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1、 粒径一般认为,基质的颗粒形状和大小,主要影响流体动力学行为,影响分离效率。填料的粒径决定了填充液相色谱柱的柱效。从VanDeemter方程可知,在优化的流动相线速度下,最佳理论塔板高度为: H min=2.48 dp根据这一公式,可以计算出不同力度填料填装的柱子可获得的最大理论塔板数。例如,3um粒子可获得13.4万理论塔板/米,5um粒子可获得8万理论塔板/米。但是,小粒子填料容易造成柱压高、易堵塞、寿命较短。为保证一定的流动相线速度就得提高输液压力,虽然,大多数高效液相色谱仪的压力上限可允许达到42Mpa,但因长时间工作在高压状态下肯定会缩短输液泵及进样阀的使用寿命。为此,小粒径的柱子一般较短。2、 填料形状现在,10um以下的分析型柱多使用球形填料,而制备型的柱子则多选用无定形填料,因为无定形填料较为便宜且大粒度填料的粒间孔较大,所填装的柱子并不需太高的压力便能很好的运行。3、 孔径及孔径分布填料粒子的孔径及孔径分布,主要从三个方面影响反相色谱的色谱行为。首先,是孔径影响了粒子必表面积的大小,从而对配基的数量,即碳含量造成影响,它涉及到样品的负载量。其次,孔径的大小,从空间上必然对溶质的分子量大小有所限制。此外,孔的不均一性,及孔径分布,也会带来尺寸排阻效应。4、 比表面积 填料的多孔性,极大地增加其比表面积。对于无孔的小球,其比表面积是很小的。但是一旦具多孔性,则多孔微球的比表面积为球 外比表面积与孔内表面积之和。比表面积不同,其键合配基的量亦有所不同。所以,即使是以相同的反应条件制备的同样配基的反 相填料,也会有不同的保留行为。特定溶质的保留值随比表面积的增大而减少。 5、 基质硅胶的纯度硅胶基质上残存的硅羟基和杂质金属离子,共同造成了以硅胶为基质的反相填料的“次级保留行为”。较多的杂质金属离子,会使具有螯合作用的样品被吸附在柱子上。在生物医药体系的分离、分析中,经常会遇到强极性的溶质,他们在制造不良的反相色谱柱中,经常会因强烈的非特异性吸附而难以获得良好分离。究其原因,除孔径大小的因素外,最大的可能是硅胶表面的覆盖率低和基质含金属离子太多所致。
[b]什么是磷酸化蛋白质[/b]蛋白质磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基团(P04)转移到不同种类的氨基酸上(主要包括丝氨酸S、苏氨酸T、酪氨酸Y),从而使蛋白质发生翻译后修饰的过程。该修饰是蛋白质翻译后修饰(PTM)中最为重要的形式,具有显著的生物学功能,细胞增殖和凋亡,良性发育,信号转导,新陈代谢,肿瘤发生等过程都有磷酸化蛋白质的插足,研究磷酸化蛋白质对探究生物学病变机理有着非常重要的意义。[b]富集磷酸化蛋白质重要性[/b]磷酸化蛋白质具有低丰度和高动态性的特点,因此对磷酸化蛋白质组学研究首先需要对磷酸化蛋白样品进行富集,降低样品复杂程度和提高磷酸化位点鉴定数目。固相金属离子亲和色谱法(IMAC)是磷酸化蛋白质组学研究中最常用的磷酸化蛋白质富集技术之一。[b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester)固相金属离子亲和填料[/b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金属离子亲和填料,金属离子Ti??鳌合在磷酸酯 (phosphate ester) 为配基的多级孔杂化整体材料上形成的亲和填料,利用磷酸化基团与固相化的Ti??的高亲和力来富集磷酸化蛋白质。磷酸化蛋白质上的磷酸基团中的三个氧原子分别与富集材料上的三个不同Ti??螯合以形成稳定的八面体形的配位结构,这种配位方式提供了良好的结合能力。该填料具有吸附量大、选择性好、成本低、适用范围广、操作简单特点。[b]规格参数[/b][table=521][tr][td=1,1,156]基架名称[/td][td=1,1,365]多面体低聚倍硅氧烷(POSS)作为单体所制备的多级孔杂化整体材料[/td][/tr][tr][td=1,1,156]粒径范围[/td][td=1,1,365]几十微米至几百微米[/td][/tr][tr][td=1,1,156]结合载量[/td][td=1,1,365]63.6 mg/g[/td][/tr][tr][td=1,1,156]适用样品范围[/td][td=1,1,365]所有含有磷酸基团的蛋白质和肽段[/td][/tr][tr][td=1,1,156]磷酸化肽段富集特异性[/td][td=1,1,365]97%[/td][/tr][tr][td=1,1,156]pH稳定性[/td][td=1,1,365]强酸、强碱下均可使用[/td][/tr][tr][td=1,1,156]化学稳定性[/td][td=1,1,365]常见有机溶剂下均可使用[/td][/tr][tr][td=1,1,156]保存条件[/td][td=1,1,365]干燥状态下室温保存[/td][/tr][tr][td=1,1,156]通用性操作步骤[/td][td=1,1,365]采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液,这样可以在富集过程中,很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后,依次用洗涤溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)进行洗涤,这样可以最da程度上洗去非特异性肽段。最后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。