卡巴匹林钙

喹噁啉类药物的危害及检测目的喹噁啉类药物是一类化学合成类的抗菌促生长剂，它们的基本结构是喹噁啉-1,4-二氧化物，即喹噁啉环。主要包括喹乙醇、卡巴氧、喹喔啉、喹赛多、喹多辛、西诺喹多、德那资多（肼多司）、乙酰甲喹和喹烯酮等药物。研究表明，喹噁啉类药物对DNA致突变、致损伤，破坏细胞抗氧化作用系统，可以引起细胞自由基的产生，导致细胞DNA发生氧化性损伤，还会引起细胞周期阻滞和细胞凋亡。传统喹噁啉类药物喹乙醇和卡巴氧，由于其对人体危害最/大，世界各国和国际组织对这两种兽药制定了严格的残留限量规定。欧盟1998年发文禁止喹乙醇和卡巴氧在食品动物生产中作为促生长添加剂使用。2020年我国生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药zui/大残留限量》中规定了猪肌肉和猪肝脏组织中喹乙醇残留标志物的zui/大残留限量。同年我国农业农村部公告第250号规定卡巴氧及其盐、酯为食品动物中禁止使用的药品。但是，这些药物在生产实践中被大量地非法使用或滥用，其残留对消费者健康造成了巨大的潜在威胁。喹乙醇和卡巴氧进入动物体内后，能够在短时间内代谢成十多种产物，研究表明，3-甲基-喹噁啉-2-羧酸（MQCA）是喹乙醇在动物体内代谢后的主要产物，喹噁啉-2-羧酸（QCA）是卡巴氧在动物体内代谢后的主要产物，且该产物在动物体内滞留时间较长，因其含量与总残留关系稳定，所以将MQCA定为喹乙醇在动物体内代谢的残留标示物，将QCA定为卡巴氧在动物体内代谢的残留标示物。本文阐述了如何将卡巴氧、喹乙醇及代谢物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB/T 20746-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。检测项目：卡巴氧、脱氧卡巴氧、喹噁啉-2-羧酸（QCA）、3-甲基-喹噁啉-2-羧酸（MQCA）应用范围：牛、猪肝脏和肌肉液相色谱-串联质谱法方法原理：卡巴氧：用乙腈+乙酸乙酯（1+1）溶液提取肌肉和肝脏组织中的卡巴氧，提取液经正己烷脱脂后，旋转蒸发至干，残渣用甲酸（0.1 %）+甲醇（19+1）溶液溶解。样液供液质测定，内标法定量。脱氧卡巴氧、QCA、MQCA：用甲酸溶液消化试样，使组织中天然存在的酶失活，然后加入蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过滤后，过Oasis MAX固相萃取柱或相当者净化。先用二氯甲烷洗脱脱氧卡巴氧，再用2 %甲酸乙酸乙酯溶液洗脱QCA和MQCA，氮气吹干洗脱液，残渣用甲酸+甲醇（19+1）溶液溶解，样液供液质测定，内标法定量。 前处理仪器：固相萃取装置；氮气浓缩仪；液体混匀器；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；真空泵；均质器；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯离心管（50 mL具塞）；pH计（测量精度±0.02 pH单位）；低温离心机（可制冷到4 ℃）；玻璃离心管（15 mL）。检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源试样制备与保存将牛、猪肝脏和肌肉组织样品充分搅碎，均质，分出0.5 kg作为试样，置于清洁样品容器中，密封，并做上标记。将制备好的试样于-18 ℃以下保存。前处理方法1. 卡巴氧的前处理步骤称取5 g试样（精确至0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，加入5 g中性氧化铝，加入25 mL乙腈+乙酸乙酯（1+1）溶液，于液体混匀器上充分混合5 min，以5000 r/min离心5 min，将上清液移取至另一干净的50 mL离心管，加入10 mL正己烷到管中，振荡2 min，以5000 r/min离心5 min，弃去上层正己烷，将下层清液转移至150 mL鸡心瓶中。加入25 mL乙腈+乙酸乙酯（1+1）溶液，重复提取一次，正己烷除脂后合并两次提取液于同一鸡心瓶中，加入一定量的喹噁啉-2-羧酸-d4（QCA-d4）标准溶液，使其浓度为2.0 ng/g，40 ℃水浴减压旋转蒸发至干。