杂交瘤细胞

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  • 杂交瘤技术的应用及局限性

    [font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术作为生产单克隆抗体的主流方法之一,其在生物医学领域的贡献不可忽视。该技术通过免疫小鼠后分离出能够产生抗体的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞,再与永生性骨髓瘤细胞系融合,形成杂交瘤细胞,进而在实验室中培养这些杂交瘤细胞,以产生针对特定抗原的单克隆抗体。杂交瘤抗体的大量生产,既可通过体内腹水制备方法,也可通过体外摇瓶培养方法。杂交瘤技术之所以在制备单克隆抗体上备受青睐,关键在于其制备的抗体具有高纯度、高灵敏度以及高特异性。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杂交瘤技术的不同应用[/font][/b][font=Calibri] [/font][font=宋体]一旦得到稳定的杂交瘤细胞系后,[/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]该细胞系能够持续且高效地分泌出高度均一化的单克隆抗体[/font][/color][/font][font=宋体]。这种稳定的抗体生产能力不仅确保了抗体的稳定供应,而且显著降低了抗体的生产成本。由于这些抗体能高特异性和高灵敏度地识别目标抗原,因此,杂交瘤技术成为了多个研究领域的重要工具,包括毒理学、动物生物技术、医学、药理学、细胞生物学和分子生物学等。[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]单克隆抗体在诊断、成像和治疗等领域具有广泛的应用。[/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]在诊断领域,单克隆抗体因其高度的特异性,常用于免疫组化、酶联免疫吸附试验([/font]ELISA[font=宋体])和流式细胞术等方法中,以检测和识别特定的生物标志物。[/font][/color][/font][font=宋体]在治疗领域,很多抗体药如[/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]利妥昔单抗[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]([/color][/font][font=Helvetica][color=#060607]Rituximab[/color][/font][font=宋体][color=#060607][font=宋体])、曲妥珠单抗[/font] [font=Helvetica](Trastuzumab)[/font][font=宋体]、西妥昔单抗([/font][font=Helvetica]Cetuximab[/font][font=宋体])是[/font][/color][/font][font=宋体]利用杂交瘤技术开发的,用于治疗[/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]非霍奇金淋巴瘤[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]、[/color][/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]乳腺癌[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]、[/color][/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体]非小细胞肺癌和结肠癌[/font][/color][/font][font=宋体][color=#060607]等癌症。这些抗体药物的成功开发和应用,展示了杂交瘤技术在制备治疗性单克隆抗体方面的重要性,[/color][/font][font=宋体]为癌症等复杂疾病的治疗提供了新的可能性。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杂交瘤技术的局限性[/font][/b][font=Calibri] [/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][u][font=宋体][color=#0000ff]杂交瘤技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体]目前也面临一些挑战[/font][font=Helvetica][color=#060607][font=宋体],如融合效率低、产生抗体多样性有限以及可能的免疫排斥反应等[/font][/color][/font][font=宋体]。目前,大多数单克隆抗体都是在小鼠或大鼠中产生的,这增加了疾病从动物转移到人类的风险。虽然这些抗体在实验室条件下表现出色,但在实际应用中,特别是在人类疾病的治疗中,可能会引发免疫反应,影响治疗效果。因此,寻找更安全、更有效的抗体生产方法,是当前生物医学领域的重要课题。[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]未来,杂交瘤技术有望在多个方面取得新的突破。一方面,通过优化杂交瘤细胞的培养条件,可以进一步提高抗体的产量和质量。另一方面,利用基因工程技术对杂交瘤细胞进行改造,可以使其产生具有特定功能或特性的抗体,从而满足更多样化的应用需求。此外,随着人工智能和大数据技术的发展,我们有可能对杂交瘤技术的各个环节进行更精准的调控和优化,从而推动其在生物医学领域的更广泛应用。[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]综上所述,杂交瘤技术以其独特的优势在单克隆抗体的制备中占据了重要地位,其产生的抗体在多个领域都发挥着重要作用。然而,该技术也面临一些挑战,需要我们在未来的研究中不断探索和解决。我们有理由相信,随着科学技术的不断进步,杂交瘤技术将在生物医学领域发挥更大的作用,为人类的健康事业作出更大的贡献。[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]本篇文章由义翘神州编辑整理,同时义翘神州提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]杂交瘤细胞培养及抗体生产服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体],点击了解详情![/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=宋体]Mitra S, Tomar PC. Hybridoma technology advancements, clinical significance, and future aspects. J Genet Eng Biotechnol. 2021 19(1):159. Published 2021 Oct 18. doi:10.1186/s43141-021-00264-6[/font]

  • 什么是杂交瘤技术?杂交瘤技术的原理及步骤

