人员的宝贵时间； 2、Reeko AutoEVA-60全自动平行浓缩仪能够自动浓缩，针的液面追随系统能够让你的浓缩过程省时、省气；3、Reeko Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪能够自动的完成整个固相萃取流程，从活化到上样，清洗样品瓶，洗脱一步到位，省时省事；4、Reeko Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪采用全自动操作，固相萃取过程中可以排除操作带来的误差，能够获得手动固相萃取无法达到的RSD水平； 5、Reeko Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪能够实现高通量处理，最多一天能够处理180个样品，真正为批量检测提供帮助。