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[size=4]请教各位抗生素发酵过程检测的高手,由于我公司现在在转产,即将上马红霉素。但是由于各方面的原因在红霉素发酵与提炼过程中红霉素效价检测的方法过于繁琐,不太适合批量检测。现在的检测方法大致是根据效价的高低,稀释倍数也就不相同,加入碳酸钾的量也不同,但是发酵液与碳酸钾的总量20ml,再加入乙酸丁酯20ml,摇匀,静置,分层后取上层液10ml,再加入HCL溶液10ml,摇匀,静置,分层后取下层溶液5ml,再加入5ml硫酸。摇匀后放入水浴锅中30min。最后,冷却至室温,利用分光光度计检测吸光度。得出的吸光度带入线性公式计算,再乘以稀释倍数就得到效价。我们也尝试了利用高效液相检测红霉素发酵液的效价,但是杂质峰比较难分开,而且理论值与测定的值相差比较大。[/size] 化学方法很是繁琐,不知道各位高手中有没有做过红霉素的,请教一下各位有没有其他快速的检测方法,能够提供高效液相的方法最好。在此本人深表谢意!
[size=4] 请教各位抗生素发酵过程检测的高手,由于我公司现在在转产,即将上马红霉素。但是由于各方面的原因在红霉素发酵与提炼过程中红霉素效价检测的方法过于繁琐,不太适合批量检测。现在的检测方法大致是根据效价的高低,稀释倍数也就不相同,加入碳酸钾的量也不同,但是发酵液与碳酸钾的总量20ml,再加入乙酸丁酯20ml,摇匀,静置,分层后取上层液10ml,再加入HCL溶液10ml,摇匀,静置,分层后取下层溶液5ml,再加入5ml硫酸。摇匀后放入水浴锅中30min。最后,冷却至室温,利用分光光度计检测吸光度。得出的吸光度带入线性公式计算,再乘以稀释倍数就得到效价。我们也尝试了利用高效液相检测红霉素发酵液的效价,但是杂质峰比较难分开,而且理论值与测定的值相差比较大。[/size] 化学方法很是繁琐,不知道各位高手中有没有做过红霉素的,请教一下各位有没有其他快速的检测方法,能够提供高效液相的方法最好。在此本人深表谢意!
(一)分析背景及色谱条件 红霉素是一种十四元大环内酯类抗生素,一直是临床上治疗革兰氏阳性菌感染的重要药物,半个世纪以来为人类提供了一条安全高效的用药途径。经过不断研究人们相继开发出了耐酸性好的第二代红霉素和不易引起细菌耐药性的第三代红霉素。阿奇霉素可以说是目前第二代红霉素中最具有活力的大环内酯类抗生素,其生产步骤简单,在国内外都具有很大的生产量,尤其在国内,在许多药厂都有生产。但与其它第二代大环内酯类抗生素相比阿奇霉素的HPLC分析一直是个难点,这也与其独特的十五元环结构有关系。而且我们经过试验发现不同色谱柱对其检测的结果差别很大,普通的C18柱无法保证效果,C18 BDS的色谱柱的检测结果也不是很好,我们尝试了几种不同的在C18柱基础上经过各种填料处理的色谱柱,其中包括了“极限”系列的色谱柱。 阿奇霉素分子式http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211508_185763_1916092_3.jpg 色谱条件:磷酸氢二钾盐水溶液与乙腈以45:55混合。检测波长210纳米,柱温30°C,流速1.0ml/min,进样量50微克。阿奇霉素样品取自上海某药厂提供的产品,其纯度在95%以上。色谱柱我们共尝试了五根:(1)普通C18柱,编号为1;(2)某品牌BDS C18柱,编号为2;(3)大连某国产色谱柱,编号3;(4)日本某色谱柱(药检所推荐)。编号4;(5)Ultimate XB-C18色谱柱,编号5.(二)试验结果 (1)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211502_185756_1916092_3.jpg(2)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211503_185757_1916092_3.jpg(3)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211503_185758_1916092_3.jpg(4)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211503_185759_1916092_3.jpg(5)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911211503_185760_1916092_3.jpg 主峰时间 拖尾因子不对称度半峰宽 理论塔板数 杂质分离度118.4324.8567.2580.6534409——216.7801.4551.7040.42088440.452318.6201.0381.0390.41711067——428.9951.2311.4490.583136981.860527.3920.7440.4750.582123061.172(三)分析与讨论(1)对于两种主要杂质的显示情况,1和3只能显示出一种。4对它们的分离度最好,5次之。(2)从主峰阿奇霉素的峰型来看3最好,4,5次之。(3)关于主峰也就是阿奇霉素的出峰时间,4,5明显晚于前三个色谱柱。关于不同厂家不同批次的阿奇霉素我们已做过很多实验,绝大多数杂质出峰都在阿奇霉素之前,而且种类很多,也就是除了本实验所测样品显示的这两种主要杂质之外还存在有很多杂质,理论上讲主峰出峰时间晚有利于前面杂质峰的分离。 总结起来,从初步的对比检测中发现Ultimate XB-C18色谱柱对阿奇霉素杂质检测的情况还是很令人满意的,甚至不亚于药检所推荐使用的色谱柱。我们准备继续进行一系列的分析实验,对几种较难分离的杂质进行对比分析。