卡利斯蒂纳

[align=center][font='times new roman'][size=16px]Sil-NaUA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-VDI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱柱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在磷脂分离中的应用[/size][/font][/align][font='宋体']磷脂[/font][font='宋体']广泛存在于种子、动物细胞膜等生物体中，在生命活动中扮演着重要的生物学作用。[/font][font='宋体']例如[/font][font='宋体']，心磷脂[/font][font='宋体']异常[/font][font='宋体']会[/font][font='宋体']造成线粒体功能障碍，进一步[/font][font='宋体']会[/font][font='宋体']产生心血管疾病[/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]62[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='宋体']。开发新型的磷脂分离材料对于其高效分离纯化具有重要的意义，可为其结构和后续的生物学功能研究提供技术支持。本章进[/font][font='宋体']一步将[/font][font='宋体']所制备的[/font]Sil-NaUA和Sil-VDI[font='宋体']色谱柱用于[/font][font='宋体']肺腺癌细胞和鸡蛋黄磷脂提取物的分析，通过结合蒸发光散射检测，初步探索了所发展的色谱柱对磷脂样品的[/font][font='宋体']分离[/font][font='宋体']分析效果。[/font][align=center][/align][table][tr][td][align=left][size=13px]试剂[/size][size=13px]和仪器[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px]公司名称[/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px]P23[/size][size=13px]0[/size][size=13px]II[/size][size=13px]高效液相色谱系统[/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]大连依利特分析仪器有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]ELSD6000[/color][/size][size=13px][color=#000000]蒸发光散射检测器[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]美国奥泰科技有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]RE52CS[/color][/size][size=13px][color=#000000]旋转蒸发器[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]上海亚荣生化[/color][/size][size=13px][color=#000000]仪器厂[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]氯仿[/color][/size][size=13px][color=#000000]、丙酮[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]天津市大茂化学试剂厂[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]色谱甲醇、[/color][/size][size=13px][color=#000000]乙腈[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]上海星可高纯溶剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]无水乙醇[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]天津市汇杭化工试剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]色谱用纯水[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]法国[/color][/size][size=13px][color=#000000]Millipore[/color][/size][size=13px][color=#000000]公司的[/color][/size][size=13px][color=#000000]Milli-Q[/color][/size][size=13px][color=#000000]系统纯化[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][size=13px][color=#000000]色谱异丙醇[/color][/size][size=13px][color=#000000]（[/color][/size][size=13px][color=#000000]IPA[/color][/size][size=13px][color=#000000]）[/color][/size][/align][/td][td][align=left][size=13px][color=#000000]天津市科密[/color][/size][size=13px][color=#000000]欧化学[/color][/size][size=13px][color=#000000]试剂有限公司[/color][/size][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman'][size=16px]磷脂样品的制备[/size][/font][/align][font='宋体']肺腺癌细胞磷脂[/font][font='宋体']的提取按照传统的[/font]Folch[font='宋体']法[/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]63[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='宋体']，[/font][font='宋体']肺腺癌细胞经裂解后，按照[/font]1:18（w/v）[font='宋体']的比例加入混合溶剂氯仿[/font]-[font='宋体']甲醇（[/font]2:1，v/v[font='宋体']）。