糖基木聚糖

全新的 Agilent 6560C 离子淌度 Q-TOF LC/MS 系统将色谱、离子淌度和质谱相结合，可提供出众的分离能力与选择性。6560C Q-TOF LC/MS 还可揭示传统 LC/MS 系统无法提供的结构信息，包括通过高分辨率多重性分解 (HRdm) 分离同类异构体。该系统采用创新的电动离子漏斗技术，可显著提高灵敏度，同时保持有利的低场漂移管设计。这使您能够直接测量准确的碰撞截面 (CCS) 并保留不稳定目标物。无论您是寻求对代谢组学样品进行更全面的分析，表征复杂的聚合物混合物，还是要了解生物分子的结构变化，离子淌度质谱都能提供新的信息。 特性：能够在没有标准品的情况下实现基于第一性原理的碰撞截面准确测量。将 UHPLC、离子淌度和高分辨率质谱相结合，提供极高的分离能力。更好地分离各类复杂的同质异位物质，例如脂类和多聚糖。深入表征不同结构构象和同分异构化合物。采用低能量漂移管设计，保证气相中分子的结构保真度。多重分解可显著提高灵敏度和动态范围，提升达一个数量级。使用安捷伦高分辨率多重性分解 (HRdm 2.0) 软件进行后处理，可实现高达 200 的全谱离子淌度分辨率。用于蛋白质定量结构分析的碰撞诱导去折叠 (CIU) 技术包括诱导分子碎裂的源内活化。在不影响 UHPLC 兼容的分离度的情况下，可使用高达 5 Hz 的采集速率。利用安捷伦 VacShield 真空盾，无需放空即可取出毛细管。性能指标：MS 灵敏度S/N (RMS) 50:1. Measured with 1pg reserpine on columnMS 质量准确度（正离子）1 ppm RMSMS 采集速率50 幅谱图/秒MS/MS 质量准确度（正离子）2 ppm RMSMS/MS 采集速率30 幅谱图/秒TOF 质量分辨率 (FWHM) 在 m/z 2722 处为 42000，与采集速率无关TOF 质量范围m/z 20-20,000四极杆分离质量范围m/z 20-4000四极杆分辨率 (FWHM)1.3 Da（自动调谐）支持的附加软件MassHunter BioConfirmClassifierMassHunter VistaFluxLipid AnnotatorMass Profiler Professional无需放真空的维护VacShield 真空盾技术温度质量稳定性1 ppm / 3 °C离子淌度分辨率 (FWHM)200离子源Dual-AJSMultiMode (ESI+APCI)Dual-ESIGC/APCIAPCINanoESI谱图内动态范围5 个数量级软件平台MassHunter工作原理：安捷伦 LC/Q-TOF 系统结合 e-MSion 的 ExD 池实现 ECD 功能结合使用 e-MSion 的 ExD 池与安捷伦 LC/Q-TOF 系统，通过快速有效的电子捕获解离 (ECD) 显著改善蛋白质形式的整体表征。ECD 可以实现更出色的多聚糖和二硫键定位表征，以及不稳定翻译后修饰的鉴定。e-MSion ExD 可诱导侧链断裂，从而区分同质异位素氨基酸和影响生物药物质量的其他降解产物，而 Q-TOF 的主要功能（如传输效率、灵敏度或分辨率）保持不变。

一、前言作为物质存在的第四种状态的等离子体通常由电子、离子和处于基态以及各种激发态的原子、分子等中性粒子组成。等离子体中带电离子间库伦相互作用的长程特性，是带电粒子组分的运动状态对等离子体特性的影响起决定性作用，其中的电子是等离子体与电磁波作用过程中最重要的能量与动量传递粒子，因此，等离子体中最重要的基本物理参数是电子密度及其分布以及描述电子能量分布的函数以及相应的电子温度。而对于中高气压环境下产生的非热低温等离子体来说，等离子体中的主要组分是处于各种激发态的中性粒子，此时除了带电粒子外，中性粒子的分布和所处状态对等离子体电离过程和稳定性控制也起着非常重要的作用，尤其是各种长寿命亚稳态离子的激发。为了可以充分描述等离子体的状态，在实验上不仅要对带电粒子的分布和运动状态进行诊断，如电子温度、电子密度、电离温度等参数，还需要对等离子体中的中性粒子进行必要的实验测量，来获得有关物种的产生、能量分布以及各个激发态布居数分布等信息，如气体温度、转动温度、振动温度、激发温度等参数。