细胞色素对照品

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  • 【求助】细胞色素c循环伏安中出现的问题

    我以ITO导电玻璃作为电极,其表面经过3-氨丙基三乙氧基硅烷进行了修饰,然后浸在细胞色素c的磷酸盐缓冲溶液(pH=7)中经过一段时间的吸附。然后以此修饰了的ITO作为工作电极,铂为对电极,参比电极为甘汞电极,电解液为磷酸盐缓冲溶液(pH=7),做出的循环伏安曲线很漂亮。但是我发现随着扫描速的增加,其氧化还原电位差越来越大,也就是说两个峰都随着扫描速度的增加往两端移动,不知道是什么原因。理论上,其峰电位应该是不变的,希望各位大侠们不吝赐教,谢谢!!我用的是CHI660a。

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  • 人黑色素细胞抗体(MC Ab)检测试剂盒
    人黑色素细胞抗体(MC Ab)检测试剂盒人黑色素细胞抗体(MC Ab)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人黑色素细胞抗体(MC Ab)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人黑色素细胞抗体(MC Ab)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人黑色素细胞抗体(MC Ab)抗原、生物素化的人黑色素细胞抗体(MC Ab)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人黑色素细胞抗体(MC Ab)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人细胞色素C(Cyt-C)检测试剂盒
    人细胞色素C(Cyt-C)检测试剂盒人细胞色素C(Cyt-C)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人细胞色素C(Cyt-C)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人细胞色素C(Cyt-C)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人细胞色素C(Cyt-C)抗原、生物素化的人细胞色素C(Cyt-C)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人细胞色素C(Cyt-C)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人黑色素细胞刺激素(MSH)检测试剂盒
    人黑色素细胞刺激素(MSH)检测试剂盒人黑色素细胞刺激素(MSH)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人黑色素细胞刺激素(MSH)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人黑色素细胞刺激素(MSH)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人黑色素细胞刺激素(MSH)抗原、生物素化的人黑色素细胞刺激素(MSH)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人黑色素细胞刺激素(MSH)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

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  • 活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例
    活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,今天,生物发光标记物可以标记到任何一种基因上,使对基因功能的全面细致研究成为现实。而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进行标记,利用荧光蛋白在外源光源或是内源发光照射下被激发产生的荧光作为检测信号。研究人员能够利用一套非常灵敏的光学检测仪器直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。 该技术可被广泛应用于标记细胞或基因的示踪及检测;基因治疗在活体动物体内直接的观察和检测;基因组、蛋白组学、药学及生物技术在活体动物内的研究;药物及化学合成药物的药物代谢及毒理学监测;食品菌落生长成像;皮肤医学中皮肤疾病的体内成像;法医鉴定;微孔板成像,例如:免疫分析、报告基因、基因探针和嗜菌作用分析等;荧光团的体内成像,例如:Alzheimer疾病研究中结合嗪的β-淀粉沉淀物分析;转基因植物中通过报告基因对生理周期节奏的研究;凝胶成像分析等等。 