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碱性琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ,氯化钠5g,牛肉膏3g ,脂20g ,蒸馏水1L 。将前4 种成分混合于水中,加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装后121℃ 灭菌15min ,倾注平板。凡急性患有水样便标本做增菌培养的同时,应直接取标本接种到碱性琼脂平板或亚碲酸钾琼脂平板上。置35 ℃ 培养12-16h ,观察结果。霍乱弧菌生长较快,菌落大而扁平,呈青灰色,半透明,光滑湿润。在亚碲酸钾琼脂上菌落呈灰黑色。 各实验室凡自配培养基或商品培养基,在使用前可用标准菌株生长对照,临床实验室可送防疫部门所设立的专门检验机构进行目的菌监测,质量可靠者方可使用。EL-Tor弧菌生长良好;大肠埃希菌ATCC25922 生长抑制。 置4℃ 冰箱,1 周内用完2 碱性胆盐琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ,牛肉膏5g,氯化纳5 -10g ,琼脂20g,胆盐(牛、猪)2.5g,蒸馏水1L。 将上述成分称量混合于水中加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装121 ℃ 灭菌15min ,倾注平板。取粪便标本或增菌培养物1 接种环接种平板,置35 ℃ 温箱培养16-18h 。霍乱弧菌迅速生长,其它细菌生长较缓慢。在16-18h 后,霍乱弧菌的菌落,直径可达2mm左右,呈扁平,青灰色,半透明,光滑湿润,易挑起。其它细菌菌落小而凸起,不透明,或有色素。同碱性琼脂置冰箱,1 周内用完。3 庆大霉素琼脂用于霍乱弧菌分离培养。 蛋白胨10g ,牛肉浸膏3g ,氯化钠g,构椽酸钠10g,无水亚硫酸钠3g ,蔗糖(或白糖)10g ,琼脂15-20g 庆大霉素、多粘菌素B “双抗液”2 ml,蒸馏水1L 。将上述成分(除“双抗液”外)称量混合于水中,加热溶解,校正pH 至8.4 ,分装灭菌121 ℃ 15 min ,待冷却至50 ℃ 后,每100ml内加“双抗液”0.2ml,另加5g / L 亚碲酸钾溶液0.1ml,再倾注平板。最后每毫升培养基内含有庆大霉素0.5U ,多粘菌素B6U 。将粪便标本或增菌培养物划线接种到该平板上,置35 ℃ 培养16-18h。 由于该培养基抑制性强,其它非弧菌科细菌被抑制,而霍乱弧菌生长迅速,16h 菌落可达2mm,菌落青灰色半透明,扁平,光滑湿润。若培养时间长,菌落略黄色、隆起,中心厚而不透明。霍乱弧菌(小川、稻叶)生长良好,培养18-24h 菌落直径2.5-3.0mm;大肠埃希菌和变形杆菌生长抑制。置4 ℃ 冰箱内,1 周内用完。注:(1)该培养基国内有商品出售,多数产品已加入庆大霉素,使用时,应详阅说明书。(2)“双抗液”配制:98ml 工灭菌蒸馏水中加庆大霉素(25 000U / ml)1ml,多粘菌B 或抗敌E ( 300 000U / ml)1ml4 ℃ 冰箱保存,1 月用完。4 四号琼脂用于霍乱弧菌分离培养 蛋白胨10g ,氯化钠5g,牛肉浸膏3g ,亚硫酸钠(无水)3g ,枸椽酸钠10g ,猪胆汁粉5g,十二烷硫酸钠20g,利凡诺(雷佛奴尔)3g ,琼脂粉12g ,庆大霉素亚碲酸钾混合液1ml,蒸馏水1L。将前8种成分放入玻璃或搪瓷容器内(严禁用铝制容器等金属容器),加入蒸馏水,加热溶解混合后,调整至pH8.0 ,然后按12%加入琼脂,煮沸至琼脂溶化后,冷至60 ℃ 左右,按每100ml琼脂加入庆大霉素亚碲酸钾混合液(1ml 40 000U 庆大霉素加79ml蒸馏水混合后,加入0.8g 亚碲酸钾溶解混合即成,每毫升含500U 庆大霉素和10g / L 亚碲酸钾)0.1ml,摇匀,倾注平板。 取待检标本划线接种平板,置35 ℃ 培养过夜。8h 后即可初步观察结果。24h 培养后,霍乱弧菌呈中心黑色、较大而扁平的菌落。配成的培养基呈亮黄色透明;EL-Tor弧菌稻叶型生长良好;EL-Tor弧菌小川型生长良好;大肠埃希菌ATCC25922 抑制生长。注:(1)庆大和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。(2)雷佛奴尔应避光保存,而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避光保存。
副溶血弧菌生化甘露醇、精氨酸、嗜盐实验不符是怎么回事。
铜铅对费氏弧菌的联合毒性初探 铜和铅是某些电镀企业和矿企常见的污染元素。在中国现行的污染物控制标准中采用的是单因子控制的方法,其实这个方法存在很大的漏洞。下面,我通过铜铅这两种污染物对费氏弧菌的联合毒性的测试,来分析水体中共存这两种离子时,其对生物体的影响。 原理我就不多说了,先来看一下费氏弧菌毒性检测的仪器、菌种和简要测试过程图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211150941_404324_1653274_3.jpg☆这个就是我们用的急性毒性仪(荷兰的)。插个题外话,其实只要一般荧光仪就行。美国SDI的delta-tox我也用过,感觉不怎么好,所以这块国产化空间还是挺大的。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211150946_404326_1653274_3.jpg☆这个费氏弧菌是网上的截图,干板上的。(其发光量和所处环境密切相关)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211150947_404329_1653274_3.jpg☆急性毒性测试简要流程 在单一重金属元素对费氏弧菌的毒性作用分析中,我们已经对包括铜和铅在内的多种重金属的毒性作用进行了分析。结果显示,当Cu<2.5mg·L-1,Pb<3 mg·L-1时,随着毒物剂量的不断增加,发光菌的相对发光率不断降低,说明毒性强度与污染物质量浓度呈正相关。表1单个重金属离子对费氏弧菌的毒性作用http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211122116_403545_1653274_3.jpg注:表中r表示发光菌的抑制率与污染物的质量浓度相关系数 对于Cu和Pb二元金属的联合毒性作用,将其分别配制成4个系列质量浓度,0.005,0.05,0.125,0.25和0.375mg/L,Cd和Pb以等比方式混合,Cu和Pb以等比方式混合.对发光菌进行毒性试验,同时记录发光菌的相对发光度,并分析各混合元素的毒性剂量与发光菌的毒性效应关系,它们的联合毒性作用剂量与效应关系见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211122116_403546_1653274_3.jpg 试验结果显示,Cu+Pb的混合溶液随其质量浓度的增加,发光强度呈明显下降趋势,它们的联合作用剂量与其毒性效应具有明显的正相关(P0[fon