血液琼脂基础

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    琼脂糖电泳步骤之超级基础篇一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子,板子,槽子,蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染,减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽,根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良,确保buffer的缓冲能力,减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果,防止样过快跑出胶或者是过慢浪费时间。4.计算agarose的用量和制胶 buffer的用量记录,胶最终越薄越好。实验记录备查 二、制胶步骤注意事项1.称量agarose和bufferBuffer不要用成H2O,称量相对准确2.融胶,加热到胶产生大量的气泡时,拿出摇匀,继续加热到完全溶解,拿出摇匀,再加热到沸腾。非常热,小心烫手,另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解,减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。3.倒胶,可用水浴的办法使胶冷却到60度左右,即手可以握住瓶子的温度,沿着制胶板的一侧,缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的,注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入,在60度左右时加入,使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低,染色成像不明显;不宜过高,导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动,尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀,而且凝的速度也相对快,强烈建议跑完胶之后再用EB染色。4.室温凝胶30分钟过程中不要碰到梳子,尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久,导致胶干燥变形;不宜过短,影响胶内部孔径形成。5.拔梳子,放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出,尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。 三、上样电泳[

  • 【原创大赛】琼脂糖方法交流

    【原创大赛】琼脂糖方法交流

    琼脂糖凝胶电泳是分子实验的基础,方法步骤也再熟悉不过了,把它下来主要是和大家一起分享自己的操作习惯和通过图片展示一下操作环境,并一起讨论实验中遇到的问题。一 简单概述琼脂糖凝胶电泳时用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法,因为琼脂糖凝胶具有网络状的结构,小分子可以顺利通过,而大分子在通过时会受到阻力,从而把大分子和小分子分离来。在电泳时,分子移动速度与分子大小和分子所带电荷有关,分子越大移动速度也慢。蛋白质是高分子物质,因此不适用于凝胶电泳,现今凝胶电泳被广泛应用于类似核酸的小分子的研究中。二 实验操作总结1准备好各种试剂和设备,设备包括电泳槽,电泳仪,微波炉,三角瓶,搅拌器,制胶槽和梳子,电子秤,量筒;试剂包括电泳缓冲液TAE,琼脂糖,核酸染料。2 根据制胶的大小和浓度,称量相应重量琼脂糖,加入对应体积的缓冲液,混匀,用微波炉加热至琼脂糖完全溶解,此时溶液澄清,无游离状物质漂浮于液体中。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559545_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062228_559542_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559549_3030887_3.jpg3 加热溶解后冷却,期间加入核酸染料,一点即可。4冷却至不烫手即可导入到制胶槽中。冷却的目的是防止琼脂糖溶液温度过高是制胶槽和梳子变形。倒入制胶槽后,赶走胶上的气泡,插上梳子。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559547_3030887_3.jpg5等待十分钟左右至胶凝固,拔掉梳子。注意的是经常有人拔梳子时吧点样孔破坏,所以拔梳子时手掌先压住电泳槽,然后拿住梳子两边,快速向上用力将梳子拔出,这样能较好的避免点样孔的损失。6胶制好后,点样。点样分为干点和湿点两种,干点是不在缓冲液中点,直接在外界中操作;湿点是将胶放入缓冲液中点样,样品点样前先加入Ladding Buffer,Ladding Buffer目的是帮助样品沉淀,有时干点可不加,但是湿点的时候最好要加。7电泳,将点样后的胶放入电泳槽中,注意电极方向,根据电泳槽大小设置电泳时间和电压。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559548_3030887_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062230_559546_3030887_3.jpg8成像。电泳完后,在琼脂糖凝胶显色系统中拍照保存,进行后续实验。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508062229_559544_3030887_3.jpg9 分析。从上面的图片可以看出有些带相对较亮,有些带相对较弱,可能与DNA浓度有关。另外有些带似乎有拖带,可能是引物二聚体。不过总体还说结果还算可以,带型清晰可变。三 写在后面的话总的来说步骤有些多,但是并不是很复杂,也没有很难的技术要点,但是根据成相系统拍摄出来的照片效果显色,一个同样的样品,有时因为制胶的原因,呈现的效果完全不一样,这可能与胶的溶解和加入染料的量、电泳条件等等有关,因此琼脂糖凝胶电泳时需不断总结经验,做出来的胶图才能很漂亮。