准确加入1.0 mL 0.1 %甲酸-甲醇（19+1）溶液溶解残渣，过0.2 μm滤膜后，供液质测定。2. 脱氧卡巴氧、喹噁啉-2-羧酸、3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的前处理步骤称取5 g试样（精确至0.01 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL 0.6 %甲酸溶液，混匀后，置于（47±3）℃振荡水浴中振摇1 h；先加入3 mL1.0 mol/LTris溶液混匀，再加入0.3 mL 0.01 g/mL蛋白酶水溶液，充分混匀后，置于（47±3）℃振荡水浴中酶解16 h～18 h。加入20 mL 0.3 mol/L盐酸溶液，振荡5 min，在10 ℃以5000 r/min离心15 min，上清液过滤。将滤液移入Oasis MAX固相萃取柱（3 mL甲醇和3 mL水活化）中，待样液全部流出后，用30 mL 0.05 mol/L乙酸钠-甲醇（19+1）溶液淋洗固相萃取柱，真空抽干15 min。在一支干净的玻璃管内加入一定量的喹噁啉-2-羧酸-d4（QCA-d4）标准溶液，使其浓度为2.0 ng/g，再用4×3 mL二氯甲烷将脱氧卡巴氧洗脱至管内，在45 ℃用氮气浓缩仪吹干。固相萃取柱再用3×3 mL甲醇、3 mL水、3×3 mL 0.1 mol/L盐酸溶液和2×3 mL甲醇-水（1+4）溶液分别淋洗，真空抽干15 min，然后用2 mL乙酸乙酯再淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液，最后用3 mL 2 %甲酸乙酸乙酯溶液洗脱喹噁啉-2-羧酸（QCA）和3-甲基-喹噁啉-2-羧酸（MQCA）到上述吹干的试管中，在45 ℃用氮气浓缩仪吹干。准确加入1.0 mL 0.1 %甲酸-甲醇（1.标准物质分别用甲醇配制成100 m-d4）同位素内标进行回收率的校正，也可以配合使用各个化合物相对应的同位素内标。

一、实验目的本实验利用固相萃取法作为皮革样品的前处理方法，对PolyClean X-PAmide小柱进行评价。 二、实验目标物六价铬(Cr6+) 三、应用范围本方法使用于皮革样品的脱色以及六价铬含量的测定。 四、参考标准《GB/T 22807-2008《皮革和毛皮 化学实验 六价铬含量的测定》和《EN ISO 17075-2007 皮革--化学试验--铬(VI)含量的测定》。五、实验材料PolyClean X-PAmide小柱 500mg/6mL(9B-P006-06500) 。 六、实验方法1、样品提取(1)称取2 g剪碎的皮革样品，吸取100 mL脱气后的萃取液(22.8 g三水磷酸氢二钾溶于1 L水中，用磷酸调节pH至8 ± 0.1，再用氮气或氩气排出氧气) 加入皮革样品，盖上瓶塞。(2) 在 机 械 震 荡 器 上 震 荡 3h， 萃 取 Cr6+ 。 (3)萃取完成后，通过薄膜滤器将锥形瓶中的溶液过滤，待净化。检查溶液的pH值，应为7.5 - 8.0，如果不在此范围，则需重新提取。 2、SPE柱净化(1)活化：5 mL甲醇，5 mL水，10 mL萃取液。(2)上样：取10 mL待净化液过柱，收集上样液于25 mL容量瓶，用10 mL萃取液淋洗，一并收集，用萃取液定容至刻度。 3、六价铬含量测定(1)移取净化后的溶液于25 mL容量瓶中，用萃取液稀释至容量瓶的3/4，加入0.5 mL磷酸溶液和0.5 mL二苯卡巴肼溶液(1%，酸性) 用萃取液定容，摇匀，静置15 min。(2)以空白溶液按上述操作显色，作为参比溶液。 (3)每次测试样品，同时取净化后的溶液于25 mL容量瓶，不加显色剂，直接用萃取液定容。(4)将上述溶液用1 cm比色皿在540 nm处测量吸光度。七、脱色效果图1 菲罗门色素小柱PolyClean X-PAmide脱色效果如图1所示， PolyClean X-PAmide专用柱没有被色素穿透，净化后样品几乎无色。八、实验结果1、校正曲线绘制配制1 μg/mL的六价铬标准溶液，使用7个不同浓度的溶液绘制校正曲线。移取一定体积的标准溶液，加入显色剂并用萃取液定容，15 min后比色。同时以空白溶液按同样操作进行显色，作为参比。以六价铬浓度(1 μg/mL)作为X轴，以吸光度作为Y轴绘制标准曲线。(图2)

