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糖化酶和高温酶活性的测定我们用分光光度计来测,要求波长660,但是,由于酶的活性比较高,每次测定都要稀释,有一个稀释倍数,这个稀释倍数需要算出来,不知道怎样才能算得准确,和算的方法.稀释倍数不对就测不出来.请求帮助!!!
GB 8276-2006 食品添加剂 糖化酶制剂[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=51382]GB 8276-2006 食品添加剂 糖化酶制剂[/url]
中华人民共和国国家标准 中华人民共和国国家标准食品添加剂 糖化酶制剂 GB 8276-87Food additiveGlucoamylase preperation━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本标准适用于由发酵法生产,经提纯制取,供食品生产作添加剂用的糖化酶制剂。1 技术要求1.1 外观:固体时,粉状,无结块。液体时,黄褐色,允许有少量凝集物。1.2 项目和指标表 1 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┃ 指 标项 目 ┣━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━┃ 固 体 ┃ 液 体━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━┃ 30 000,40 000, ┃ 20 000,30 000┃ 50 000,60 000, ┃ 40 000,50 000酶活力,u/g(mL) ┃ 80 000,100 000, ┃ 60 000,80,000┃ 150 000,200 000, ┃ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━水分,% 不小于 ┃ 8.0 ┃ -━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━细度(通过40目铜网筛)% 不小于 ┃ 80 ┃ -━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━酶活力保存率(室温,半年),% 不小于 ┃ 80━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━重金属(以Pb计),% 不超过 ┃ 0.004━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━铅,% 不超过 ┃ 0.001━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━砷(以As计),% 不超过 ┃ 0.000 3━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━黄曲霉毒素B1,% 不超过 ┃ 0.000 0005━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大肠菌群,个/100g(ml) 不超过 ┃ 30 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━沙门氏菌 ┃ 不得检出 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━2 试验方法2.1 外观:用目视判定。2.2 酶活力测定2.2.1 试剂2.2.1.1 0.1N乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH4.6):称取6.7g乙酸钠(CH3COONa3H2O),吸取冰乙酸2.6mL,用蒸馏水溶解定容至1 000mL,上述缓冲溶液应以酸度计校正pH值。2.2.1.2 0.05N硫代硫酸钠溶液:按GB 601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.7执行。2.2.1.3 0.1N碘液:按GB 601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.10执行。2.2.1.4 0.1N氢氧化钠溶液:按GB 601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.2执行。2.2.1.5 2N硫酸溶液:量取分析纯浓硫酸(比重1.84)5.6mL缓缓加入适量蒸馏水中,冷却后用蒸馏水定容至100mL,摇匀。2.2.1.6 20%氢氧化钠溶液:称取20g分析纯氢氧化钠,用蒸馏水溶解定容至100mL。2.2.1.7 2%可溶性淀粉溶液:称取可溶性淀粉2.00g,然后用少量蒸馏水调匀,徐徐倾入已沸的蒸馏水中,煮沸至透明,冷却,用蒸馏水定容至100mL,此溶液需当天配制。注:可溶性淀粉应符合HG 3-30 95质量标准要求。2.2.2 测定程序 2.2.2.1 待测酶液的制备:称取酶粉2.0000g(或1.00mL酶液),倒入50mL烧杯中,用少量的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH4.6)溶解,并用玻璃棒捣碎,将上层清液小心倾入适当的容量瓶中,沉渣再加入少量上述缓冲溶液,如此反复捣研3~4次,最后全部移入容量瓶中,用缓冲溶液定容至刻度,摇匀,通过4层纱布过滤。再用滤纸滤清,滤液供测定用。浓缩酶液可直接吸取一定量于容量瓶中,用缓冲溶液稀释定容至刻度。注:制备酶液时,酶液浓度最好控制在消耗0.05N硫代硫酸钠(空白-样品)的差数为3~6ml左右(以每毫升酶活力约50~90单位为宜)。 2.2.2.2 测定:于甲、乙两支50mL比色管中,分别加入2%可溶性淀粉溶液25mL,0.1M乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH4.6)5mL,摇匀。于40±0.2℃的恒温水浴中预热5~10min。在甲管中加入酶制备液2.0mL(酶的总活力约110~170单位)立即记时,摇匀。在此温度下准确反应1h后,立即在甲、乙两管各加20%氢氧化钠溶液0.2mL,摇匀,将两管取出迅速用水冷却,并于乙管中补加酶制备液2.0mL(作为对照)取两管中上述反应液各5mL放入碘量瓶中,准确加入0.1N碘液10mL,再加0.1N氢氧化钠溶液15mL(边加边摇晃),放置暗处15min,加入2N硫酸2mL,用0.05N硫代硫酸钠溶液滴定至无色为终点。