[/td][/tr][/table][b]应用案例[/b][align=center][img]https://img1.17img.cn/17img/images/201910/uepic/556dc556-79d8-4012-81ef-a8a16364ff16.jpg[/img][/align](a)β-酪蛋白酶解液直接进行分析的 MALDI TOF-MS谱图和(b)Welchrom Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS谱图[b]实验条件:[/b]0.1μg β-酪蛋白酶解液;采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液,去除上清溶液后,依次用洗涤溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)进行洗涤,最后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。图a中,未经过富集的β-酪蛋白酶解液样品MALDI谱图中,非磷酸化肽段的质谱信号峰非常强,严重影响了对磷酸化肽段的辨别。而经过Ti??-IMAC富集,从MADLI谱图中(图b)可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信号峰,而且几乎没有出现任何非磷酸化肽段的信号峰。证实了Welchrom Ti Poss富集对磷酸化肽段具有良好的富集能力。[table=562][tr][td][align=center][b]产品名称[/b][/align][/td][td][align=center][b]规格[/b][/align][/td][td][align=center][b]货号[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester)[/b][/align][/td][td][align=center][b]250mg[/b][/align][/td][td][align=center][b]ATI001[/b][/align][b][/b][/td][/tr][/table]
Kromasil柱Kromasil是瑞典AKZO NOBEL公司生产的高性能硅胶基质液相色谱柱填料品牌。 Kromasil是一种高纯度球形硅胶填料,金属杂质含量极低,减少了有些金属螯合物在硅胶基质上的络合作用。 Kromasil硅胶的表面由独特的硅羟基基团组成,硅烷的覆盖率高,在较高的或较低的PH条件下不易水解和分解,可在PH=1.5~9.5条件下稳定使用。 Kromasil的含碳量高,表面极性小,分离效能高。通常在分析碱性样品时,与酸性硅羟基反应会产生不利的拖尾现象,而Kromasil化学纯度极高,它的表面由分布独特、相对中生的硅羟基基团组成,并使不需要的酸性硅羟基基团减少到最低,从而使之具有良好的峰对称性种较高的柱效。Hypersil BDSHypersil BDS 类色谱填料是极好的反相柱填料,有很好的耐久性及重现性,应用范围极其广泛。Hypersil BDS 硅胶担体键合前经过专门的碱钝化处理,将残余硅羟基降至极限,这种改善的表面,使得键合后的硅胶具有很高的配位度,大大降低了硅羟基与分析物之间的相互作用,改善了色谱峰形,降低了色谱峰的拖尾程度,提高了峰的对称性。Hypersil BDS填料的特征:l 对碱性化合物有更好的峰型。l 更长的寿命。l 更好的稳定性。l 同碱性化合物一样,酸性和中性化合物也有非常优异的峰值--真正的通用柱填料。紧管常规填料色谱柱具有优异的选择性和较长的色谱柱寿命。且对于简单的两元流动相(如甲醇/水),当样品为酸性、中性和弱碱性化合物时均可获得较佳的峰不对称度。但当分析药物等样品中的强极性含氮的化合物时,样品峰型就极查,拖尾严重,并导致定量分析精度下降,时常会出现一些小峰埋没于前一拖尾峰的尾巴中,造成该现象的原因是固定相上尚有残余的硅羟基。尽管很多厂家对硅胶表面作了第二次反应,即所谓的“封尾”,以减小残余硅羟基的作用,但往往都不能完全消除残余的硅羟基的影响。Hypersil公司开发的将残余的硅羟基降至极限的Hypersil BDS(Base Deactived Silica,碱纯化硅胶)系列产品,并用现代衍生反应技术生产出特别适用于碱性化合物的真正均一反相填料。Hypersil 300A 填料是基于5um和10um,孔径为300A 的硅胶为基质的HPLC填料适合越来越多的生物大分子分离与分析的需要,现可提供C18 C8 C4 的填料*Hypersil 300A C18 适合亲水性强的分子量大于5000的小肽酶的水解片断及各种天然和合成小肽的分析*Hypersil 300A C4 适合疏水性的小肽及大分子的多肽分析*Hypersil 300A C8 选择性介于C18和C4之间适用于亲水性及弱疏水性的小肽和蛋白质酶的水解片断及各种天然和合成小肽的分析。 Hypersil ODS填料Hypersil 填料是基于粒度为3um 、5um和10um, 孔径为120A的硅胶为基质的HPLC填料其生产过程的质量控制标准非常严格全世界数千个实验室使用Hypersil色谱柱已长达20多年很多应用实例可以从多种文献及著名杂志上查到。大量的试验测试已经证实Hypersil ODS2填料是替代Waters Spherisorb ODS2的最佳填料无论是在酸性还是碱性样品的分析上选择性与峰型几乎与其保持一致。LiChrosorb填料常规色谱分析柱产品介绍: LiChrosorb是德国MERCH公司出品的一种多孔无定型硅胶基质填料品牌,在过去的25年中非常成功地应用于液相色谱分离。产品特点:LiChrosorb RP-8和RP-18适合于碱性样品的色谱分析。技术参数:LiChrosorb填料参数