曲霉属

一、概述赭曲霉毒素又称棕曲霉毒素，是曲霉属和青霉属的一些菌种产生的一组结构类似，主要危及人和动物肾脏的有毒代谢产物，分为赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B、赭曲霉毒素C、赭曲霉毒素D四种化合物，其中赭曲霉毒素A(OA)分布最广、产毒量最高、毒作用最大、农作物污染最严重、与人类关系最密切，是一种强力的肝脏和肾脏毒素。OA是异香豆素联结L一苯丙氨酸在分子结构上类似的一组无色结晶化合物，溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中，微溶于水。在紫外线下OA呈绿色荧光。该化合物相当稳定，在乙醇中置冰箱避光可保存一年。世界各国均有从粮食中检出oA的报道，但其污染分布很不均匀，污染的谷物主要为麦类及玉米，产毒适宜温度为20～30℃。二、检测方法通常采用薄层色谱法和高效液相色谱法测定。薄层色谱法原理1．原理用三氯甲烷-0.1mol／L磷酸或石油醚一甲醇／水提取样品中的OA，样品提取液经液一液分配后，根据其在365nm紫外线灯下产生黄绿色荧光，在薄层板上与标准比较测定含量。2．试剂石油醚(沸程为60～90℃或30～60℃)、甲醇、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、冰乙酸、乙醚、苯一乙腈(98+2)、0.1mol／L磷酸溶液(称取11．5g 85％的磷酸加水稀释至1000mL)、2mol／L盐酸溶液(量取20mI。盐酸，加水稀释至120mL)、4％氯化钠溶液、0.1mol／L碳酸氢钠溶液(称取8．4g碳酸氢钠，加适量水溶解，并用水稀释至1000mL)、硅胶G。OA标准储备溶液：用苯一冰乙酸(99+1)配成40pg／mL OA储备溶液，并用紫外分光光度计测定其浓度。置冰箱中避光保存。OA标准使用液：精密吸取储备溶液，用苯稀释成OA标准工作液(0.5μg/mL)，置冰箱中避光保存。3．仪器与设备小型粉碎机，电动振荡器，玻璃板(5cmx 20cm)，薄层涂布器．展开槽(内径25cm、宽6crn、高4cm)，紫外线灯(365nm)，微量注射器(10μL、50μL)，具0.2mL一尾管的10mL浓缩瓶。所有玻璃仪器均需用稀盐酸浸泡，用自来水、蒸馏水冲洗。4．分析步骤(1)提取称取20g样品，精确至0.01g，置于200mL具塞锥形瓶中，加入100mL一三氯甲烷和10mL 0.1mol／L磷酸溶液，振荡30rnin后通过快速定性滤纸过滤。取20mL滤液置于250rnL分液漏斗中，加50mL 0.1mol／L碳酸氢钠溶液振摇2min，静置分层后，将三氯甲烷层放入另一个100mL分液漏斗中(少量乳化层，或即使三氯甲烷层全部乳化都可放入分液漏斗中)。加入50mL 0.1mol／L碳酸氢钠溶液重复提取三氯甲烷层，静置分层后，弃去三氯甲烷层(如果三氯甲烷层仍乳化，弃去，不影响结果)。碳酸氢钠水层并入第一个分液漏斗中，加约5．5mL 2mol／L盐酸溶液调节pH2～3(用pH试纸测试)，加入25mL三氯甲烷振摇2min，静置分层后，放三氯甲烷层于另一盛有100mL水的250mL分液漏斗中，酸水层再用10mL三氯甲烷振摇提取、静置。将三氯甲烷层并入同一分液漏斗中。振摇、静置分层，用脱脂棉擦干分液漏斗下端，放三氯甲烷层于一75mL蒸发皿中，将蒸发皿置蒸汽浴上挥干。用约8mL一三氯甲烷分次将蒸发皿中的残渣溶解，转入具尾管的10mL浓缩瓶中，置80℃水浴锅上用蒸汽加热吹氮气浓缩至干，加入0．2mL苯一乙腈溶解残渣，摇匀，供薄层色谱点样用。(2)测定取两块薄层板，在距薄层板下端2．5cm的基线上用微量注射器滴加两个点：在距板左边缘1．7cm处滴加OA标准溶液8μL(浓度0.5μg／mL)，在距板左边缘2.5cm处滴加样液25μL，然后在第二块板的样液点上加滴OA标准溶液8μL(浓度0.5μg／mL)。点样时，需边滴加边用电吹风吹干，交替使用冷热风。(3)展开在展开槽内倒人l0mL乙醚或乙醚一甲醇一水(94+5+1)，先将薄层板纵展至离原点2～3cm，取出通风挥发溶剂1～2min后，再将该薄层板靠标准点的长边置于同一展开槽内的溶剂中横展，如横展剂不够，可添加适量，展至板端过1min，取出通风挥发溶剂2～3min。在另一展开槽内倒入10mL甲苯一乙酸乙酯一甲酸一水(6+3+1．2+0．06)或甲苯一乙酸乙酯一甲酸(6+3+1．4)，将经横展后的薄层板纵展至前沿距原点13～15cm，取出通风挥干至板面无酸味(约5～10min)。(4)观察与评定 将薄层色谱板置365nm波长紫外线灯下观察，两板比较，若第二块板的样液点在OA标准点的相应处出现最低检出量；而第一板相同位置上未出现荧光点，则样品中的OA含量在本测定方法的最低检测量10μg／kg以下；如果第一板样液点在与第二板样液点相同位置上出现荧光点，则看第二板样液的荧光点是否与滴加的标准荧光点重叠，再进行以下的定量与确证试验。(5)稀释定量 比较样液中OA与标准OA点的荧光强度，估计稀释倍数。经稀释后测定含量时，可在样液点的左边基线上滴加两个标准点，比较样液与两个标准OA荧光点的荧光强度，半定量。(6)确证试验用碳酸氢钠一乙醇溶液(在100mL水中溶解6.0g碳酸氢钠，加20mL乙醇)喷洒色谱板，在室温下干燥，于长波紫外线灯下观察，这时OA荧光点应由黄绿色变为蓝色，而且荧光强度有所增加，再估计样品中OA。