    [font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术([/font][font=Calibri]hybridoma technique[/font][font=宋体])即淋巴细胞杂交瘤技术,又称单克隆抗体技术。它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。克勒([/font][font=Calibri]Kohler[/font][font=宋体])和米尔斯坦([/font][font=Calibri]Milstein[/font][font=宋体])([/font][font=Calibri]1975[/font][font=宋体])证明,骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合,形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体,这种技术通称为杂交瘤技术。这一技术的基础是细胞融合技术。骨髓瘤细胞在体外可以连续传代,而脾细胞是终末细胞,不能在体外繁殖。如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体或因子的淋巴细胞融合,则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性,又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力,同时也克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点,融合的细胞称为淋巴细胞杂交瘤。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤技术原理及步骤:[/font][/b][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞([/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞)的主要特征是它的抗体分泌功能,但不能在体外连续培养,小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖,即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下,只有[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力,形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]其原理从下列[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个主要步骤阐明。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]一[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]细胞的选择与融合[/font][/font][font=宋体][font=宋体]建立杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异的单克隆抗体,所以融合细胞一方必须选择经过抗原免疫的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞,通常来源于免疫动物的脾细胞。脾是[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞聚集的重要场所,无论以何种免疫方式刺激,脾内皆会出现明显的抗体应答反应。融合细胞的另一方则是为了保持细胞融合后细胞的不断增殖,只有肿瘤细胞才具备这种特性。选择同一体系的细胞可增加融合的成功率。多发性骨髓瘤是[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞系恶性肿瘤,所以是理想的脾细胞融合伴侣。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤,使细胞易于相互粘连而融合在一起。最佳的融合效果应是最低程度的细胞损伤而又产生最高频率的融合。聚乙二醇[/font][font=Calibri](PEG1 000[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]2 000)[/font][font=宋体]是最常用的细胞融合剂,一般应用浓度为[/font][font=Calibri]40%(W/V)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]二[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]选择培养基的应用[/font][/font][font=宋体][font=宋体]细胞融合是一个随机的物理学过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬液中,经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中仅存活[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]7d[/font][font=宋体],无需特别筛选;细胞的多聚体形式也容易死去;而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成一般有两条途径。主要途径是由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体],叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶[/font][font=Calibri](HGPRT)[/font][font=宋体]和胸腺嘧啶核苷激酶[/font][font=Calibri](TK)[/font][font=宋体]的催化作用合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]。细胞融合的选择培养基中有[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]种关键成分:次黄嘌呤[/font][font=Calibri](hypoxanthine[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]H)[/font][font=宋体]、甲氨蝶呤[/font][font=Calibri](aminopterin[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]A)[/font][font=宋体]和胸腺嘧啶核苷[/font][font=Calibri](thymidine[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]T)[/font][font=宋体],所以取三者的字头称为[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。甲氨蝶呤是叶酸的拮抗剂,可阻断瘤细胞利用正常途径合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体],而融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的[/font][font=Calibri]HGPRT-[/font][font=宋体]细胞株,所以不能在该培养基中生长。