甲基硫胂液剂

DNA甲基化是哺乳动物基因组中最常见的表观遗传事件之一，即DNA中核苷酸与甲基基团的共价修饰[2]。DNA甲基化与人的生命进程有着密不可分的关系。细胞的增殖与分化、染色体完整性的维护或者X染色体的活性等等都离不开DNA甲基化的控制，DNA甲基化流程在胚胎发育中是无处不在的[1]。如果DNA甲基化进程出现异常，会导致生物体出现各种各样的疾病以及身体的生长缺陷或生理紊乱。DNA与蛋白质之间的相互作用如果出现异常，会影响基因的表达，从而引起人体内肿瘤的发生或者肿瘤的转移，这一切的源头都是DNA甲基化进程出现异常的结果[3]。DNA甲基化酶是肿瘤治疗靶点DNA甲基化酶是一种修饰酶，经常与限制性内切酶一同出现。在真核生物基因组以及原核生物基因组中，普遍存在DNA甲基化酶维持以及催化DNA甲基化过程的现象。DNA甲基化酶被广泛认为是一种治疗靶点以及预测生物甲基化过程的标志物，在单细胞水平上准确灵敏地检测DNA甲基化酶对于肿瘤医学上的临床诊断以及临床治疗甚至是生物学研究有着至关重要的作用。根据甲基化的核苷酸和位置被分为三组，即腺嘌呤的甲基化、胞嘧啶的4-N甲基化和胞嘧啶的5-C甲基化。所有已知的DNA甲基化酶在其甲基化过程中以s-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体。最常见的DNA甲基化不仅发生在胞嘧啶嘧啶环5-C位置的CpG位点上，还发生在对称四核苷酸5’-G-A-T-C-3’ 中腺嘌呤环的6-N位置[4,5]。传统DNA甲基化酶检测方法有局限 DNA甲基化酶活性的高灵敏度检测在基因调控、表观遗传修饰、临床诊断和治疗等方面具有重要意义。传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC)[6], 聚合酶链反应(PCR)[7]，凝胶电泳[8]，高效毛细管电泳(HPCE)[9]，以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测[10,11]。尽管这些技术在实验室实践中被证明是有用的，但它们具有局限性。例如，大多数技术不仅使用笨重昂贵的设备，而且需要复杂的样品制备和数据分析所需的大量时间。同位素标记等技术是有效的，但它们往往需要费力的样品制备、同位素标记、复杂的设备和大量的DNA，使得它们不适合在医护点使用。所以，DNA甲基化酶活性检测迫切需要简单、便携、高灵敏度和低成本的检测方法。在最近的技术进步中，许多替代的DNA甲基化酶活性测定方法，如放射法、比色法、荧光法、电化学法等已被提出。此外，其中许多与纳米材料或酶结合，以显著提高它们的敏感性。放射法、蛋白质纳米孔等新型检测技术兴起 放射法：同位素标记作为最早检测DNA甲基化酶活性的方法之一，早期广泛应用于检测DNA甲基化酶和DNA甲基化的活性[12,13]。在由DNA甲基化酶催化的甲基化过程中，同位素标记的甲基部分转移到DNA上，从而赋予甲基化的DNA放射性。这种放射性可以很方便地用闪烁计数器或放射自显像仪来检测。可惜的是，放射性试剂的介入是限制这种试验在中央实验室进行的最大缺点。对无辐射DNA甲基化酶活性检测的研究导致了甲基化特异性PCR[14]、HPCE[9]和HPLC等替代品的发展[7,14]，而甲基化特异性PCR被认为是较好的方法。尽管非放射性，上述DNA甲基化酶活性检测需要庞大且通常昂贵的设备，冗长且耗时的样品制备和数据分析，以及繁琐的检测方案，这在临床实践中也比较难以实现全覆盖。比色法：比色法用于DNA甲基化酶活性检测依赖于颜色变化的目视观察或与DNA甲基化酶相关的吸收光谱的光谱测量。它们具有成本低、简单、可移植性和在某些情况下无需仪器的优点。虽然紫外-可见光谱法可以量化DNA，但甲基化和未甲基化DNA在紫外-可见吸收特性上的低灵敏度和不显著差异基本否定了紫外-可见光谱法直接检测DNA甲基化酶活性[15~17]。金纳米粒子：金纳米粒子(AuNPs)由于其表面的等离子体共振吸收的高消光系数且强依赖于粒子间距离，在DNA甲基化酶活性检测的比色法研究中引起了广泛关注。如图1 所示，金纳米粒子表面包覆有双链DNA (ds-DNA)，其中一条链包含DNA甲基化酶识别序列和5’-硫醇末端。