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  • 17项血液检测标准即日废除
    我委组织对现行有效的卫生健康标准进行了复审。根据复审结论,《血清载脂蛋白A1及载脂蛋白B免疫透射比浊测定法》(WS/T 121-1999)等17项标准自本通告发布之日废止。特此通告。附件:废止标准目录                           国家卫生健康委2022年3月18日附件17项废止标准目录序号标准编号标准名称1WS/T 121-1999血清载脂蛋白A1及载脂蛋白B免疫透射比浊测定法2WS/T 231-2002用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水Mueller-Hinton琼脂的检验规程3WS/T 247-2005甲型胎儿球蛋白检测 产前监测和开放性神经管缺损诊断准则4 WS/T 250-2005临床实验室质量保证的要求5 WS/T 345-2011  血清尿素测定参考方法6 WS/T 350-2011血清葡萄糖测定参考方法7WS/T 357-2011骨代谢标志物临床应用指南8WS/T 358-2011血清(浆)脂蛋白(α)的免疫测定9WS/T 410-2013血清高密度脂蛋白胆固醇测定10WS/T 412-2013血清甘油三酯测定参考方法 同位素稀释气相色谱质谱法11WS/T 419-2013参考物质中酶活性浓度的赋值12WS/T 443-2013血中铅、镉的测定 钨舟原子吸收光谱法13WS/T 454-2014从业人员预防性健康检查 沙门菌志贺菌检验方法14WS/T 460-2015前列腺特异性抗原检测前列腺癌临床应用15WS/T 462-2015冠状动脉疾病和心力衰竭时心脏标志物检测与临床应用16WS/T 463-2015血清低密度脂蛋白胆固醇检测17WS/T 490-2016临床化学测量系统校准指南
  • 美韩研制出超小型血液检测仪
    据韩国联合通讯社报道,韩国浦项工科大学5月17日表示,该校机械工程系李相贤(音译)博士和美国密歇根大学艾伦亨特教授率领的联合研究小组利用某些绝缘体在纳米级时具有导电性的原理,成功开发出可测定红血球大小等各类血液指标的超小型血液检测仪。   该研究小组通过实验证明,玻璃等非导体分解至纳米大小时,具有同普通半导体一样的导电性,只要输入很低的电压,电流就能通过。在此基础上,他们开发成功了液体玻璃纳米电极,其在制造微流体实验室芯片(Lab-on-a-chip)等尖端医疗设备或纳米大小的半导体方面大有作为。   研究小组将电极应用于纳米大小的仪器,制成了一种超小型化学分析装置,并用细微加工技术将其集成在硬币大小的芯片里,由此开发出超小型血液检测仪,只需一滴血液的1%,就能测定红血球大小等各类血液指标。   由于用这种液体玻璃纳米电极研制化学分析装置时不需要同时集成导体和非导体,因此它还可用于制造针对单一细胞的超小型医疗设备。   该研究结果刊登于5月17日《自然纳米技术》网络版。