只有融合细胞具有亲代双方的遗传性能,可在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基中长期存活与繁殖。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]三[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]有限稀释与抗原特异性选择[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在动物免疫中,应选用高纯度抗原。一种抗原往往有多个决定簇,一个动物体在受到抗原刺激后产生的体液免疫应答实质是众多[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞群的抗体分泌,而针对目标抗原表位的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只占极少部分。由于细胞融合是一个随机的过程,在已经融合的细胞中有相当比例的无关细胞的融合体,需经筛选去除。筛选过程一般分为两步进行:一是融合细胞的抗体筛选,二是在此基础上进行的特异性抗体筛选。将融合的细胞进行充分稀释,使分配到培养板的每一孔中的细胞数在[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]至数个细胞之间[/font][font=Calibri](30%[/font][font=宋体]的孔为[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]才能保证每个孔中是单个细胞[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体],培养后取上清液用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法选出抗体高分泌性的细胞;这一过程常被习惯地称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化,应用特异性抗原包被的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株,增殖后进行冻存、体外培养或动物腹腔接种培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤技术应用:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、单克隆抗体的重要性和价值[/font][/font][font=宋体]单克隆抗体不仅在生物学和免疫学基础研究中具有重要的价值,而且在实践中的应用范围亦极为广泛。[/font][font=宋体]单克隆抗体在医学诊断中的应用[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、在医学中,单克隆抗体已用于疾病的诊断,其优点是诊断准确,无交叉反应。[/font][/font][font=宋体]例如,单克隆抗体诊断乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒,则很少发生假阴性的漏诊。[/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、单克隆抗体作为药物载体的应用[/font][/font][font=宋体]单克隆抗体对靶组织有专一亲和性,故在体内有特异定位分布的特点。[/font][font=宋体]把抗肿瘤药物和抗某种肿瘤的单克隆抗体结合,则可使药物在体内有选择地集中向该肿瘤细胞攻击,只杀灭靶细胞,而不损伤正常组织,大大减轻了抗癌药物的副作用。[/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、单克隆抗体在治疗中的挑战和未来的发展方向[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制做的单克隆抗体多为鼠[/font][font=宋体]——鼠型,对人来说属异种蛋白质,因此难于用于治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 杂交瘤技术的基本原理及应用

    [font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url],作为现代生物技术的瑰宝,自诞生以来便在生物医学领域产生了深远的影响。其基本原理在于利用细胞融合技术,将免疫的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,从而得到一种新型的杂交细胞——杂交瘤细胞。这种细胞既保留了[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞产生特异性抗体的能力,又继承了骨髓瘤细胞无限增殖的特性。通过筛选和克隆,我们可以获得稳定产生特定抗体的杂交瘤细胞系,进而制备出高纯度、高特异性的单克隆抗体。下面是具体的关于杂交瘤技术原理及应用:[/font][/font][font=宋体][b]杂交瘤技术的基于三种关键技术。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、动物免疫[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]将特定的抗原注射到哺乳动物(如小鼠)体内,在外来抗原刺激下,被免疫动物脾脏内的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞大量增殖并且分泌针对于该抗原的特异性抗体。动物免疫的作用就是用特定外来抗原对动物进行免疫,以刺激能分泌特异性抗体的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞大量增殖。 [/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、细胞融合[/font] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞受外来抗原刺激后可以分泌抗体,但[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞本身是一种终末分化细胞,通常不再进行细胞分裂,存活一段时间(两周)便死亡[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]短命细胞;而骨髓瘤细胞不分泌抗体,却能在体外无限增殖存活。如果能将这两种细胞的特性结合起来,就能得到既能分泌抗体又能在体外长期存活的细胞,细胞融合杂交瘤细胞中非常关键的一个步骤。 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]通常使用的细胞融合技术有生物方法如仙台病毒,化学方法如聚乙二醇([/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]),物理方法如电融合。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,能产生五种细胞类型;未融合脾细胞,未融合骨髓瘤细胞,脾细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]脾细胞融合体,骨髓瘤细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]骨髓瘤细胞融合体,脾细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]骨髓瘤细胞杂合体(杂交瘤细胞)。