在DNA甲基化酶存在的情况下，如图1 B 所示，DNA甲基化酶被共价标记在ds-DNA中碱基环的6-C位置，因为在5-N位置缺乏一个质子阻止了β-消除，甲基化的DNA不能被核酸外切酶 ExoⅠ剪切，因此金纳米粒子仍然均匀地分散在溶液中 [18]。从而实现DNA甲基化酶活性的检测。结果表明，在526 nm处，金纳米粒子聚集物的吸光度与DNA甲基化酶的活性呈2 ~ 32 U / mL的线性关系，检出限为0.5 U/ mL。图1. (A)基于ABP的比色生物传感器的示意图(B) DNA甲基化酶的检测机制 荧光法：荧光指吸收激发荧光团的光，以促进电子从基态到激发态，电子迅速地回到激发态的最低能级，然后当电子最终返回基态时，发出波长较长的光。与其他DNA甲基化酶活性测定法相比，荧光法检测DNA甲基化酶活性的优点是检测过程简单，灵敏度高，但其复杂的光学性能限制了其在集中实验室的应用[19~20]。图2. 基于外切酶的靶循环的DNA甲基化酶活性检测原理图电化学法：电化学生物分析技术的发展一直是现代分析化学研究的热点之一。电化学法用于DNA甲基化酶分析包括测量电流、电压、电荷和电阻等电量，以反映DNA甲基化酶的活性。与许多其他类型的DNA甲基化酶活性的检测相比，它们具有低成本、高灵敏度、执行现场监测的能力以及非常适合微型化和集成微制造技术的优点[22~23]。Zhi-Qiang Gao等人在2014年报道了一种简单、高灵敏度的DNA甲基化酶电化学活性测定方法。该方法采用电催化氧化抗坏血酸(AA)的信号放大手段，通过一个螺纹插层N,N -2(3-丙基咪唑)-1,4,5,8-萘二酰亚胺(PIND)电催化氧化还原Os(bpy)2Cl+ (PIND-Os)，包含5’-CCGG-3’ 对称序列的ds-DNA首先固定在金电极上。然后用DNA甲基化酶孵育电极，经过酶催化特定CpG二核苷酸的甲基化，然后用识别5’-CCGG-3’ 序列的限制性内切酶 Hpa II 剪切酶处理电极，从而实现DNA甲基化酶活性检测的目的[24]。图3. DNA甲基化酶活性的检测原理示意图蛋白质纳米孔：蛋白质纳米孔检测技术是在单分子水平上以低成本、无标签和高通量的方式研究生物分子的检测技术。近年来，纳米孔技术正从生物传感的角度进行研究[25]。应用于核酸特征鉴定、化学反应过程的测量、蛋白质分析、疾病相关蛋白状态的检测以及酶动力学的研究等[26]。α-溶血7素是一种蛋白质纳米孔，它自发地插入到脂质双层膜中，形成一个纳米孔[27]。当一个带电分子在外加电势下通过蛋白质纳米孔时，它会引起离子电流的瞬态变化，电流变化事件被记录下来。被分析物可以通过当前电流发生的频率进行量化，特征电流信号则可以揭示被分析物的各种特征[28~30]。该检测方法不需要对DNA探针进行任何化学修饰，既方便又节约成本，减少了样品消耗。 图4. 用于分析DNA甲基化酶活性的纳米孔试验的示意图 在过去的十几年中，DNA甲基化酶活性的检测取得了重大进展。有几种方法有希望可在临床检测，使得该方法在用于癌症诊断、预后和治疗方面显示出了希望。比色法依赖于颜色变化的目视观察或与DNA甲基化酶相关的吸收光谱的光谱测量，具有成本低、简单、可移植性和在某些情况下无需仪器的优点，但是检出限相对较高。荧光法检测DNA甲基化酶活性的检测过程简单，检出限相对理想，但其复杂的光学性能以及昂贵的仪器设备限制了其在生活中的应用。电化学法由于需要构建较复杂的反应电极材料而使得其在临床上受到了一定的限制。蛋白质纳米孔的检测方法不需要对DNA探针进行任何化学修饰，既方便又节约成本，减少了样品消耗，检出限相对较为理想，并且已经成功应用于人类血清样本。这类检测可能最终为常规DNA甲基化酶活性的检测和分子诊断打开大门，为疾病的管理和诊断带来新的前景。 作者：王家海、骆 乐 作者简介：王家海，博士，教授，硕士生导师/博士生导师，广州大学化学化工学院；分析化学专业；主要研究领域为“基于核算纳米结构为信号传导载体的纳米孔传感器”；在核酸探针和仿生纳米孔两方面开展了一系列分子识别的工作，也为将来进一步开展分析化学研究打下了坚实的基础，期间积累了多种前沿分析方法和技术：仿生纳米孔制备和检测；微纳米加工技术；核酸探针人工合成技术。参 考 文 献 [1] 陈晓娟,闫少春,邵国,等.人DNA甲基化转移酶的分类及其功能[J].包头医学院学报,2014,30(04):136-138.