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用黑曲霉第2代斜面上的菌株如何制作甘油冻存管?20%的甘油里面需要有0.05%的吐温80吗?配制20%的甘油是用生理盐水还是用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液?
【内容摘要】赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素。赭曲霉毒素A是一种与人类健康密切相关的霉菌毒素,是人类可能的致癌剂。除了潜在的遗传毒性和致癌性外,赭曲霉毒素A也是一种具有免疫抑制、神经毒性以及致畸性的物质。赭曲霉毒素最初是从南非的赭曲霉毒株中分离出来的,由赭曲霉(Asper—gillus ochracets)、洋葱曲霉(Aspergillus alliaceus)、鲜绿青霉(PencillilJⅡlviridicatum)、徘徊青霉等代谢产生,包括7种结构类似的化合物,赭曲霉毒素A是其中毒性最强的物质,是自然界中的主要天然污染物。在一些国家的食品中,赭曲霉毒素A的污染率可达2%~30%。该化合物主要表现为肾脏毒性。在巴尔干地方性肾病流行区,6%~18%人群的血液中能检出赭曲霉毒素A。(1)结构与性质赭曲霉毒素是分子结构类似的一组化合物,包括赭曲霉毒素A、B、C、D和a等,其中赭曲霉毒素A是主要的污染物。赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。在紫外光下赭曲霉毒素A呈绿色荧光。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素,赭曲霉毒素的化学结构如图4—2所示。(2)食品中赭曲霉霉素的来源与分布赭曲霉毒素是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的二次代谢产物,产毒菌种见表4—2。[color=#075
[align=center][img=,600,400]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510100842_6082_932_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物,属烈性的肾脏毒和肝脏毒,广泛存在于各种食物中,谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后,会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链,加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。我们今天做的就是菜籽油中的赭曲霉毒素A的检测。[b]适用范围[/b]适用于食品中赭曲霉毒素A的测定(本实验用菜籽油为基质)。参考标准:《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准食品 中赭曲霉毒素A的测定》[b]提取步骤[/b]1) 称取5.0 g(精确至0.1g)样品于离心管中,加入1g氯化钠,10ml提取液,振荡,超声20min,离心8000r/min 10min,移取上清液;往原先离心管中再加入10ml提取液,再提取一次,移取上清液后;再加入5ml提取液,再提取一次,合并三次上清液。2)准确移取15mL上清液,加入30mL磷酸缓冲液,混匀,并过玻璃纤维滤纸,待净化。[b]SPE净化步骤[/b]SPE柱:月旭赭曲霉毒素A免疫亲和柱 规格: 3mL。活化:将赭曲霉毒素A免疫亲和柱放置到室温,然后将小柱中的缓冲液流出,弃去;上样:取净化液30mL上样,控制流速,不宜过快,弃去;淋洗:10mL磷酸缓冲液,10mL水,弃去,抽干小柱;洗脱:2mL甲醇洗脱,收集于15mL离心管中,抽干将洗脱液置于45℃下氮吹吹干,用乙腈-2%乙酸水溶液复溶并定容到1mL,上机测定。[b]色谱条件[/b]色谱柱:月旭UltimateXB-C18 4.6×150mm,5μm;流动相:A冰乙酸-水(2+100),B-乙腈;等度洗脱条件:A-B(50+50);流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:激发波长:333nm;发射波长:460nm。[align=center][b]谱图和加标回收率结果[/b][/align][align=center][img=,600,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510131735_1341_932_3.jpg!w690x259.jpg[/img][/align][align=center]图1.赭曲霉毒素A 2ng/mL图谱[/align][align=center][img=,600,226]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510165098_504_932_3.jpg!w690x260.jpg[/img][/align][align=center]图2.赭曲霉毒素A 5ng/mL图谱[/align][align=center][img=,600,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510197052_8694_932_3.jpg!w690x259.jpg[/img][/align][align=center]图3.样品加标1μg/kg图谱[/align][align=center][img=,600,224]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510237056_9591_932_3.jpg!w690x258.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=center]图4.样品加标2.5μg/kg图谱[/align][align=center][/align][align=center][img=,600,139]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510278360_2018_932_3.png!w479x111.jpg[/img][/align][align=center]表2.加标回收表[/align][align=center][b]相关产品信息[/b][/align][align=center][img=,600,373]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510308133_6112_932_3.jpg!w690x429.jpg[/img][/align]