其中,我们需要利用另一个关键技术[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杂交瘤细胞筛选[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]将所需的杂交瘤细胞分离出来。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、杂交瘤细胞筛选[/font] [/font][font=宋体][font=宋体]筛选杂交瘤细胞一般使用[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基筛选方法基本原理:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基成分:含有次黄嘌呤[/font][font=Calibri](H)[/font][font=宋体]、氨基喋呤[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]和胸腺嘧啶[/font][font=Calibri](T)[/font][font=宋体]三种成分。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成途径:主要合成和补救合成途径两种方式。主要合成就是利用糖和氨基酸在二氢叶酸还原酶的催化下来合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体];而补救合成途径则是通过次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶[/font][font=Calibri](Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase[/font][font=宋体], [/font][font=Calibri]HGPRT)[/font][font=宋体]和胸腺嘧啶激酶[/font][font=Calibri](thymidine kinase[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]TK)[/font][font=宋体]将核苷酸前体合成核苷酸以供[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成原料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基中氯基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂,能有效地阻断[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成的内源性途径。融合前的骨髓瘤细胞不能产生抗体,并且缺乏次黄嘌呤 – 鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶([/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体])基因,使得它们对[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基敏感,阻断了[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]补救合成途径。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]将融合的细胞在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基中孵育大约[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]至[/font][font=Calibri]14[/font][font=宋体]天,未融合的以及自身融合的骨髓瘤细胞死亡。这是因为[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基阻断了骨髓瘤细胞两大[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成途径。未融合的以及自身融合的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞虽然能够合成[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]酶,但其是正常细胞,存活一段时间(两周)也死亡。因此,在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]养基中,只有[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]骨髓瘤杂合体存活,因为杂交瘤细胞继承了[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性,能够合成[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]酶和[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]酶。这些杂交瘤细胞能够分泌抗体([/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞特性)并且无限增殖(骨髓瘤细胞特性)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然后将培养基稀释到多孔板中,使得每个孔仅含有一个杂交瘤细胞。再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株。由于孔中的抗体由相同的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞产生,针对相同的抗原表位,所以产生的抗体又被称之为单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]接下来采用体内或者体外方式对筛选的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞进行扩大培养,最后收集提纯获取单抗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]杂交瘤技术应用:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①疾病诊断:单克隆抗体在疾病诊断中发挥着重要作用,以其准确且无交叉反应的特点,显著提高了诊断的准确性。例如,在乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒的诊断中,单克隆抗体能显著减少假阴性的漏诊。[/font][font=宋体]②治疗载体:单克隆抗体也可以作为治疗疾病的载体。通过与抗肿瘤药物结合,单克隆抗体能在体内选择性集中攻击肿瘤细胞,具有靶向性,从而减少对正常组织的损伤并减轻抗癌药物的副作用。这种载药单克隆抗体被誉为“生物导弹”。