基于这种要求，结合相关学科的各种技术形成了一个专门针对等离子体开展诊断研究的技术门类，如对等离子体中电子组分的诊断技术有朗缪尔探针法（Langmuir Probe），干涉度量法(Interferometer)，全息法(Holographic Method)，汤姆逊散射法(Thomason Scattering, TS)，发射光谱法(Optical Emmission Spectroscopy, OES)等，对离子组分的光谱诊断技术有光腔衰减震荡(Cavity Ring-Down Spectroscopy, CRDS)和发射光谱法(OES)，而对中性粒子的光谱诊断技术包括了吸收光谱法(Absorption Spectroscopy, AS)，发射光谱法(OES)，单光子或者双光子激光诱导荧光(Laser Induced Fluorescence, LIF)等。二、汤姆逊散射（Thomson Scattering）基于激光技术发展起来的汤姆逊散射诊断原本用于高温聚变等离子体的测量，借助激光技术和光电探测技术的突飞猛进，汤姆逊散射在近年也大量应用于低温等离子体的密度和电子温度的测量。汤姆逊散射具有空间分辨率高（局域测量），测量值稳定可靠等优点。测量的物理量：电子温度：下限0.1e密度：下限1019m-3.图1. 汤姆逊散射分析系统结构示意图2.1、激光束在等离子体中的束斑大小（束径DLP）激光束经过透镜聚焦，等离子体应该位于透镜的焦点，以达到激光束在等离子体中有最小的束径，最高的功率密度。DLP = f´ q其中f是聚焦透镜的焦距，q是激光束发散角，考虑各种综合因素，实际束径是上述公式的2倍左右。假设使用f=1000mm的聚焦透镜和q=0.5mrad的激光束，DLP大约是1mm。2.2、收集光学系统的光纤的像斑（fP）与等离子体中激光束径DLP的匹配为了有效的收集激光束上的散射光子，光纤的像斑fP应该完全覆盖激光的束径。理想情况是光纤的像斑与DLP尺寸完全相同，并且二者完全重合，这样激光的散射光最大，同时背景非散射光最小。但是考虑到实际的准直的难度，这样的理想条件在有限的资金投入下很难实现。建议fP是DLP的两倍，既能有效的收集散射光子，也能比较容易准直。如果DLP =1mm, fP =2mm是比较合适的。2.3、光纤的芯径、布局和光谱仪以及ICCD的选择汤姆逊散射谱线展宽与温度的关系如下：汤姆逊散射角度 Theta=90度；me是电子质量，c是光速，kB是玻尔兹曼常数，公式右边分母下面：是激光的波长 532nm；分子是谱线展宽，不过是1/e展宽因此汤姆逊散射光谱的半高宽△λ1/e（nm）与等离子体温度Te（ev）的关系可以简化为△λ1/e=1.487×Te1/2Te eV0.10.20.30.4124510△λ1/e nm0.470.530.810.941.492.102.973.324.70表1. 电子温度与汤姆逊散射谱半高宽对应值在光谱仪没有入射狭缝或者入射狭缝宽度超过光纤的芯径的情况下，光纤的芯径实际决定了谱仪的实际分辨率（仪器展宽）：△λof = fof ´ LSPfof是光纤的芯径，LSP是谱仪的倒线色散率。针对于此应用，可以考虑选择两款光谱仪，分别是：1、Zolix 北京卓立汉光仪器有限公司的Omni系列 750mm的谱仪，如果使用1200l/mm的光栅，LSP = 1nm/mm。测量电子温度的原则是仪器展宽应该与最低温度的展宽相当，才能有效的测量到最低温度。2、选用207（670mm焦距）光谱仪，在搭配1200l/mm光栅的情况下，LSP=1.24nm/mm，可以满足要求。同时可以考虑搭配1800l/mm光栅，这样的话可以兼容高电子温度和低电子温度的同时测量，以及同时兼顾高分辨和宽光谱。原则上，使用芯径400mm的光纤，△λof=0.4-0.48nm，完全符合0.1eV的测量要求。但是还是建议谱仪安装入射狭缝，靠狭缝来控制分辨率，不仅确保0.1 eV的测量要求，还能实现更低的温度测量。同时在调试阶段，靠狭缝来控制通光量，以免532nm的激光杂散光太强，对ICCD造成破坏。另一方面ICCD的尺寸决定了光纤的排布数量。光纤数量越多，对汤姆逊散射这种微弱光测量是越有利的。