[2] Das PM, et al. 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页岩气市场空间巨大，各家国企、民企、外企开始摩拳擦掌的同时，页岩气板块作为一个投资主题也被不少市场人士所重视。在数家相关上市公司之中，神开股份[0.00 0.00% 股吧 研报](002278.SZ)被认为将是受益者之一。 　　神开股份 (SZ:002278)最新价：0.00 - 0 0%行情走势 大单追踪 资金流向最新研报 公司新闻 最新公告个股股吧 优股预测 龙虎榜但本周以来，神开股份的股价跟随大盘接连下挫。截至周五，公司股价报收9.65元，全周跌幅15.34%。 　　早在今年6月底，国土部就进行了第一次页岩气勘探权的招标，仅有中石油、中石化、中海油等少数大型石化企业获准参与招标，可见在页岩气资源开发利用的早期，石化龙头的先发优势将十分明显。 　　金证顾问分析师刘力认为，神开股份是中石油的一级供应网络成员单位，也是中石化和中海油的网络采购供应商成员，有望“近水楼台先得月”。 　　公开资料显示，神开股份主要生产和销售井场测控设备、石油钻探井控设备、采油井口设备和石油产品规格分析仪器等四大类产品。经过十多年的发展，公司已经成为我国石油化工装备制造业的骨干企业之一，产品涉及石油勘探开发上游到石油产品加工下游，在我国石油化工装备业拥有较高知名度，在国内同行中处于领先地位。 　　公司目前的两大主力产品为综合录井仪和防喷器，其中录井仪的市场份额达到了50%以上，龙头地位无可动摇。这两项产品与钻井的数量呈正相关，基本达到了一口钻井配备一套录井仪和防喷器的地步。 　　根据美国的经验，页岩气开发对技术的要求很高，在勘探和开采过程中需要高精度的探测和分析仪器。而神开股份的录井仪，其搜集分析数据的速度仅为30秒，同时还可检测到样品气内百万分之五含量的物质，属于行业翘楚。 　　刘力认为，公司的产品将成为页岩气开发中的必备设备，页岩气资源的产业化将为公司开辟新的业绩增长途径。 　　公司三季报数据显示，1~9月份，公司实现营业收入4亿元，同比增长49.65% 归属于上市公司股东的净利润为0.51亿元，同比增长6.13%。 　　据了解，公司净利润增速较低的原因一方面在于受短期所得税率影响所致，公司高新技术企业资格进入复评期，本季按25%税率进行预缴，待公司通过复评后，将重新以15%税率进行计算并回补税款。另一方面，基于今年原材料价格上涨，而产品售价暂时维持原价所致，公司期间营业成本有所上升。此外，公司预计全年业绩增长0~30%。 　　事实上，公司已经通过不断调整产品结构来控制成本，安信证券分析师张仲杰预计，公司全年综合毛利率仅小幅下滑3%左右。 　　截至今年三季度末，公司的前十大流通股股东中共有三家基金，博时精选[1.15 0.88%]股票基金、诺安中小盘[0.94 0.32%]精选基金、易方达价值成长[1.12 0.54%]混合基金分别持有公司882.73万股、348.85万股、133万股，分别占公司的流通股本的比例为7.53%、2.97%和1.12%。 　　截至目前，共有95家机构对神开股份2011年度业绩作出预测，平均预测净利润为1.17亿元，比上年增长49.89%。

国铁集团、航天科技、航天科工、航空工业、中国船舶、中国航发、国家电网、南方电网、中国商飞（办公室、综合部门），各省、自治区、直辖市和新疆生产建设兵团市场监管局（厅、委），中国计量科学研究院，中国测试技术研究院，中国计量测试学会，中国计量协会，各有关单位： 　　为贯彻落实《中华人民共和国国民经济和社会发展第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》《“十四五”市场监管现代化规划》《计量发展规划（2021—2035年）》《市场监管总局办公厅关于加强计量数据管理和应用的指导意见》，加强计量体系和能力建设，深化计量数据归集、挖掘和应用，充分发挥计量数据服务高质量发展的重要作用，市场监管总局决定建立一批国家计量数据建设应用基地。有关事项通知如下： 　　一、总体定位 　　国家计量数据建设应用基地（以下简称基地）是研究探索计量管理由“器具管理”向“量值管理”转变和强化计量数据服务高质量发展的实践载体，其主要任务是计量数据的资源整合、归集整理、挖掘利用和规范管理，积极探索计量数据赋能产业发展的新思路、新模式，形成计量数据规范化管理、有效应用的路径和成果，不断拓展计量数据应用场景，提供更多计量数据应用解决方案。 　　