[/font][font=宋体][font=宋体]③抗体序列保护:获取抗体基因序列后,可以通过专利对[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区进行保护,从而保护创新性的抗体序列。[/font][/font][font=宋体]④生产方式备份:由于杂交瘤存在退化转阴的风险,抗体序列可以通过基因工程方式轻松获得抗体样品,为生产方式提供备份。[/font][font=宋体]⑤抗体工程改造:获得的抗体序列可用于抗体人源化、双特异性抗体等抗体工程改造项目,进一步拓展抗体的应用范围和效果。[/font][font=宋体]⑥癌症研究:杂交瘤技术可以制备大量的特异性抗体,用于检测肿瘤标志物、研究癌细胞的生物学特性、筛选分子靶点等。此外,该技术还可以用于检测肿瘤细胞表面的抗原,通过对来自不同患者的癌瘤细胞进行克隆化和筛选,发现不同肿瘤的抗原异质性,为临床肿瘤治疗提供新的思路和策略。[/font][font=宋体]总的来说,杂交瘤技术以其独特的优势在多个领域都有着广泛的应用,为生物医学研究和疾病治疗提供了有力的工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service][b]杂交瘤细胞抗体基因测序服务[/b][/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service][b]杂交瘤细胞培养及抗体生产服务[/b][/url],有需求可以咨询。[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

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杂交瘤细胞相关的资讯

  • “小贝开讲”之自动化工作平台在杂交瘤高通量筛选中的应用
    时间:2018年11月8日 14:00 - 15:00内容简介:单克隆抗体具有高度专一性,它被广泛应用于生物学、药学、医学等领域。杂交瘤技术发明于上世纪70年代,到目前为止仍然是研制单克隆抗体的重要技术之一。细胞筛选是杂交瘤技术中的关键步骤,传统的手动筛选方法效率低,筛选通量小,且难以对操作过程进行数据追踪,已经不能满足新时代抗体新药发现的需求。本次讲座将介绍如何通过高通量自动化工作平台,大大减少在杂交瘤细胞筛选过程中的手动工作量,并能准确记录每一个操作步骤,极大的提高筛选通量,为杂交瘤单抗制备提供有利的帮助。主讲人简介:邓小芳 上海普铭生物科技有限公司 单抗研究员邓小芳在BioRad公司从事过多年杂交瘤小鼠单克隆抗体的研发,现就职于上海普铭生物科技有限公司,负责公司杂交瘤平台建设和管理,并主持参与多个单抗生物药的相关研发工作。上海普铭生物科技有限公司(PUREmAb Biotech)位于上海市浦东张江高新技术产业开发区,是专注于抗体药物早期研发的初创企业。公司现拥有1000平米的实验室,世界先进水平的高通量筛选仪器平台,以及杂交瘤制备和人源化改造、噬菌体展示抗体库和酵母亲和力成熟等工程技术平台。公司未来5年内将致力于申报若干新药的IND,对接集团中下游CMC研发生产企业(德斯特力生物技术有限公司),建立完整的抗体药物早期发现与临床产品生产链。
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    时间:2018年11月8日 14:00 - 15:00内容简介:单克隆抗体具有高度专一性,它被广泛应用于生物学、药学、医学等领域。杂交瘤技术发明于上世纪70年代,到目前为止仍然是研制单克隆抗体的重要技术之一。细胞筛选是杂交瘤技术中的关键步骤,传统的手动筛选方法效率低,筛选通量小,且难以对操作过程进行数据追踪,已经不能满足新时代抗体新药发现的需求。本次讲座将介绍如何通过高通量自动化工作平台,大大减少在杂交瘤细胞筛选过程中的手动工作量,并能准确记录每一个操作步骤,极大的提高筛选通量,为杂交瘤单抗制备提供有利的帮助。主讲人简介:邓小芳 上海普铭生物科技有限公司 单抗研究员邓小芳在BioRad公司从事过多年杂交瘤小鼠单克隆抗体的研发,现就职于上海普铭生物科技有限公司,负责公司杂交瘤平台建设和管理,并主持参与多个单抗生物药的相关研发工作。上海普铭生物科技有限公司(PUREmAb Biotech)位于上海市浦东张江高新技术产业开发区,是专注于抗体药物早期研发的初创企业。公司现拥有1000平米的实验室,世界先进水平的高通量筛选仪器平台,以及杂交瘤制备和人源化改造、噬菌体展示抗体库和酵母亲和力成熟等工程技术平台。公司未来5年内将致力于申报若干新药的IND,对接集团中下游CMC研发生产企业(德斯特力生物技术有限公司),建立完整的抗体药物早期发现与临床产品生产链。
  • ELISA方法学开发实践版3:杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发
    双十一结束小奥的购物车都清空了没法儿给你抄了我借ELISA实践笔记给你抄快到期末/年底了实验汪们可要抓紧搬砖咯前面三份笔记拉到文末看哦以下,可都是尖货儿哟!??Part 1 —— 前 言 | ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法,其实质是亲和力测定方法的一种变种,其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法,用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点:1.待测样本极具多样性,且单一样品通常也是混合物,有很大的可能存在非特异吸附;2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异,浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时,需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。本文是ELISA定量测定方法开发和亲和力测定方法开发的进阶版本,配体受体反应的基本原理解析,和两种应用的差异性区分是进行ELISA筛选方法的开发的基础。 Part 2 - 原理解析 - ELISA信号值和亲和力大小的关系 无论是进行杂交瘤的筛选还是噬菌体展示的筛选,其化学原理的实质是抗体和抗原可逆的相互作用,John McCafferty在Phage Display of Peptides and Proteins A Laboratory Manual一书的第七章节Phage Display:Factors Affecting Panning Efficiency中对可逆反应的数学原理有过理论的推导和实验的验证,简而概之可以用下面的公式进行描述:Abinput代表可逆反应中抗体的加入量,Aginput 代表可逆反应中抗原的加入量,Kd代表Ab和Ag的亲和力大小。由公式可知,当反应完成时,形成的抗原抗体偶联物占抗体的加入量的比值(proportion bound),是一个与抗原的加入量和亲和力大小这两个参数相关的特征函数。具体在ELISA测定过程中当抗体的加入量是恒定值时,proportion bound可以用检测的信号值来等价表示,在ELISA反应中抗原的加入量和Kd将决定信号的大小。相同浓度的抗体,因为亲和力不一样,在同一抗原浓度下其proportion bound的比例也不一样,用具体的图形演示如下图:红色实线是亲和力为1nM的抗体Ab1随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线,蓝色实线是亲和力为10nM的抗体Ab2随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线,绿色虚线为在相同抗原浓度下,Ab1/ Ab2 proportion bound的比值。