【内容摘要】赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物，溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中，微溶于水。该化合物相当稳定，在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性，制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后，仍然能存留56％的赭曲霉毒素。赭曲霉毒素A是一种与人类健康密切相关的霉菌毒素，是人类可能的致癌剂。除了潜在的遗传毒性和致癌性外，赭曲霉毒素A也是一种具有免疫抑制、神经毒性以及致畸性的物质。赭曲霉毒素最初是从南非的赭曲霉毒株中分离出来的，由赭曲霉(Asper—gillus ochracets)、洋葱曲霉(Aspergillus alliaceus)、鲜绿青霉(PencillilJⅡlviridicatum)、徘徊青霉等代谢产生，包括7种结构类似的化合物，赭曲霉毒素A是其中毒性最强的物质，是自然界中的主要天然污染物。在一些国家的食品中，赭曲霉毒素A的污染率可达2％～30％。该化合物主要表现为肾脏毒性。在巴尔干地方性肾病流行区，6%～18%人群的血液中能检出赭曲霉毒素A。(1)结构与性质赭曲霉毒素是分子结构类似的一组化合物，包括赭曲霉毒素A、B、C、D和a等，其中赭曲霉毒素A是主要的污染物。赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物，溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中，微溶于水。在紫外光下赭曲霉毒素A呈绿色荧光。该化合物相当稳定，在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性，制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后，仍然能存留56％的赭曲霉毒素，赭曲霉毒素的化学结构如图4—2所示。(2)食品中赭曲霉霉素的来源与分布赭曲霉毒素是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的二次代谢产物，产毒菌种见表4—2。[color=#075

黄曲霉的生长条件是什么？它容易在哪些食品里面滋生？在什么情况下会产生黄曲霉毒素？ 黄曲霉是一种容易在种子类食物中滋生的霉菌。在25-30℃的温度下，80%-100%的相对湿度，17%-18%的种子水分含量，粮食、坚果、油籽等产品最容易滋生黄曲霉。幸好，各种豆类，包括大豆，并不是黄曲霉喜欢繁殖的材料，它更喜欢花生、玉米和大米等食品。 从这里可以看出，黄曲霉是粮食、豆类、油籽等种子类食品受潮时滋生的，种子总体而言仍然处在水很少的状态，而不是已经充分吸水的状态。人们都有一个经验：水汪汪的大米粥、绿豆汤，从来不会长霉，而是很快变味坏掉——因为水多的时候细菌繁殖非常快，根本轮不到霉菌繁殖。霉菌们所热爱的培养基质，大多是一些相对“干”一点，但又干得不够的食品，比如馒头啊，面包啊，糕点啊，受潮的种子之类。所以，面包放久之后会长出白色、绿色、黑色的霉斑，却不会发酸变臭，正是因为它的状态符合霉菌的胃口。 为什么呢？因为霉菌是非常喜欢氧气的，具有较强的“陆生”特性。如果把食品泡在水里，氧气不足，它们就很难繁殖起来。知道这个微生物学的基本知识，就会明白，霉菌几乎不能在淹水条件下产毒，所以泡豆子不可能长出黄曲霉毒素来。 所以说，买大豆的时候，要注意大豆的干燥程度，储藏中也要避免让它受潮。如果担心豆子在储藏当中被黄曲霉污染，那么先用水泡一泡，然后把泡豆水扔掉，实际上反而更为安全。 事实上，绝大部分豆制品加工时，都需要经过泡豆程序。不管是煮豆粥，做豆腐，做纳豆，或做豆酱等。所谓泡豆带来致癌危险，纯属违背科学常识的不实说法，大可不必为此惶恐不安，更不必为此不敢喝豆浆、不敢吃豆腐。 需要注意的是，在夏天泡豆子，如果超过4小时，最好能放在冰箱当中。因为泡豆的水分很高，很容易繁殖各种细菌。细菌不会产生黄曲霉毒素，却可能让豆子产生难闻的味道。如果不幸污染了某些致病菌，它们繁殖过度，或产生细菌毒素，都可能引起胃肠道疾病。尽管在打豆浆、做豆腐时还需要经过加热杀菌，也不可不防啊！