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有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。这些植物组织中,或富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的,但当组织被研磨,细胞破碎后,这些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合,导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失,或形成不溶性复合物;而多糖会形成难溶的胶状物,与RNA共沉淀下来;萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。对于这些植物材料,用常规的RNA提取方法(如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等)难以提取出其RNA。纵观国际上RNA提取的试剂盒,如常见的Trizol,以及一些知名名牌的RNA提取试剂盒均很难从多糖多酚的植物中提取高质量的RNA,酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外,针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时,酚类物质会释放出来,氧化后使匀浆液变为褐色,并随氧化程度的增加而加深,这一现象被称为褐化效应。被氧化的酚类化合物(如醌类)能与RNA稳定地结合,从而影响RNA的分离纯化;多糖的污染是提取植物RNA时常遇到的另一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖,而多糖的许多理化性质与RNA很相似,因此很难将它们分开。在去除多糖的同时RNA也被裹携走了,造成RNA产量的减少;而在沉淀RNA时,也产生多糖的凝胶状沉淀,这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水,或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性,因此污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。Trizol主要成份是异硫氰酸胍和苯酚,没有特殊去除多糖和多酚的试剂,所以对于大多数多糖多酚的植物无法成功提取,即使添加了如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)或半胱氨酸之类的防止酚氧化的试剂也很难提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是盐酸胍或则异硫氰酸胍,有些公司进行改进之后添加了诸如PVP40等结合多酚的试剂,亦无法取得让人满意的结果。百泰克公司在RNA提取方面积累了丰富的实践经验,开发出通用植物总RNA快速提取试剂盒,在试验的一百多例多糖多酚植物中,无一例外的提取出来高质量的RNA,其中包括棉花、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、番茄果实、茄子、松针、杨树、拟南芥种子、菠萝蜜、马蹄金、早熟禾、高羊茅、云杉、松树、紫椴、花楸、白桦、山毛榉、海棠花、槭槭、紫罗兰、毛爪草、丁香、月季、天竺葵、仙客来、菊花、牵牛花、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕等。
想买个核酸提取仪,做动植物组织DNA荧光定量PCR检测,有什么好的仪器,国产进口都可以,请用过的推荐下。谢谢
请问大家,我在做植物提取的时候,有机相和水相之间会有一层乳化层,要怎么处理呢,感觉静置太费时了。