在抗原浓度为10nM的条件下,90%的Ab1(Kd=1nM)和50%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物,作为ELISA检测的信号值,Ab1,Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上1.8倍的信号差异;在抗原浓度为1nM的条件下,50%的Ab1(Kd=1nM)和9.1%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物,作为ELISA检测的信号值,Ab1,Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上5.5倍的信号差异;在加入的抗体浓度是相同的情况下,加入反应的抗原的浓度越少,ELISA信号比值的差异和抗体亲和力比值的差异更具相关性。抗原的浓度决定了ELISA筛选方法的选择性!以上是关于杂交瘤和噬菌体展示筛选理论状态的推导,也是ELISA筛选结果出来了做出客观解读的理论依据,在实际的筛选应用过程中由于不同的待测抗体样品之间可能存在较大的浓度差异。在抗原浓度较高的情况下ELISA信号差异很多情况下由于抗体样品的浓度差异导致的,ELISA信号值对于亲和力大小不具有选择性;只有在抗原浓度较低时,信号值主要能够表征抗体亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响,而在ELISA方法开发时当抗原浓度较低时,相对于抗原浓度较高时,其ELISA信号值要弱很多,提升ELISA方法信号的灵敏度,如何通过优化酶联抗体的浓度,挑选显色液和选择显色时间以增强ELISA检测的信号值是一个有区分度的ELISA筛选方法的关键。当ELISA检测的信号值得到提升时,由于筛选样品复杂性,往往其背景信号也会极大的提升,如何通过封闭液,酶标板材等降低背景信号值,得到好的信噪比是一个高质量的ELISA筛选方法的另一个关键。Part 3 - 实例分享 - ELISA用于噬菌体展示筛选布 局——————(Note 1)一 般 操 作 流 程1.酶标板的制备取浓度为100 ug/ml抗原,室温溶解,混匀用包被液按如下步骤稀释至0.2ug/ml,0.5ug/ml,1ug/ml,按加样布局表加入100ml/孔,分别加入酶标板条中 (Note 2),其中加入包被液做包被抗体的空白对照,2-8℃过夜。2.用洗涤液洗板3次,拍干,加入300ml/孔封闭液(Note 3)室温封闭1小时;洗涤液洗板3次,拍干待用;3.取出包含有阴性对照和阳性对照过夜孵育制备含有噬菌体的深孔96孔板,在奥豪斯高速离心机中2000g离心15min,取上清,稀释10倍,一一对应加入包被好酶标板中。(Note 4)4.放入奥豪斯微孔板振荡器内 (如ISLDMPHDG- 30391935),设置37℃、600rpm振荡1小时; 5.用洗涤液洗板3次,拍干;6.抗M13 p8酶联抗体稀释到合适的浓度(Note 5),在漩涡混合器上(如VXMNFS-30392112)混匀,100ul/孔。7.放入微孔板振荡器内,设置37℃、600rpm振荡1小时; 8.用洗涤液洗板4次,拍干;9.取酶联抗体对应的TMB显色液,临用前20分钟拿出平衡到室温,在漩涡混合器上混匀;(Note 6)10.使用8道排枪以100 ml/孔加入TMB显色液;11.显色液室温避光放置10-30分钟 (Note 7);12.使用8道排枪以100ml/孔加入终止液终止反应;13.用酶标仪测定信号值;14.结果分析(Note 8)。Note1:由于不同的噬菌体样品有不同的亲疏水性,其对酶标板材的非特异吸附强度不一样,做一块没有抗原包被的阴性对照板是十分有必要的。Positive和Negtive是和样品有同样噬菌体制备过程,Positive Stock为早已经制备好的分装保存的阳性噬菌体,前者目的是监控在不同时间内噬菌体样品制备过程的差异,后者是监控在不同时间内ELISA检测操作的差异。Note2:在包被过程中,建议选择疏水性酶标板材(polysorp),这样可以极大的减少背景信号值,提高整个方法的信噪比。在实验初期包被的抗原浓度需要少量0.2-1ug/ml,然后根据不同包被条件下同一样品信号大小来进行判断优化。一个已知亲和力的展示阳性抗体的噬菌体是十分有必要的,根据该阳性展示噬菌体样品的信号值来确定最终筛选过程中抗原的包被浓度。抗原直接包被酶标板材上会屏蔽部分结合位点,造成部分假阴性的结果,如果条件允许可采用生物素化抗原,首先5ug/ml的链霉亲和素包板,然后加入0.05-0.2 ug/ml不等的生物素化抗原。抗原直接包被和间接包被其效率不太一样,采用间接包被可适当降低生物素化抗原的包被浓度。Note3:在有生物素化抗原参与的ELISA实验中,不要加入含脱脂奶粉的封闭剂,脱脂奶粉含有微量生物素,会干扰整个检测体系。Note4:噬菌体上清液的稀释比例,可提前根据阳性噬菌体样品做好稀释预实验进行确定。Note5:应选择抗噬菌体的P8蛋白的酶联抗体,噬菌体有2000个以上的P8蛋白,适当的增加酶联抗体的浓度可以提高方法的灵敏程度,笔者曾增加5倍的酶联浓度得到了3倍的信号提升。Note 6:市面上TMB底物最低和最高有10倍的显色差异,建议选择市面上最强的TMB显色底物。需要提前确认检测仪器的信号线性范围,比如一般的酶标仪吸光度值的信号线性范围在0-3,吸光度值在3-4之间为非线性的,信号值超过3时,信号和亲和力的相关性变差。Note 7:显色时间可适当的延长,一般来说在30分中内显色的信号值和显色的时间成线性。Note 8:条件的选择最终是通过阳性噬菌体的信号值决定的,阳性噬菌体的亲和力大小是一个非常重要的选择参数。如阳性噬菌体的亲和力为1nM时,筛选的目的是得到高亲和力的抗体,可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为0.5时的条件作为最终的筛选条件,这样很多OD值很小的低亲和力的抗体均被过滤掉;筛选的目的是尽可能得到多的亲和力抗体,可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为2-3时的条件作为最终的筛选条件,低亲和力的抗体在OD值上也不会太小,可以得到体现。不论如何抗原的浓度大小决定了选择性,选择较小的抗原浓度进行反应是信号和亲和力大小匹配的关键和趋势性选择,信号大小的调节可以通过酶联抗体浓度,高显色能力的显色液和显色时间进行调节。如果在一块板的检测中未知样品的信号值大小呈合理的分布是ELISA条件较好的表现。Part 4 - 总结 - ELISA用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是ELISA用于亲和力测定方法的一种变种,想要得到好的信号和亲和力大小的相关性,低抗原浓度条件下进行方法学开发是必须的。低抗原浓度条件下会有低的信号值,通过增加酶联抗体浓度,选择高显色能力的显色液和延长显色时间,增加ELISA灵敏程度是ELISA优化的技术方向。由于检测样品的多样性和复杂性,高灵敏的ELISA检测体系必然会导致背景信号的增加,无法得到很好的信噪比,疏水性的酶标板条,尽可能低的样品的稀释倍数是解决这个问题的关键。一个稳健的能用于杂交瘤和噬菌体展示筛选方法是ELISA各种耗材,试剂和实验条件的完美组合,需要对试剂耗材的多种可能进行探索,也是平台经验的系统汇总,以下是用于筛选方法的优化方向的汇总。 以上,就是小奥带给大家的第四篇ELISA方法学开发的干货内容!我们下期再见哦!