充分摇匀后，于[/font]3000 r/min[font='宋体']离心[/font]10 min[font='宋体']，继续加入[/font]0.2[font='宋体']倍体积的水，摇匀后，以[/font]3000 r/min[font='宋体']离心[/font]10 min[font='宋体']得到分层的上下两层液体。将上清液移除，用甲醇-水（[/font]1:1，v/v[font='宋体']）冲洗两个界面之间，得到[/font][font='宋体']下层膜脂的[/font][font='宋体']溶液。将下层溶液用氮气吹干，得到细胞磷脂样品，备用。[/font][color=#000000]鸡蛋黄磷脂的提取方法[/color][font='times new roman'][size=16px][color=#000000][6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]][/color][/size][/font][color=#000000]：取新鲜鸡蛋一枚，将其蛋黄[/color][color=#000000]部分分离置于烧杯中，按其重量[/color][color=#000000]1:10[/color][color=#000000]加入[/color][color=#000000]95%[/color][color=#000000]的乙醇，混合均匀后，移至圆底烧瓶中，常温下[/color][color=#000000]磁力搅拌[/color][color=#000000]2[/color][color=#000000] [/color][color=#000000]h[/color][color=#000000]，抽滤，得到乙醇混悬液。[/color][color=#000000]重复加入[/color][color=#000000]95%[/color][color=#000000]的乙醇[/color][color=#000000]洗涤残渣[/color][color=#000000]2-3[/color][color=#000000]次，抽[/color][color=#000000]滤，合并混悬液。[/color][color=#000000]将混悬液置于旋转蒸发仪中减压浓缩，得到浓缩物，[/color][color=#000000]加入丙酮反复洗涤，直至丙酮洗涤液接近无色，然后将浓缩物用氮气吹干，得到蛋黄磷脂[/color][color=#000000]样品[/color][color=#000000]，备用[/color][color=#000000]。[/color][align=center][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][b] [/b][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离条件[/size][/font][/align][font='宋体']磷脂样品[/font][font='宋体']分离采用[/font][font='宋体']甲醇[/font]/[font='宋体']乙腈[/font]/[font='宋体']水或[/font][font='宋体']甲醇[/font]/[font='宋体']乙腈[/font]/[font='宋体']异丙醇为流动相[/font][font='宋体']，[/font][font='宋体']流速为[/font]1.0 mL/min[font='宋体']，等度洗脱，蒸发光散射检测器漂移管温度为[/font]100[font='宋体']℃[/font][font='宋体']，雾化气压力[/font]350 kPa[font='宋体']，载气流速为[/font]2.0 L/min[font='宋体']。[/font][align=center][font='times new roman'][size=16px]结果与讨论[/size][/font][/align][font='宋体']首先采用[/font][font='宋体']肺腺癌细胞磷脂提取物[/font][font='宋体']为样品[/font][font='宋体']，结合蒸发光散射检测，初步探索了[/font]Sil-VDI和Sil-NaUA色谱柱[font='宋体']对磷脂样品的分离[/font][font='宋体']效果[/font][font='宋体']。[/font]如图4-1a和4-1b所示，以甲醇/乙腈/水（65:17.5:17.5，v/v/v）为流动相，Sil-VDI色谱柱能够在8 min以内分离出6个主要色谱峰；在相同的流动相条件下，Sil-NaUA色谱柱在8 min以内只能分离出1个色谱峰。基于此，我们进一步优化了流动相的组成和比例，如图所示，以甲醇/乙腈/异丙醇（60:20:20，v/v/v）为流动相，Sil-NaUA色谱柱可分离出2个色谱峰。显然，对于[font='宋体']肺腺癌细胞磷脂提取[/font][font='宋体']样品，[/font]Sil-VDI色谱柱的分离效果明显优于Sil-NaUA色谱柱的效果。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009301128532732_9921_3890113_3.png[/img][/align][size=13px] [/size][size=13px]肺腺癌细胞磷脂样品在[/size][size=13px]Sil[/size][size=13px]-VDI[/size][size=13px]（[/size][size=13px]a[/size][size=13px]）和[/size][size=13px]Sil-NaUA[/size][size=13px]（[/size][size=13px]b[/size][size=13px]，[/size][size=13px]c[/size][size=13px]）色谱柱中的分离谱图[/size][align=center][size=13px]实验条件：[/size][size=13px]（[/size][size=13px]a[/size][size=13px]，[/size][size=13px]b[/size][size=13px]）[/size][size=13px]流动相，甲醇[/size][size=13px]/[/size][size=13px]乙腈[/size][size=13px]/[/size][size=13px]水（[/size][size=13px]65:17.5:17.5[/size][size=13px]，[/size][size=13px]v/v/v[/size][size=13px]）；[/size][size=13px]（[/size][size=13px]c[/size][size=13px]）[/size][size=13px]流动相，甲醇[/size][size=13px]/[/size][size=13px]乙腈[/size][size=13px]/[/size][size=13px]异丙醇（[/size][size=13px]60:20:20[/size][size=13px]，[/size][/align][align=center][size=13px]v/v/v[/size][size=13px]）[/size][size=13px]；流速，[/size][size=13px]1.0 mL/min[/size][/align][align=center][size=13px]Fig.