但在研究过程中,研究者们必须事先用基因技术进行荧光素酶基因标记,或者某种荧光报告基团标记。目前活体光学成像系统的知名制造商,如Berthold、GE、Xenogen、Photometrics、Carestream Health等,不仅为客户提供先进的仪器,也提供具体实验所需的整套解决方案,包括试剂、实验手册、特殊用途的质粒、细胞株、转基因动物、细胞处理和动物处理设施等配套技术支持。出色的多任务处理能力,人性化的整体设计,便捷精确的操作系统,使实验室影像分析领域进入了一个全新的时代。 下面以研究干细胞活体移植后的存活率为例,简介一两种内源性荧光色素标记的实验方法,供专业人士参考。 用荧光色素DiD标记 间充质干细胞 1. 先用胰蛋白酶消化待标记材料,使之成为一定密度的悬浮液; 2. 从细胞培养箱中取出间充质干细胞,吸取含原有培养基的细胞悬浮液进行标记; 3. 用10 ml Mg/Ca-free PBS (不含钙镁离子的磷酸缓冲液)清洗细胞,吸去PBS, 钙镁离子会影响胰蛋白酶的活性,必须小心; 4. 加入预热的0.05% 胰蛋白酶液,加液量以T75型瓶为例,每瓶加5ml, 确保瓶的表面被完全覆盖; 5. 在细胞培养箱中37° C 孵育约 5 分钟; 6. 然后在显微镜下确认细胞已经完全分散,如果有细胞贴壁情况,轻拍若干次或延长孵育时间直至酶解消化完全成功; 7. 加入等量含 10% FCS的培养基中和胰蛋白酶; 8. 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散; 9. 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中; 10. 400 RCF离心5 分钟; 11. 小心移去上清液,不要扰动细胞; 12. 将细胞重新悬浮于DMEM 并进行计数; 13. 需要待标记细胞在无血清DMEM溶液中的密度应为1x106 /ml ; 14. 每ml细胞悬浮液加入5 ?L DiD 染色液; 15. 用移液器将染色液与细胞悬浮液混合均匀; 16. 在6孔低附着性细胞板上37 °C 孵育20分钟; 17. 孵育完全后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中; 18. 400 RCF离心5 分钟; 19. 小心移去染色液,不要扰动细胞; 20. 用PBS清洗细胞,用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散; 21. 重复洗三次; 22. 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性; 23. 可以进行活细胞成像了! 用荧光色素ICG标记 人胚胎干细胞 1. 必须先准备好吲哚菁绿溶液(血容量、心输出量、肝功能测定剂)作为对照品 ,然后使之与转染试剂鱼精蛋白(抗凝血作用)混合; 2. 测出1ml吲哚菁绿溶液的活力,然后在100 ?L DMSO中溶解ICG; 3. 向混合物中加入 400 ?L Dulbecco的改良Eagles 培养基 (DMEM + 10% 胎牛血清), 震荡均匀,吲哚菁绿溶液终浓度为2mg/ml; 4. 加入转染试剂鱼精蛋白,鱼精蛋白作为对照品的载体,使之能够有效进入细胞; 5. 在300 ?L ICG 和 300 ?L 无血清Dulbecco改良 Eagles 培养基中混入 5 ?L 硫酸鱼精蛋白溶液, 使之终浓度为 10mg/ml,; 6. 震荡5分钟使之形成复合物,标记溶液制备完毕; 7. 从 hESC 10mm Petri 培养皿中移去原有培养基; 8. 加入5ml预热的 DMEM; 9. 加入制备好的鱼精蛋白/ICG 溶液, 37 °C下孵育1h; 10. 孵育完全后移去染色液; 11. 用5 ml PBS漂洗培养皿以清除染色液; 12. 移去 PBS 再加入 5ml 0.25 % 胰蛋白酶液,37 °C下孵育5分钟使之酶解,适当震摇培养皿效果会更好; 13. 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散; 14. 加入等量含 10% KSR的培养基中和胰蛋白酶; 15. 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中,400 RCF离心5 分钟; 16. 在全培养基中悬浮细胞; 17. 如果还有细胞团块,可以移去原有培养基用10ml预热的全ESC培养基重新悬浮细胞,重复酶解再离心; 18. 在这一点上,鼠源饲喂细胞需从hESCs中分离; 19. 然后将细胞悬浮液移至涂布琼脂的10 cm 培养皿中; 20. 37 °C 孵育 45 分钟,注意不要晃动培养皿,如此鼠源饲喂细胞会贴壁而干细胞保持悬浮; 21. 从Petri 培养皿中移出已标记的单细胞人胚胎干细胞悬浮液; 22. 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性; 23. 可进行活细胞成像了!