血液琼脂基础相关的仪器

  • 产品用途:适用于分离、制备DNA、RNA。产品特点:聚碳酸酯注塑成型,透明度高;可以制作四种不同规格的琼脂糖凝胶,制胶方便;凝胶托盘带有加样背景黑带和荧光标尺,便于加样和观察;透明上盖开孔式设计,便于散热;开盖断电,确保安全;下槽桥式设计,节省缓冲液;上盖具有限位功能,保证操作准确; 技术参数:电极铂金丝直径为0.3mm,纯度为99.95%,电场稳定;缓冲液量:约650 ml凝胶板规格(L×W):60×60mm;120×60mm(长胶);60×120mm(宽胶);120×120mm;外形尺寸:31x15x12cm样品梳:11+25齿(1.0mm厚);6+13齿; 8+18齿(1.5mm厚);2+3齿(2.0mm厚) ;双层水平电泳槽EPC SDY6产品用途:适用于分离、制备DNA、RNA。产品特点:一次可跑双层琼脂糖凝胶,使电泳效率提高一倍;槽体为高透明度PC材料,上盖开孔,便于散热和观察;凝胶托盘带有荧光标尺,便于观察分析;桥式设计结构,节省缓冲液;电极架可拆卸,方便清洗与更换;技术参数:凝胶数量:1—2块;凝胶托盘:1—2层,2层托盘之间为嵌入式结构,组合灵活方便;凝胶面积(L × W):100 × 70mm;加样梳规格:8齿、15齿,1.0、1.5mm(厚度);缓冲液容量:400ml左右;产品重量:0.5kg;外形尺寸:197 × 96 ×100mm;小型水平电泳槽EPC SDY2产品用途:适用于分离、制备DNA、RNA。产品特点:槽体为高透明度PC材料,上盖开孔,便于散热和观察;凝胶托盘带有荧光标尺,便于观察分析;桥式设计结构,节省缓冲液;电极架可拆卸,方便清洗与更换;技术参数:缓冲液容量:260ml;凝胶面积(L × W):100×70mm;加样梳规格:8齿、15齿,1.0、1.5mm(厚度);外型尺寸:27× 12 ×11cm ;
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  • 智能琼脂培养基分装系统 实现琼脂培养基的无菌分装和堆叠自动化,内含直径90mm平皿分装模块;可选配直径55mm,150mm等规格的平皿分装模块、保温模块、摇晃混匀模块、复层倾注模块。可大幅度提高分装效率、减少人工工作量、降低不同皿之间的分装量误差、消除交叉污染风险。 产品特点适用于55mm、90mm、150mm 等各种规格培养皿类型培养基保温技术:室温至50℃可调内置紫外灯,分装区域独立消毒,预防交叉污染分装效率:300皿/h培养皿贴标 应用领域琼脂培养基分装技术参数名称/型号智能琼脂培养基分装系统 / HONOR500ZFZ电源单相三线电压:220V;50Hz使用环境温度10-30℃,湿度35-80 %,万级(C级)洁净区域及以上通量400皿/批分液体积约 10mL-100mL,可设定分液精度≤±2%(水样溶剂)分液速度10-1000mL/min分装效率300皿/h紫外消毒功能支持,分装区域独立消毒,预防交叉污染保温模块选配:室温至60℃可调摇晃混匀模块选配,具有正反摇晃混匀功能复层倾注模块选配
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  • 产品介绍:PureCube Rho1D4 Agarose是针对Rho1D4标签膜蛋白的亲和层析产品,Rho1D4是一种含有9个氨基酸的长链亲和标记物(TETSQVAPA),可用于高特异性亲和蛋白纯化。库柏生物的PureCube Rho1D4琼脂糖纯化树脂是为FPLC蛋白的纯化测定而制造的。具有Rho1D4标签的膜蛋白可以通过PureCube Rho1D4 Agarose,利用Rho-tag高特异性来纯化,它在蛋白质产量和纯度方面甚至胜过更常用的Flag-Tag标记。本产品由通过Rho1D4抗体进行功能化40 μm琼脂糖微球组成。德国Cube Biotech研发团队拥有逾40年经验在膜蛋白的表达、纯化和结晶等研究经验,为您提供专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列高质量PureCube Rho1D4琼脂糖填料、磁珠和预装柱,以及具有较高流速XL琼脂糖同系列产品。产品优势:1)德国制造,欧美优质膜蛋白纯化产品供应商;2)膜蛋白纯化的理想解决方案,可以获得纯净且活性的膜蛋白;3)结合能力可高达3-4mg/mL;4)高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白;5)可重复再生使用;6)良好的流量分布和最小空隙体积;7)兼容常用的色谱仪器;8)配合Nanodisc使用,是目前非常有效的膜蛋白提取解决方案,数家科研院校正在使用;9)高性价比的膜蛋白纯化产品! 产品详解:对膜蛋白提取有高特异性和高产量每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验,以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用,辅以优化过的纯化操作步骤,能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达,再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液,4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段,可以通过排阻层析的方法实现。 图1:用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。大肠杆菌裂解液(TL)溶解在Fos-Choline-14中,溶解的组分(SF)与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白,经分光光度计测定,CXCR4在洗脱组分(E1-E4)中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。 