相关新闻专题：奥林巴斯“丑闻”引仪器行业深思 　　记者手记：揭开日本企业黑幕的“洋和尚” 　　新华网东京11月25日专电 日本奥林巴斯光学工业公司前总裁、英国人迈克尔伍德福德大概是近期在日本最受关注的外国人。这个外来“洋和尚”单枪匹马捅开了奥林巴斯20年来隐瞒上千亿日元投资亏损、借助不当并购填埋账本黑洞的惊天黑幕。25日，伍德福德现身位于东京的驻日外国记者俱乐部，受到数百名海内外记者热捧。 　　伍德福德23日来到日本，这是他上月遭奥林巴斯董事会解除总裁职务以来首次返回日本。24日，他前往东京地方检察厅、东京都警视厅、日本证券交易监督委员会等部门配合调查，25日还以董事身份出席奥林巴斯董事会。 　　在当天的记者会上，伍德福德回顾了今年4月出任奥林巴斯总裁到10月遭董事会解职的经历，戏称自己所遭遇的一切堪比悬疑小说，“刺激万分”。伍德福德说，他今年夏季通过日本一家杂志首次得悉公司以往涉嫌不当并购的线索后，决心追查此事并要求追究前总裁菊川刚等公司高层责任，不料很快反遭菊川刚操控的公司董事会解职。 　　孤身返回英国的伍德福德决定反击。他的策略是向西方主流媒体报料。这一策略成功了。《金融时报》《华尔街日报》《纽约时报》等海外媒体开始“群殴”奥林巴斯。大约一周后，这一话题“出口转内销”，连日占据日本主流媒体的重要版面，迫使奥林巴斯11月8日首次承认隐瞒巨额亏损事宜，也促使日本证券监管和司法部门正式介入调查。 　　伍德福德坦言，他在日本遭遇“文化冲击”，对奥林巴斯的管理层职业伦理和企业内部文化深感震惊。他举了两个例子。其一，出任总裁后，他向时任副总裁的森久志询问对方工作哲学，森回答“唯菊川刚会长是从”。其二，在决定伍德福德乃至公司前途的那次临时董事会上，当菊川刚等人提议以违反公司利益为由解除伍德福德职务时，董事会所有其他成员毫无异议，齐刷刷举手通过，“像小学生在课堂里上课那样”。 　　不可否认，在海外媒体面前，伍德福德成功地把自己塑造成挑战日本企业文化阴暗面的“斗士”。但同样毋庸置疑的是，出于日本独特的企业治理结构和社会潜在的对“外来和尚”的排斥心理，如果没有与海外媒体的“结盟”，伍德福德可能就是一个孤军作战的堂吉诃德。事实上，那家日本杂志今夏率先曝出奥林巴斯所涉丑闻时，根本没能引来日本主流媒体和监管当局的关注目光。 　　在回答提问时，伍德福德毫不掩饰对日本监管当局的不信任。他说，自己当时向日本相关部门六次上书反映公司黑幕，均石沉大海。伍德福德向在场数百名海内外记者设问：多少人相信奥林巴斯事件取得进展缘于当局努力?举手者寥寥。再问：多少人认为这是由媒体曝光所推动?响应者众。 　　11月25日，日本奥林巴斯光学工业公司英籍前总裁迈克尔伍德福德在东京出席新闻发布会。伍德福德24日在日本首都东京就企业隐瞒投资亏损接受检方、警方和证券监管部门问询。这是他上月遭解职以来首次返回日本接受调查。新华社/法新 　　有媒体质问，伍德福德如此穷追猛打奥林巴斯，是否有泄私愤的一面。伍德福德正色说，奥林巴斯在欧美市场的销售额占公司总销售额的七成，它不仅仅是一家日本公司，更是一个有影响力的跨国公司，有义务对海内外投资者负责。 　　奥林巴斯东窗事发后，也让日本企业界整体形象蒙羞。日本也有一些舆论担心，此事可能让市场扩大“打击面”，质疑更多日本企业的财务可信度和公司治理机制。对此，伍德福德强调，奥林巴斯的问题不在员工，不在技术，就在于企业领导层的胆大妄为和内部监管缺位。他并不讳言，自己愿意回来执掌奥林巴斯。 　　然而，据一些日本媒体报道，奥林巴斯现行高管放风要以违反企业纪律为由对伍德福德采取法律行动。同时，在大洋彼岸的美国，一些投资者开始对包括伍德福德、菊川刚在内的若干奥林巴斯前高管发起集体诉讼。伍德福德则透露，他的下一站是美国，将会接受联邦调查局等美方执法机构的相关调查听证。 　　看来，伍德福德和奥林巴斯的“战火”也好，麻烦也好，恐怕还将继续。且不论结局如何，对于关注这一事件的众多看客来说，应当说这是透视日本企业文化和管理模式的一个良好机会。 　　11月25日，日本奥林巴斯光学工业公司英籍前总裁迈克尔伍德福德在东京出席新闻发布会。伍德福德24日在日本首都东京就企业隐瞒投资亏损接受检方、警方和证券监管部门问询。这是他上月遭解职以来首次返回日本接受调查。新华社/法新 　　11月25日，日本奥林巴斯光学工业公司英籍前总裁迈克尔伍德福德在东京出席新闻发布会。伍德福德24日在日本首都东京就企业隐瞒投资亏损接受检方、警方和证券监管部门问询。这是他上月遭解职以来首次返回日本接受调查。新华社/法新