  • 临床介导的 CD8+ T 细胞和 NK 细胞焦亡的发现揭示了黑色素瘤异质性
    黑色素瘤组织中,与细胞焦亡相关的基因(PRGs)GZMA、GSDMB、NLRP1、IL18和CHMP4A的阳性细胞比例低于正常皮肤。细胞焦亡是一种影响肿瘤微环境和肿瘤免疫治疗的新领域。然而,细胞焦亡的作用仍有争议,部分原因是由于黑色素瘤的细胞组成异质性。2023年8月,上海中医药研究院皮肤病研究所李斌教授团队在Cell Death& Disease杂志上发表题为 Clinical-mediated discovery of pyroptosis in CD8+ T cell and NK cell reveals melanoma heterogeneity by single-cell and bulk sequence 的研究论文。本文对黑色素瘤标本的单细胞转录组进行了全面分析。我们发现PRGs的表达在免疫细胞中,如CD8+细胞(代表CD8+ T细胞)和CD57+细胞(代表NK细胞)中失调。此外,免疫组化和多重免疫荧光染色实验结果进一步证实了GZMA+细胞和GSDMB+细胞主要在免疫细胞中表达,特别是在CD8+ T细胞和NK细胞中。黑色素瘤标本中,GZMA+合并CD8+ T细胞(0.11%)和GSDMB+合并CD57+细胞(0.08%)的存在量很少,而对照组分别为4.02%和0.62%。这些发现表明,肿瘤中免疫细胞的减少可能降低了细胞焦亡的能力,从而对抗黑色素瘤的特性构成了潜在的风险。我们根据单细胞和整体RNA-seq分析,构建了一个预后风险模型和个体化的预测模型(C指数=0.58,P = 0.002),提示PRGs在恶性黑色素瘤的预防中可能发挥作用。总之,通过实验验证鉴定了免疫细胞群和免疫基因模块,有助于我们更好地理解黑色素瘤中的细胞焦亡。实验部分本文中,研究者使用TissueGnostics公司TissueFAXS Spectra全景多光谱组织扫描定量分析系统获取图像。获取到图像利用StrataQuest软件进行定量分析。Panel 1 :DAPI,CD8,GZMA,GSDMBPanel 2:DAPI,CD57,GZMA,GSDMB虽然细胞焦亡对癌症的影响尚为有定论,但是也正因为如此,针对细胞焦亡的研究仍然有广泛的未知等待探索。考虑到细胞焦亡的研究和炎症反应过程密切相关,借助于TissueFAXS Cytometry技术,结合多色免疫荧光染色,不但可以精准识别焦亡相关特异性蛋白表达的细胞,还可以实现对细胞焦亡水平在组织中的空间分布、形态特征、与其他细胞类型的相互作用等方面的高通量、高精度、高信息量的定量分析。在单细胞定量水平上,先通过识别细胞核标记对细胞进行计数,继而借助于Tissue Cytometry的核扩张算法精准对细胞质/膜染色的形态进行识别。在获得单细胞真实染色的轮廓区域后,对每个细胞蛋白标记的所有像素强度进行统计分析,最终获得单个细胞蛋白表达的真实强度水平。这种方法用于阳性阈值的精准筛选划分,甚至更进一步鉴定了阳性细胞与相邻的阴性细胞的作用关系。在本文中作者还利用了多组学研究的思路,对黑色素瘤发病机制有关的细胞 - 细胞相互作用网络提出了新的见解思路,以CD8阳性T细胞作为研究线索观察到CD8细胞边缘浸润的失调,进一步为肿瘤免疫的相关机制研究拓展了研究领域的广度。除此之外,针对NK细胞、GZMA 细胞和 GSDMB 细胞也均进行了原位精准空间定量分析,为后续的深入研究奠定了扎实的基础。在这些研究中,在切片原位的多重免疫组化标记,针对不同表型细胞的蛋白表达及细胞分布分析,也都是利用TissueFAXS Cytometry技术来进行的个体化精准定量分析。Figure 1 GZMA+细胞和GSDMB+细胞由CD8+T细胞分泌。A:对照组和黑色素瘤组织的多色免疫荧光染色图像。DAPI(蓝色)、CD8(粉色)、GZMA(绿色)和GSDMB(红色)。B:CD8+GZMA+共定位和CD8+GSDMB+共定位散点图。Figure 2 NK T细胞分泌GZMA+细胞和GSDMB+细胞A:对照组和黑色素瘤组织的多色免疫荧光染色图像。DAPI(蓝色)、CD57(粉色)、GZMA(绿色)和GSDMB(红色)。B:CD8+GZMA+共定位,CD8+GSDMB+共定位,CD57+GZMA+和CD57+GSDMB+散点图。
  • 第二个冷冻电镜导电毛结构,居然还是细胞色素?