在信号很弱的时候，可以把几道合成一道使用，以增加信噪比，提高信号质量。因此在波长覆盖范围（CCD的横向尺寸）满足要求的情况下，ICCD的纵向尺寸应该尽量大一些，以便容纳更多的光纤。选用iStar 334T探测器，这款CCD的尺寸是13.3 ´ 13.3 mm，对焦距目前的光谱仪无论是Omni-750还是207在搭配1200l/mm光栅的情况下，波长覆盖范围是13nm左右，同时纵向13.3mm，容纳的光纤数量也更多，可以做更多的多道光谱。如果已有更大面阵的CCDsCMOS或高速相机，可以考虑使用Zolix 卓立汉光的IIM系列镜头耦合像增强模组与之配合，达到类似ICCD的功能和效果，同时获得更大的相机选取自由度；IIM 内部可以选择25mm 尺寸的增强器，1：1耦合到CCD, 可以获得更大的成像面，双层增强器也可以获得更高的增益；光纤的布局是一字型密集排布，在13mm的长度内，尽量的密布尽可能多的光纤。同时光纤应该严格排列在一条直线上，整排光纤的偏心距小于20mm。2.4、收集透镜的选择等离子体中心到透镜的距离L和光纤的芯径，及像斑决定了收集透镜的焦距。举例如下：如果像斑要求是fP =2mm，光纤芯径400mm, 则物像比是4，如果L=320mm, 则透镜的焦距就是320/4=80mm。同时如果观测的等离子体范围是50mm，那光纤一字排开的范围就是50mm/4=12.5mm。这个宽度和连接谱仪一侧的光纤束的尺寸很接近了，连接收集透镜一侧光纤也应该是密集排布，这样两端容纳的光纤数量就是匹配的。2.5、瑞利散射的滤除与使用瑞利散射信号通常也可以用来测试重粒子的相关信息比如中性原子。但是相比于瑞利散射法来说，作为弹性散射的汤姆逊散射法更多用于自由电子的测试。和离子与原子相比，由于自由电子的速度更快，质量更轻，因此具备更宽的光谱展宽。比较强的杂散光信号与更强的瑞利散射信号则可以通过例如布儒斯特窗、笼式结构或者黑丝挡板的方式滤除掉。图2 滤除瑞利散射的笼式结构示意光路因此在实际的测试过程中，如何合理地使用这些信号为等离子体诊断服务，则是另一个相关的话题。如图3[1]所示，为实际测试过程中得到的瑞利与汤姆逊散射信号如图4[2]所示，为实际测试过程中得到的滤除瑞利散射后的汤姆逊散射信号图3 包含瑞利散射与汤姆逊散射的实测信号图4 滤除瑞利散射后的汤姆逊信号2.6其他附属部件光电倍增管谱仪第二出射口配宽度可调的狭缝三维调整光学支架，用以调节镜头的方位和方向三、整体解决方案汇总推荐根据用户需求，一般推荐的配置如下：光谱仪：Zolix 北京卓立汉光仪器有限公司的Omni-500I 或750i光谱仪搭配1200l/mm和1800l/mm的全息光栅高光通量光谱仪，搭配120*140mm 或110*110mm 的大尺寸，高分辨率的1200l/mm光栅和1800l/mm光栅探测器：ICCD, 18mm 增强器，13*13mm 探测面；Zolix卓立汉光 公司的IIM-A系列 镜头耦合像增强模组，配合更大面阵的CCD或sCMOS相机， 18mm或25mm 的大面积增强器，灵活的CCD 相机选择； DG645数字延迟脉冲发生器：用于系统触发控制标准A光源，用于系统强度校准其他的配件：包括多道光纤，收集光路，可以后续一并考虑，先购买标准部件参考文献[1] Yong WANG, Cong LI, Jielin SHI, et al. Measurement of electron density and electron temperature of a cascaded arc plasma using laser Thomson scattering compared to an optical emission spectroscopic approach[J]. Plasma Sci. Technol. 19 (2017) 115403 (8pp) [2] Ma P, Su M, Cao S, et al. Influence of heating effect in Thomson scattering diagnosis of laser-produced plasmas in air[J]. Plasma Science and Technology, 2020.