二、申报重点领域 　　本次国家计量数据建设应用基地申报重点领域包括但不限于：新一代信息技术、生物技术、新能源、新材料、高端装备、新能源汽车、绿色环保及航空航天、海洋装备等战略性新兴产业以及关系民生的公平贸易、乡村振兴、生态环境、生命健康、医疗卫生、减灾救灾等。 　　三、基地依托单位基本条件 　　（一）基地依托单位应为具有计量数据资源积累以及在计量数据建设应用中取得实效的计量技术机构、科研院所、高等院校、企业等，且具有独立法人资格。 　　（二）基地依托单位高度重视计量数据建设应用工作，功能定位明确，发展思路清晰，管理制度健全，运行机制合理，在本领域具备较好的计量数据应用与产业融合发展基础或行业特色，具有良好的牵引带动作用。 　　（三）基地依托单位有较好的技术创新机制，人才队伍结构科学合理，知识产权应用及保护制度健全，在计量数据建设应用方面具有创新成果和应用实例。 　　（四）基地依托单位具有稳定的网络和数据安全技术及服务团队，拥有信息安全、网络安全、保密安全的技术条件和工作设施。 　　（五）基地依托单位能为国家计量数据建设应用基地建设和运行提供必要的经费和支撑条件。 　　（六）基地依托单位3年内没有违法行为和严重失信行为，并没有发生安全（含网络安全、数据安全、生产安全等）、质量、环境污染等事故以及偷漏税等违法违规行为的。 　　四、管理程序 　　（一）推荐申报。符合条件的基地依托单位根据实际情况自愿申报，经属地省级市场监管部门初审合格后，由属地省级人民政府向市场监管总局正式提出筹建申请。中央企业以及中国计量科学研究院，中国测试技术研究院，中国计量测试学会，中国计量协会可直接向市场监管总局提出筹建申请。各省级人民政府、中央企业以及中国计量科学研究院，中国测试技术研究院，中国计量测试学会，中国计量协会（以下称基地筹建申请单位）提出筹建申请基地的数量原则上不超过2个。 　　（二）批准筹建。市场监管总局组织专家对申请筹建国家计量数据建设应用基地的必要性、可行性和充分性进行技术论证和实地调研，对通过专家技术论证的单位，经公示无异议后，由市场监管总局函复筹建申请单位，正式批准筹建国家计量数据建设应用基地。 　　（三）组织验收。国家计量数据建设应用基地筹建工作一般在3年内完成。筹建期结束后，国家计量数据建设应用基地筹建申请单位向市场监管总局提出正式验收申请。市场监管总局组织专家对国家计量数据建设应用基地进行技术评审和现场检查，对筹建计划方案和筹建任务完成情况、技术能力、后续建设规划进行综合评估验收。通过验收的，由市场监管总局回函省级人民政府、中央企业等基地筹建申请单位，正式建立国家计量数据建设应用基地。未通过验收的，由获得筹建资格的国家计量数据建设应用基地进行整改，整改后仍未通过验收的，撤销其筹建资格。 　　（四）监督管理。市场监管总局对国家计量数据建设应用基地实施“有进有出”的动态管理。基地依托单位应当定期向市场监管总局书面报告基地运行情况、计量数据资源建设情况、计量数据应用和服务高质量发展情况、基地建设任务落实情况、后续建设规划等内容。市场监管总局定期组织专家对基地进行实地调研或阶段性评价，对建设成效不显著、专家评估不合格，经整改后仍达不到要求的，撤销国家计量数据建设应用基地。 　　五、其他事项 　　（一）同一基地依托单位原则上只能承担一个领域的国家计量数据建设应用基地的建设任务。 　　（二）基地依托单位应如实填报申报书（见附件），提交其他相关配套材料。申报材料要求描述详实、科学准确、重点突出、表述准确、逻辑性强，注重经验总结和凝练。基地筹建申请单位将申请函报送至市场监管总局，同时将申报书纸质版一式五份寄送至中国计量协会（北京市朝阳区农展北路麦子店街22号楼5层，张亮），可编辑的申报书电子版发送至jlslzc@samr.gov.cn。相关材料及申请截止时间为2023年9月30日，逾期不再受理。 　　联 系 人：计量司 刘国传、张亮 　　联系电话：010—82262865、010—59196592 　　传 真：010—82260132 　　附件：国家计量数据建设应用基地申报书。wps 　　市场监管总局办公厅 　　2023年7月27日