    撰文丨王冯斌博士"Truth never triumphs - its opponents just die out." - Max Planck.普朗克大佬的意思大概是 "Old theories never die only their proponents do"。某些科研领域确实存在一些很尴尬的现象,一个方向停滞不前,是因为多年前领域里的大佬一把油门把别人带到坑里去了,然后大佬又因为不为人知的原因,死活不承认。今天要讲的,就是一个这样的故事(编者注:2022年7月7日,弗吉尼亚大学王冯斌博士以第一作者身份在Nature Microbiology上发表了文章Cryo-EM structure of an extracellular Geobacter OmcE cytochrome filament reveals tetrahaem packing)。德里克老铁是一个有名的微生物学家。35年前在华盛顿DC的河流沉积物里发现了一种厌氧菌,这个菌就厉害了,能产生一种好几微米长的“导电毛”,在很长的距离传导电子,进行能量代谢。德里克研究这种导电毛一搞就是30来年。后来他们发现,一但敲掉一个叫pilA-N的“第四型菌毛”的基因,导电毛就没了。pilA-N呢,结构上只是一个很疏水的长helix,是第四型菌毛中间的疏水核心。尽管pilA-N在很多结构生物学家眼中可不可溶都是个问题,德里克老铁却认定了导电毛一定是pilA-N,坚信自己可以守得云开见月明。随着冷冻电镜技术革命,现在大家也不用天天只靠遗传实验做这些判断了。想知道导电毛是啥?放在冷冻电镜下看看喽。2019年,我们直接用冷冻电镜观察了导电毛,至于它的组成与第四型菌毛蛋白之间的关系,只能说是毫不相关。导电毛其实是multi-heme cytochrome形成了一种之前从没被发现过的菌毛,而multi-heme的细胞色素,大家早就知道它们可以传导电子了(详见BioArt报道:Cell | 王冯斌博士等解析地细菌导电纳米线的冷冻电镜结构)。德里克老铁没有欣然接受这一现实,而是继续选择逐梦第四型菌毛。他声嘶力竭的质问,为啥突变了pilA-N,导电毛就没了?啊?尼秋老铁是德里克之前的博士后,现在已经是名校教授,非常的“父慈子孝”。在2021年发表了一个相对令人信服的模型,说第四型菌毛在该菌里包括两个蛋白pilA-N和pilA-C,第四型菌毛平常是不分泌到细胞外的,基本上相当于一个泵,有事没事动一动,把细胞色素形成的导电毛给怼出去。(ref: https://doi.org/10.1038/s41586-021-03857-w)德里克老铁彻底的愤怒了,说“冷冻电镜看不到我说的3nm的pilA-N“导电毛”不代表它就不存在!我用AFM就能看见!你们冷冻电镜都是artifact!”你看,这不是巧了嘛。我们最近又做了一些别的冷冻电镜的观察。我们把初代“导电毛”的关键氨基酸给突变了,本来想研究研究突变的初代导电毛。您猜怎么着,如果用一个一般的promoter表达突变,我们压根看不到突变的初代导电毛,反而看到了一种新的导电毛,OmcE。猜猜他是啥,还是细胞色素。谁能想到细胞这么“聪明”,连初代导电毛的替代品都悄默默的存好了。如果用一个过表达的promoter,不仅可以看到OmcE,还能看到初代菌毛的一些bundles,还有少量把他们泵出来的第四型菌毛(pilA-N和pilA-C,他们分开的话pilA-N很可能不可溶)。可能是表达的太猛烈了,泵工作的太猛,把自己都怼出来了。图 OmcS导电毛的替代品, OmcE那么,就真的没有3nm的毛了嘛?德里克老铁眼神儿就那么不好吗?其实还真有一个2.5nm左右的毛,偶尔会出现。加了Dnase I就会消失,是的,它就是——B-form DNA。图:所有毛的画像别着急,还会有新的细胞色素导电毛被发现的。我期待德里克老铁改变自己看法的那一天。