[/size][size=13px] [/size][size=13px]4-[/size][size=13px]1 Separation[/size][size=13px] chromatograms[/size][size=13px] of[/size][size=13px] [/size][size=13px]lung adenocarcinoma [/size][size=13px]cell phospholipids on [/size][size=13px]Sil[/size][size=13px]-VDI[/size][size=13px] (a)[/size][size=13px] and[/size][size=13px] [/size][/align][align=center][size=13px]Sil-NaUA[/size][size=13px] [/size][size=13px](b, c)[/size][size=13px] columns[/size][/align][align=center][size=13px]Experimental conditions: [/size][size=13px]eluent,[/size][size=13px] CH[/size][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][size=13px]OH/ACN/H[/size][font='times new roman'][size=13px]2[/size][/font][size=13px]O (65:17.5:17.5, v/v/v)[/size][size=13px] for (a, b), [/size][size=13px]CH[/size][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][size=13px]OH/ACN/[/size][size=13px]IPA[/size][size=13px] (60:20:20, v/v/v)[/size][size=13px] for (c)[/size][size=13px] [/size][size=13px] f[/size][size=13px]low rate[/size][size=13px],[/size][size=13px] 1.0 mL/min[/size][/align][align=center][/align]我们进一步将Sil-VDI和Sil-NaUA色谱柱用于了鸡蛋黄磷脂提取物的分析。对于鸡蛋黄磷脂样品，[font='宋体']如图[/font][font='宋体']所示，以甲醇[/font]/[font='宋体']乙腈[/font]/[font='宋体']水([/font]50:34:16，v/v/v[font='宋体'])为流动相，在[/font]Sil-VDI[font='宋体']色谱柱中同样可分离出[/font]6[font='宋体']个主要色谱峰。在相同的条件下，[/font]Sil-NaUA[font='宋体']色谱柱仅可分离出[/font]2[font='宋体']个主要色谱峰。进一步优化洗脱条件，以甲醇[/font]/[font='宋体']乙腈[/font]/[font='宋体']异丙醇([/font]40:40:20，v/v/v[font='宋体'])为流动相，如图[/font]4-2c[font='宋体']所示[/font]，Sil-NaUA[font='宋体']色谱柱可进一步分离出[/font]3[font='宋体']个主要色谱峰。显然，[/font]Sil-VDI[font='宋体']色谱柱在分离鸡蛋黄磷脂提取物时同样展示了更高的分离选择性。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009301128537986_8147_3890113_3.png[/img][/align][align=center][size=13px]鸡蛋黄磷脂样品在[/size][size=13px]Sil[/size][size=13px]-VDI[/size][size=13px]（[/size][size=13px]a[/size][size=13px]）和[/size][size=13px]Sil-NaUA[/size][size=13px]（[/size][size=13px]b[/size][size=13px]，[/size][size=13px]c[/size][size=13px]）色谱柱中的分离谱图[/size][/align][align=center][size=13px]实验条件：[/size][size=13px]（[/size][size=13px]a[/size][size=13px]，[/size][size=13px]b[/size][size=13px]）[/size][size=13px]流动相，[/size][font='宋体'][size=13px]甲醇[/size][/font][size=13px]/[/size][font='宋体'][size=13px]乙腈[/size][/font][size=13px]/[/size][font='宋体'][size=13px]水[/size][/font][size=13px]（[/size][size=13px]50:34:16[/size][size=13px]，[/size][size=13px]v/v/v[/size][size=13px]），[/size][size=13px]（[/size][size=13px]c[/size][size=13px]）[/size][size=13px]流动相，[/size][font='宋体'][size=13px]甲醇[/size][/font][size=13px]/[/size][font='宋体'][size=13px]乙腈[/size][/font][size=13px]/[/size][font='宋体'][size=13px]异丙醇[/size][/font][size=13px]（[/size][size=13px]40:40:20[/size][size=13px]，[/size][/align][align=center][size=13px]v/v/v[/size][size=13px]）；流速，[/size][size=13px]1.0 mL/min[/size][/align]