蛋白表达系统纯度产率(所有回收蛋白)采取的纯化步骤hVN1R1G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%1mg/1g细胞Rho1D4 IAC+SECFPR3G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%2mg/6g细胞Rho1D4 IAC+SECTAAR5G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%1mg/9g细胞Rho1D4 IAC+SECOR131-2G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%2.9mg/10g细胞Rho1D4 IAC+centrifugationhOR17-4G蛋白偶联受体可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)90%7.5mg/2.5L培养物Rho1D4 IAC+SEChOR17-4G蛋白偶联受体无细胞小麦胚芽提取物70%*0.3mg/mL反应溶液*Rho1D4 IAC+SECCD81四次跨膜蛋白可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物)>95%26μg/3×10^7个细胞Rho1D4 IACAE1溶质载体S.啤酒系BJ545793%2.5mg/18L培养物Rho1D4 IAC 表1:有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族,该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC:免疫亲和层析;SEC:排阻层析。在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体,当时通过将抗体偶联到Sepharose上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此,Rho1D4系统(标签,偶联抗体的亲和基质,洗脱肽)开始用于少量膜蛋白的纯化,包括G蛋白偶联受体(GPCR),ATP结合转运体,溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。 图2:假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端,它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端(或N端)加上Rho1D4标签(如图1)。一旦配有该序列,即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白,并随后通过添加过量Rho1D4多肽,产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白,用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究,如:配体结合的特性,蛋白与蛋白间的相互作用。*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的;产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。 技术参数:用途Rho1D4 (TETSQVAPA)标记蛋白的高特异性亲和纯化特异性与Rho1D4标记蛋白的亲和性特殊功能强烈推荐用于膜蛋白的纯化 结合力3-4 mg / ml 琼脂糖磁珠配体Rho1D4 抗体粒径大小40 μm螯合剂稳定性在含有10 mM DTT 和 1 mM EDTA的缓冲液中稳定 罐装量以 50?%悬浮液进行运送所需设备 裂解液 洗涤缓冲液 洗脱缓冲液 冰水浴 可用50?mL离心管的可预冷离心机 (最小转速 10,000 x g) 50?mL 离心管 微量移液枪和微量移液枪尖 一次性重力柱,带盖底出口,2ml pH计 回转摇床 SDS-PAGE缓冲液,试剂和设备 可选择:Western Blot试剂和设备 推荐流速和保存温度0.25-1.0mL/min,4℃相关产品:1. 所有PureCube系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统(如:FPLC)的预装柱(提供1mL);2. 用于稀释样品或用于pull-down实验,我们推荐使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠;3. Rho1D4抗体:这种抗体作为分离物质来生产PureCube的Rho1D4琼脂糖。也可以在Western Blot实验或者ELISA实验中检测rho-tagged蛋白;4. Rho1D4多肽:在洗脱缓冲液中,Rho1D4多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释放标签蛋白,相对于改变洗脱液的pH值来说提供了更温和的洗脱环境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段,这些肽段已经被PureCube Rho1D4琼脂糖验证;5. 配合Nanodisc产品使用,是有效的膜蛋白提取解决方案。6. Rho1D4多肽可以单独购买,也可以购买PureCube Rho1D4试剂盒套装。详情请参见订货信息以及公司官网。What our customers say:订购信息:33101PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml)33102PureCube Rho1D4 Agarose (5 ml)33103PureCube Rho1D4 Agarose (10 ml)33301PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml)33305PureCube Rho1D4 Cartridge (1x5 ml)33199Rho Starter Set 1: PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)33299Rho Starter Set 2: PureCube Rho1D4 MagBeads (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)33399Rho Starter Set 3: PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg)16201Rho1D4 peptide (5 mg)16203Rho1D4 peptide (25 mg)40020Rho1D4 Antibody (200 μg)
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