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  • timsTOF SCP—— 拓展单细胞研究视野timsTOF SCP 专为无偏深度 4D-定量单细胞蛋白组学、免疫肽组学、表观蛋白质组学和翻译后修饰组学( PTM )设计,和 scRNA-seq 技术形成补充,从而拓展单细胞研究的视野。重新定义单细胞蛋白质组学 —— 发现真正的蛋白质组异质性拓展单细胞研究视野超高灵敏度:开创性的新的离子源几何设计,让离子传输效率提高 5 倍,并带来更高的稳定性。数据更完整:数据非依赖性采集 —— 平行累积连续碎列( dia-PASEF )超越定量重复性的极限,为大规模研究细胞异质性铺平道路。超快采集速度:高采集速度与 dia-PASEF 灵敏度相结合,可采用短色谱梯度进行样本分析,从而减少极低的样本量分析时的色谱稀释效应。更稳定:经过双正交反射后,离子再进入捕集离子淌度谱( TIMS )中,连续分析数千个样本也无需仪器的清洗。重新定义单细胞蛋白质组学先进的离子透镜和 PASEF 技术,可从单个细胞中发现细胞异质性和生物学特性基于质谱的蛋白质组学已成为现代研究理解生物功能和疾病机制的主要工具。健康或疾病组织看起来是同质的,但其蛋白质组是非常不同的。破解每个细胞中的蛋白组的差异( 细胞异质性 )是充分理解其功能的关键。timsTOF SCP 采用了一个全新改进的离子源概念,结合平行积累连续碎裂( PASEF )采集方法的优势,提供了极高的速度和灵敏度,以应对单细胞的蛋白组或后几个细胞的翻译后修饰的分析挑战。开创性的离子传输技术发现真正的蛋白质组异质性timsTOF SCP 采用经过改进的离子源几何设计,包括 1 毫米离子传输毛细管可将离子传输提升五倍,更高压力级的离子漏斗和八级真空系统。更大的离子传输毛细管带来超高灵敏度,额外的正交离子反射和高压离子漏斗,提供独立的、差分真空系统,依然维持了 timsTOF 仪器系列所固有的系统稳定性。蛋白质组学性能的显著提升timsTOF SCP 全新的设计提高了离子在离子源里的传输,更高的真空度维持了仪器的稳定性,这些改进让离子传输提升近 5 倍。当与以 100 nL/min 流速运行的 Evosep One Whisper 方法和 dia-PASEF 方法相结合时,Evosep One 的灵敏度比以前的高流速方法提高了约 100 倍,这使得单细胞水平的无偏蛋白质组学具有非常好的重现性和稳定性,并首次实现每个细胞覆盖约 1,500 种蛋白质。双 TIMS,CCS 支持的分析捕集离子淌度谱( TIMS )首先是前级的气相分离技术,在高性能液相色谱(HPLC)和质谱分离的基础上,离子淌度带来的额外的一个维度分离,降低了样品的复杂离,提高了峰容量和分析的可靠性。同样重要的是,TIMS 还对特定质量和淌度值的离子进行累积和聚焦,从而实现灵敏度和速度的独特提升。通过双 TIMS 技术,前部 TIMS 进行离子累积的同时,后部 TIMS 跟据离子淌度对离子进行释放,这样的设计可以实现近 100% 的离子利用率。这个过程也即为碰撞横截面( CCS )辅助的平行累积连续碎裂( PASEF )分析。支持 CCS 的分析为数据进一步的分析提供了很多的可能性,从更可靠的化合物鉴定到更可靠的数据库比对,以及的更大确定性到自信的库匹配,以及降低大型数据集中的误发现率( false discovery rates,FDRs )。免疫肽组学和其它富集工作流程的理想检测工具除了无偏真单细胞蛋白质组学应用外,timsTOF SCP 还提供了出色的灵敏度,可用于一些需要进行肽段富集的工作流程,比如免疫肽组学研究就需求从血浆或组织中纯化免疫肽开始。由于免疫多肽在这些样本中以相对较低的丰度存在,timsTOF SCP 是理想的免疫肽组学分析,在可用材料有限的情况下进行新生抗原发现,比如生物活检的样本。timsTOF SCP 突破性的灵敏度还可用于在癌症信号通路的研究中的磷酸化蛋白质组学研究。PASEF肽段离子通过捕集离子淌度谱( TIMS ) 分离,洗脱( ~ 100 ms ),并在四极杆飞行时间质谱( QTOF )上进行检测,生成 TIMS MS 热图。在 PASEF 方法中,相同的 TIMS 分离后的离子又通过四极杆对特定离子进行逐一隔离。母离子和碎片离子谱图按离子淌度值进行对齐。平行积累序列碎片( PASEF )技术实现了 120 Hz 的扫描速度, 使用 PASEF 通过多次选择低丰度肽来提高低丰度肽的 MS/MS 谱图质量。PASEF :鸟枪法蛋白质组学的完美选择由 PASEF 驱动的 timsTOF SCP 提供 120 Hz 的扫描速度,而不会牺牲灵敏度或分辨率,这是通过四极杆筛选离子和碰撞池中的离子碎裂与 TIMS 中肽段离子包释放保持同步而实现的。