1290 Infinity II 生物液相色谱系统是一种由生物兼容性材料组成的二元 UHPLC，适用于生物制药（如关键质量属性）及其他高盐和极端 pH 条件下的应用。生物兼容性可确保生物分子的完整性和系统的稳定性。 该系统基于久经验证的 1290 Infinity II 液相色谱技术，不仅可以轻松实现方法转移（包括从旧仪器进行转移），还可以节省培训时间和精力。在 1300 bar 高压下实现高分离度和极低的扩散。多种生物惰性流通池可用于高灵敏度紫外检测。特性：生物兼容性溶剂和样品流路可确保生物分子的完整性，尽可能减少不必要的表面相互作用各种生物附件，包括一系列生物热交换器、生物毛细管工具包、生物定量环和分析头，可实现仪器的多功能性和高效率，从而满足各种应用需求适合所有应用的出色灵活性 — 更宽的性能范围和温度范围、可自动扩展的进样范围以及梯度选件（二元和四元溶剂混合）整个系统延迟体积极小，可实现超高的色谱分离度和极低的扩散高耐盐性和宽 pH 范围可增强灵活性与耐用性，延长仪器正常运行时间基于久经验证的 1290 Infinity II 技术，可轻松实现方法转移（包括从旧仪器进行转移），减少培训工作浅微孔板抽屉最多可容纳 6144 个样品，具有出众的样品容量功能强大，高达 1300 bar 的超高压力和高达 5 mL/min 的高分析流速，可实现出色的 UHPLC 性能各种流通池可实现广泛、灵敏的光学检测能力，可用于 VWD、DAD、FLD、生物惰性 MDS 或 LC/MS 检测，从而实现超高的适应性卓越性能和可持续性：1290 Infinity II 液相色谱系统经过独立审计，确认其在整个产品生命周期对环境的影响后，获得了 My Green Lab ACT（归责性、一致性、透明度）标签。性能指标宽度435 mm智能系统模拟技术可选泵类型二元泵全能泵流速范围使用 G7132A 和 G7131A 流速高达 5 mL/min深度468 mm温度区域的最大数量2溶剂最大数量2 (High-Speed Pump): 2 out of maximum 26 solvents4 (Flexible Pump): Internal 4-solvent gradient formation valve included.Internal 4-solvent selection valve included.External 2 x 12 solvent valve as option, fully integrated in the pump control interface.External 2 x 12 solvent valve as option, fully integrated in the pump control interface特殊功能BlendAssist缓冲液顾问软件生物兼容Yes电源电压100-240 VAC系统压力操作范围最高 1300 bar系统类型生物分析梯度色谱柱 ID 读取器选件可选色谱柱容量8进样量范围0.001–500 µ L0.1–1500 µ L，配备多次抽取工具包工作原理：通过灵敏的紫外检测分析核苷酸生物色谱分析（如 Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱）通常需要更灵敏的紫外检测，以降低检出限，但这也带来了一定的缺点。更高的灵敏度通常意味着分析物需要暴露在更强的光照下。对于易受入射紫外光能量影响的分析物而言，这可能会导致难以察觉的降解。阅读本应用简报，了解如何将 Agilent InfinityLab 最大光强卡套式流通池 LSS 用于光敏样品，同时保留紫外检测器的分析结果。ISET 助力色谱方法转移对不同类型的 HPLC 和 UHPLC 系统而言，生物分离运行也可能会有很大的差异。通过增加额外的体积或等度保持步骤可以克服这些系统体积和泵行为差异。安捷伦提供了一种基于先进的数据驱动型技术的解决方案，即智能系统模拟技术 (ISET)，它可以设置相同的时间偏移并模拟不同的梯度扩散，从而实现成功的方法转移。仪器安装后提供 30 天的免费试用。高分离度 Bio SEC 和聚集体监测为实现最佳体积排阻色谱 (SEC) 分离，选择专用的色谱柱和消耗品以及具有极低扩散性的合适 UHPLC 至关重要。Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱配备超低扩散毛细管，具有极小的系统死体积，与 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱联用，非常适用于分析单克隆抗体 (mAb) 和 mAb 衍生的治疗药物。此配置可确保蛋白质聚集体研究中关键质量属性 (CQA) 分析实现极高分离度性能。应用：Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱为您提供核苷酸分析所需的惰性1290 Infinity II 生物液相色谱系统主要由 MP35N 制成，流路中采用不含铁的不锈钢部件。该生物兼容性液相色谱系统专为生物色谱分析而设计。即使在高达 8 mol/L 尿素的高盐浓度以及高/低 pH 溶剂中也可以长期使用而不出现磨损，同时保持出色的重现性和稳定性。因此，1290 Infinity II 生物液相色谱在分析对铁敏感的磷酸化核苷酸（如 AMPcP 和腺苷）时表现出优异的性能。使用 IEX 和 Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统进行寡核苷酸分析寡核苷酸分析中常使用离子对反相色谱法，但离子交换色谱法更适用于某些特定的分析。随着对寡核苷酸需求的增加，各种寡核苷酸的大小也因用途而异，因此我们需要仔细选择合适的分离模式。通过选择阴离子交换色谱法，可以对杂质进行检测。本应用简报证明了 Agilent Bio SAX 色谱柱在寡核苷酸分析中的通用性，并提供了用于进一步方法开发的推荐起始条件。多聚糖分离的分离度和速度单克隆抗体 (mAbs) 属于免疫球蛋白 G (IgG)，是一类现代生物治疗化合物，通过分子中蛋白质部分的构象及其 N-糖基化模式定义。糖基化模式对于 mAbs 的疗效非常重要，因此糖基化模式的生物色谱分析是 QA/QC 过程的关键步骤，也是 mAbs 关键质量属性 (CQA) 的一部分。本应用简报展示了使用 1290 Infinity II 生物液相色谱系统对荧光标记多聚糖的分离。