杂交瘤细胞相关的仪器

  • 多功能全自动细胞克隆分析及分离系统CellCelector Flex 将高内涵成像系统,高精度全自动细胞挑取机械臂和强大的成像处理分析软件相结合,可对单细胞、细胞团、球体、类器官、单细胞克隆以及贴壁细胞进行全自动检测、筛选、挑取和分离。挑取技术:已经获得专利的挑取技术支持极快的细胞扫描和挑取,从而快速分离细胞。温和地进行细胞转移,保证高度的细胞完整性和生长速率。对于一些应用,如单细胞克隆,可以实现高达 100% 的挑取/转移效率。CellCelector Flex关键特征多功能 &bull 适用于贴壁细胞、悬浮细胞或半固体培养基中的细胞 &bull 单细胞、细胞团、球体或菌落 &bull 原代细胞或细胞系 &bull 活细胞或固定细胞灵活 &bull 明场、相差和荧光成像 &bull 自动、半自动或手动细胞筛选,以供挑取分离 &bull 兼容标准或定制源容器和目标容器,如微孔板、培养皿、载玻片、过滤器、芯片、PCR板或管&bull 可升级的定制解决方案,可整合至大平台可靠 &bull 对特定细胞亚群超过95%的挑取准确性 &bull 对移动的检查对象进行自动重新定位 &bull 如果挑取失败,可重新挑取 &bull 软件自动检测是否成功挑取温和挑取 &bull 不影响细胞特性 &bull 可分离准备用于分子表征或下游培养的纯完整细胞 &bull 挑取后的细胞完整性和存活率高(包括单细胞克隆应用中高达95%及以上的存活率)快速 &bull 实验操作时间短 &bull 每次挑取仅20至30秒上游|下游兼容 &bull 无需复杂的样本制备,无需昂贵的耗材 &bull 与多个上游富集技术(免疫磁珠富集、基于尺寸的分离等)兼容 &bull 抽吸和点样体积小(降至约1 nL) &bull 单细胞PCR、NGS、RNA-Seq、细胞克隆、滴度分析、放大工艺等记录 &bull 符合GLP和GMP标准的完整工作流程记录 &bull 通过在每次挑取事件前后拍摄的实时、高质量图像进行质量控制 &bull 每一个被检测/捕获的对象都可以通过其唯一的ID进行识别,并可以在整个过程中从源板到终板进行完整的追踪,方便导出所有捕获的图像和数据 CellCelector Flex 关键应用单细胞分离&bull 稀有单细胞分离&bull 循环肿瘤细胞CTCs分析和分离&bull 胎儿细胞cbNIPT&bull 精子细胞分离&bull 原生质体/植物细胞&bull 单细胞异质性分析&bull CRISPR单细胞克隆细胞系开发&bull 用于细胞系开发的单细胞克隆 &bull mini Pool建立及筛选 &bull 从半固体培养基中进行菌落挑取及转移抗体发现&bull 单B细胞筛选 &bull 基于纳米孔的杂交瘤筛选 &bull 来自半固体培养基的杂交瘤克隆的筛选和挑取 &bull 杂交瘤亚克隆 &bull 基于微球的检测干细胞&bull iPS单细胞克隆 &bull 干细胞克隆挑取 &bull 造血干细胞克隆挑取 &bull 球体分离 CellCelector Flex 挑头我们根据CellCelector Flex 在不同领域的应用提供多种挑头。针对特定的细胞类型和挑取捕获模块对所有毛细管和挑头进行了优化,以保证温和、精准地挑取挑取细胞、细胞团以及克隆,整个过程无污染。CellCelector Flex 纳米孔板CellCelector Flex 纳米孔板含有十万到数百万个纳米孔,将细胞悬液接种后,数万个纳米孔有效地将细胞隔离开来,并确保共培养环境以促进单克隆生长。有效替代有限稀释法,FACS。&bull 高通量:每孔可获得400-600个单细胞(相当于有限稀释法25块96孔板!)&bull 高效节约:避免重复稀释,单次试验即可获得单克隆性、活力且高产的克隆&bull 100%单克隆性:自动图像鉴别单细胞并跟踪其生长到克隆,避免交叉污染&bull 单细胞活率超95%,无需昂贵外源生长因子CellCelector 机柜当处理活细胞时,无菌条件和经过调节的生理相关环境是关键因素。FlowBox 孵育箱可提供以下独特组合: &bull 经过HEPA过滤的垂直层流 &bull 对温度、湿度和CO2水平的精确控制 &bull 即使在检修门打开时,也能智能控制风速和排气量 &bull 高能紫外线灯,用于表面灭菌 &bull 源板和终板的最优细胞存活率 &bull 用户友好型控制面板 &bull 在不失去受控条件的情况下,充分方便地接触放置在里面的仪器和实验装置