PaSER Run & Done —— 无偏单细胞分析数据的实时质量控制imsTOF SCP 可以以超过 120 Hz 的扫描速度,对数百个微量样本( 200 ng )进行分析。这改变了蛋白质组学的研究方式,但增加的数据量对数据分析提出了新的要求。数据分析已经成为许多工作流程中常见的瓶颈。现代分析方法经常需要在 timsTOF SCP上生成数百个数据,布鲁克已经推出的实时数据库搜索功能 —— 实时并行数据库搜索引擎( PaSER ),从而消除了这一障碍,使用 PaSER, LC-MS 运行一旦完成,结果就即使呈现 —— 也就是 “ Run & Done ”。MaxQuant/Perseus 和 PEAKS Studio 数据处理开放式数据格式允许研究人员直接使用原始数据,并使用自己选择的先进软件。MaxQuant 软件通过保留时间、离子淌度、质量和信号强度来提取 4 维( 4D )特征。这有利于肽、蛋白质和翻译后修饰的鉴定和定量。PEAKS Studio 将 de novo 测序与传统数据库搜索相结合,并对 timsTOF 原始数据的处理进行了优化。超高灵敏度的 dia-PASEF 加持的 4D-蛋白质组学CCS 支持的分析使鉴定更可靠timsControl 允许针对感兴趣的离子进行 dia-PASEF 窗口的自定义,并能调整质量隔离窗口,TIMS 的扫描范围,和循环时间,以使 dia-PASEF 方法适应不同的色谱方法有趣的离子。结合 Evosep One 系统的低流速方法与 timsTOF SCP 高灵敏度的 dia-PASEF 方法,可从 500pg 细胞消化液内鉴定出超过 2,000 个蛋白质,从 250pg 的细胞被鉴定出超过 1,500 个蛋白质。这展示了真正的单细胞蛋白质组学所需的灵敏度。从 250pg 中鉴定出的蛋白质的丰度范围约为 4 个数量级,可以在单细胞水平上进行蛋白质组定量分析。探索肿瘤微环境理解 TME 及其浸润性免疫细胞可被认为是影响疾病进展、治疗反应和患者生存的关键步骤。凭借其高灵敏度,timsTOF SCP 能够在 FFPE 组织样本的激光捕获显微切割( LMD )获得的细胞上获得足够的蛋白质组深度。典型的工作流如图所示。在 timsTOF SCP 仪器上,细胞标记物用于识别肿块中的黑色素瘤癌细胞和那些与基质密切相关的细胞,随后通过 LMD 对这两个群体分割,然后进行无偏 4D-蛋白质组学分析。关键发现:富集分析揭示了中枢和外周黑色素瘤细胞之间的差异调控蛋白,有可能进行疾病分型以指导临床决策。结果由 Matthias Mann 教授提供。
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  • 历经多年的发展,流式细胞技术被广泛用于免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、细胞生物学及医学检验等诸多领域,扮演着愈加重要的角色,极大的推动了基础研究与临床实践的发展。默克顺势而为,近期推出了新的CellStream流式细胞仪系统,那么新在哪里呢? 一、特点优势 极高的荧光灵敏度检测和区分细胞亚群 精确绝对计数,兼具单管和高通量上样系统 升级灵活,适应当前和未来的需要 直观易操作的软件,加快数据的发现 二、技术革新 该流式细胞仪最高可配置高达7根激光,22个检测通道以满足科研人员深入研究的需要,它使用基于时间延迟积分CCD(TDI-CCD)的检测器进行检测,快速捕获细胞图像并将其转换为高灵敏度的荧光数据进行数据发现,其独特的光学系统和设计为研究人员在分析细胞和亚微米粒子时提供了无与伦比的灵敏度和灵活性。 三、应用创新 这个新系统可以用于广泛的研究领域,包括细胞外囊泡研究和外泌体,它可以识别其他细胞仪上看不到的小群体。同时,该系统独特的液流技术使其具备精确细胞计数功能,易于在实验室中直接升级。 默克生命科学应用解决方案业务部门负责人Jean-Charles Wirth提到:“研究人员在实验室和研究能力方面越来越需要更强大的能力和灵活性。”我们的新型流式细胞仪系统提高了检测灵敏度,允许科学家根据他们在免疫学、癌症研究和许多其他领域的需要来定制仪器。 四、应用举例 CellStream在细胞外囊泡(EV)检测中的应用 细胞外囊泡(EV)作为细胞间通讯关键介质的重要性近年来引发热烈关注。EV是膜衍生结构,包括外泌小体、微囊泡和凋亡小体。 在以下研究中,分别在三台CellStream仪器上检测使用CD235ab-PE和CD41-APC荧光抗体标记的红细胞和血小板来源的EV。图(A)显示EV的圈门策略,利用该门识别 PE+和 APC+群体。(B)显示浓度梯度稀释下EV荧光散点分布。(C)显示浓度梯度稀释下EV平均荧光强度。(D)显示浓度梯度稀释下EV样品组、抗体对照组、Triton-X 100(TX)+ 抗体对照组、TX +EV对照组以及PBS对照组的颗粒浓度对比。(E)显示数据统计结果。 A: B:C: C: D: E: PE+ Objects/μL Dilution EVs Ave EVs SD Antibody Ave Antibody SD TX+Antibody Ave TX+Antibody SD TX+EVs Ave TX+EVs SD Buffer Ave Buffer SD 1:60 2442 546 160 54 55 28 30 8 5 4 1:120 1199 89 99 49 17 7 13 5 19 1 1:240 566 39 44 22 15 9 9 3 17 1 1:480 235 43 64 108 18 14 13 9 9 1 1:960 154 21 32 37 10 5 10 5 15 2 APC+ Objects/μL Dilution EVs Ave EVs SD Antibody Ave Antibody SD TX+Antibody Ave TX+Antibody SD TX+EVs Ave TX+EVs SD Buffer Ave Buffer SD 1:60 1629 316 9 2 9 9 3 0 1 1 1:120 798 187 4 1 2 1 1 1 0 0 1:240 386 56 2 1 2 1 1 0 0 0 1:480 172 50 2 3 1 1 1 1 0 0 1:960 109 33 1 1 0 0 1 0 0 0 点击这里查看更多详情
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  • 应用范围广泛应用于果味水、汽水、配制酒、软糖、硬糖、蜜饯、奶糖、蛋糕、冰淇淋、果冻等食品中添加的添加非食用色素,如柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、亮蓝、靛蓝等人工合成色素指标进行快速定量测定性能特点标准96孔,微孔板;可进行横向或纵向96孔可视化布板,自由编排对照、样本位,直观可靠光路系统:9通道光纤测量系统,其中8路光源用于96孔板的同步测量,另外一道光路用于校准光源,作光源系统的补偿及光源工作情况的监测光源:卤素灯;采用光源自动开关节能设计,最大限度延长光源寿命滤光片标准配置:410nm、450nm、492nm、630nm报告打印:内置热敏打印机,并可外接打印机处理器:嵌入式高速处理器存储:超大硬盘存储,可存储上亿组以上测试结果接口: USB接口振板功能:快速混匀孔内液体,便于准确测量windows图形化界面,十寸彩色液晶触摸屏操作,操作简捷方便固化常见检测项目,可自动计算浓度值,无需二次换算数据处理操作流程简洁:无需外接电脑,仪器本身可实现仅需点击检测项目,无须编程直接进入测试状态,并能直接自动计算浓度具有查询、打印、汇总等功能,可直接输出检测结果,软件终身免费升级技术参数 ※ 测定下限1.0mg/kg(柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红)0.2 mg/kg(亮蓝) ※ 测定范围1.0~80.0mg/kg(柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红)0.20~20.0 mg/kg(亮蓝) ※ 波长范围:300nm - 1000nm※ 波长准确度:±2 nm※ 精确度:±0.5%或0.005A※ 测量范围:0-4.000 A※ 重复性:≤±0.5%※ 分辨率:0.001A(显示),0.0001A(计算)※ 稳定性:≤±0.005A/10 min
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