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  • 杂交瘤高通量筛选自动化系统 系统支持高通量的细胞铺板、细胞96/24/6孔板培养、细胞计数、细胞传代、有限稀释法获取单克隆以及ELISA、流式细胞术的单克隆筛选。全程数据追踪,在线结果反馈并自动进行下游操作,支持系统未来扩展升级。产品特点信息反馈和追踪:根据酶标等数据反馈至自动化系统中,进行目的孔的挑取和细胞传代; 高效:独特的分区设计,各功能岛可以独立使用,既保证的细胞的培养环境,又兼顾了常规检测的需求;快速:单次可进行多块细胞培养的培养、计数、转板、挑空等实验过程。 多项目并行:具有项目管理功能,多项目并行应用领域肿瘤的生物治疗及靶向治疗、单克隆抗体药物的研发与制备、细胞免疫治疗研究
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  • 产品特点1.仪器启动和加减速度非常平稳,保证了实验样品的安全;2.适合实验室各种样品瓶,如培养皿,三角瓶和培养瓶;3.不锈钢托盘和耐磨橡胶平台,耐酸碱、不变形、易清洗、防溢漏;4.单层或者双层托盘设计,适用样品量小或者大的实验室;5.实时转速显示和定时显示,方便直观。可设定为不定时连续运转;6.连接件采用滚珠轴承,耐磨损,噪音小;7.采用直流无刷电机,免维护。描述RS-100 翘板摇床是一款采用了直流无刷电机技术以及微电脑控制技术的混匀设备,可以直接放在温室内或冷冻室内使用,广泛应用于各种电泳凝胶的固定,考马斯蓝染色、脱色时的振荡晃动,硝酸银染色的固定、染色、显影等,放射自显影实验中 X 光底片的显影、定影、电泳转移后,纤维素膜的进一步处理,如培养细胞杂交,凝胶体的着色或去色,抗原、抗体的反应和染色等。适合实验室各种样品瓶,如培养皿,三角瓶和培养瓶。
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杂交瘤细胞相关的耗材

  • 比较基因组杂交CGH芯片微阵列
    比较基因组杂交CGH芯片微阵列是一种建立在发现基因组失衡和染色体畸变(异常从几百碱基到几兆碱基)基础上的技术。这种技术允许对基因组异常进行定量分析,分辨率比Constitutional 染色体组型高50?100倍。 Constitutional Chips4.0是在细胞遗传学领域的一个创新,用于分子诊断和研究的持续发展。该CGH芯片应用于许多领域和研究领域,如新生儿和产前诊断,肿瘤细胞和干细胞领域。 CGH芯片特色 Constitutional Chips4.0的一些特征 杂交前,DNA样本不需要放大。该芯片提供整个基因组的高分辨率视图,没有缺陷基因的预选,不像FISH(荧光原位杂交) 提供临床显著基因位点的全面覆盖。 不要求细胞培养,不像Constitutional核型分析的技术。 使用该技术,可以在2天内获得的结果。 编号 名称 4060-0010 Constitutional Chips 4.0 (10 芯片) 4040-0020 标签试剂(适合 10芯片) 4050-0010 杂交试剂 (10 芯片)
  • 单室杂交盒
    单室杂交盒专门为DNA,蛋白质和其他类型微阵列盖玻片反应提供原始反应环境。单室杂交盒使用方便,并增强信号强度,降低背景噪声从而提高杂交反应结果。单室杂交盒参数规格:?设计允许在水盒中堆叠,以确保均匀的反应温度?可以扩大反应温度范围:0?70℃?易于用手组装和拆卸,无需工具?用抗化学腐蚀材料做成,价格经济?颜色:红,黄,紫,蓝,绿和黑色。?使用温和的清洁剂和大量蒸馏水彻底清洗。非高温高压消毒。编号 设计说明 AHC 杂交盒。 室深1.5毫米。颜色:黑 AHCA 杂交盒。室深1.5毫米深。颜色:紫 AHCTZ 杂交盒。 室深1.5毫米深。颜色:蓝 AHCP 杂交盒。室深 1.5毫米深。颜色:绿 AHCC 杂交盒。 室深1.5毫米深。颜色:黄 AHCR 杂交盒。室深 1.5毫米深。颜色:红 AHCXD 杂交盒。 室深1.5毫米深。颜色:黑
  • WHEATON 杂交瓶
    惠顿杂交瓶优势:在核酸和蛋白印迹实验中只需要极少的探针溶液;不必需杂交袋;杂交和清洗溶液能够快速进出;满足各种杂交仪器,如Barnstead、Hybaid和Bellco等品牌; 3.2mm加厚侧壁提高了安全保障。 惠顿杂交瓶由惠顿200玻璃制造,满足USO Type I标准。此外,也可得到坚实的防滑塑料包被的杂交瓶子,进一步降低了潜在的破碎和有毒材料暴露风险。 订购信息:货号产品名称规格80502735 X 300 mm Btl, Hybrid, PTFE/Sil Ln, CtCS80502335 X 150 mm Btl, Hybrid, PTFE/Sil Ln, CtCS80502135 X 100 mm Btl, Hybrid, PTFE/Sil Ln, CtCS80502035 X 75 mm Btl, Hybrid, PTFE/Sil Ln, CtdCS80501170 X 300 mm Btl, Hybrid, Bnd PTFE LnCS

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