菜油甾醇标准品

手工制作的小磨油脂一度在国内消费者中颇受推崇，而且被冠以“小磨香油”、“小磨菜油”等。但现实中，由于大量进口转基因油脂的涌入，这些非转基因菜油要保持纯净已经不易。 　　因目前进口转基因菜籽油价格与国产托市菜油存在每吨1000元左右的差价，大量进口转基因菜籽油涌入国内，企业蜂拥采购，包括众多油菜籽托市收购委托企业。 　　本报记者在四川、湖南调查发现，不少菜籽托市收购企业行走在法律法规的边缘地带，大量使用进口菜油冒充国产菜油流入国储库。而转基因菜籽油大量流入国储，会造成出库的国储菜籽油被转基因菜油“污染”，企业从国储库购买菜油而生产出的小包装菜籽油就难以再标称非转基因菜油。 　　另一方面，部分企业既代储国储油脂，自身也加工食用油。进口转基因菜油所带来的巨大利润回报，必然让一些企业铤而走险，用混入转基因菜油的国产菜油生产所谓的“非转基因”小包装菜籽油牟利。 　　而众多消费者并不具备辨别和检测的条件，无法确定所购买的、标称非转基因小包装菜油的真伪。 　　价差诱惑 　　本报曾报道，四川、湖南、湖北等地部分油菜籽油托市收购委托企业，利用进口的低价菜油冒充国产菜油，抵充托市收购任务后，中储粮派出3个调查组到上述三地调查。至今已有2个多月，却仍无任何消息。 　　2013年，国家启动油菜籽托市收购政策，油菜籽收购量为500万吨，折合菜籽油166.7万吨左右。但湖北、湖南、四川等地的企业向本报反映，由于每吨进口转基因菜籽和菜油要比国产非转基因菜籽、菜油分别便宜500元和1000元以上，不少被赋予托市收购资格的委托企业，利用进口的便宜菜油冒充国产菜油上交国储库，从中赚取差价。 　　东方艾格油脂行业分析师常桂先告诉记者，目前，国产大宗菜籽油市场价约为8820元/吨，进口转基因菜籽油到岸后的成本价在7928元/吨，二者市场价差在900元左右。而今年国家托市收购的菜籽折油价格在10400元/吨，与进口菜油价差2400多元，这对企业来说诱惑实在很大。 　　据相关部门调查，委托加工企业拿到托市指标后，直接进口菜籽和菜油，或者到市场上购买进口菜油来顶替托市收购菜籽折油量，数量大体占到托市菜籽量的一半以上。 　　本报记者调查了解，在湖南、四川、湖北等地，这样的作假已经成为油菜籽行业的“公开秘密”。曾有未获委托托市收购资格的企业放出风来，要举报这类作假。 　　大量进口的转基因菜油，一部分流入正规企业用来生产小包装食用油或者其他油脂，另一部分流入国储库，混入国产非转基因菜籽油中形成“污染”。 　　事实上，本报调查时发现，获得委托托市收购资格的企业，大部分也获得国家临时储备菜油的资格，一般都会有3-4个大型油脂存储罐。大企业的存储量有3万-4万吨，小一点也有2万吨规模。在代储国家临储菜籽油的同时，这些企业也在商业化经营菜籽油，并加工小包装食用油。如何加强监督、确保代储国储油脂没有被非法掺杂，是一个难题。 　　相关监管部门告诉本报记者，即使明知道企业作假、前往调查，但企业可能手续完备 除非对菜籽油进行转基因检测，否则往往查不出漏洞和破绽。 　　转基因菜油如何流入餐桌? 　　2002年以前，菜籽油在我国植物油消费总量中曾位居第一，后随着大豆、豆油进口量的增加，菜籽油消费退居次席 自2006年起，由于我国进口棕榈油数量的增加，菜籽油成为国内消费的第三大油种。 　　尤其长江流域省份，包括云南、贵州等地的消费者比较喜欢菜籽油，不仅味道香浓，从健康角度而言还比大豆油富含不饱和脂肪酸。 　　东方艾格油脂行业分析师常桂先告诉记者，2012年国内消费菜籽油有500万吨，其中进口转基因菜籽油有150万吨，今年进口量还会有增加。 　　菜籽油的用途与进口大豆油一样，一是作为小包装食用调和油的基质油种，其在小包装调和油中的占比仅次于进口大豆油 二是经过精炼作为单一油种单独出售。 　　目前国内食用调和油所使用的菜籽油大部分是进口菜籽油，价格便宜是主要的原因。上小包装菜籽油则多以国产菜油为主，主打“非转基因”概念，以示与转基因菜油的区别。另外，长江领域也有不少企业生产小包装转基因菜籽油，价格要比非转基因菜籽油便宜很多。 　　中储粮生产的一款金鼎小包装食用调和油率先公布配料比例，其中进口菜籽油占41.40%，即一桶5升的调和油中，进口菜籽油的含量为2.07升。事实上，在大多数品牌调和油中，作为基质油种的菜籽油的含量都超过40%，这是转基因菜油进入餐桌的一个重要途径。　　另一个途径就是掺杂进国产菜油中，冒充100%非转基因菜籽油出售。 　　不过，有业内人士表示，由于国家强制要求企业生产转基因食用油标示油脂成分，食用油企业一般不可能冒险加入转基因菜油。但是，部分上游托市收购企业，则有可能将进口菜油混入国产菜油，消费者食用了这种“不纯粹”的非转基因菜油，这就涉及商业欺诈。 　　记者发现，目前北京市场上，川、湘等地企业生产的小包装非转基因菜籽油售价在75元/5L，要比大部分食用调和油一级大豆油贵10元左右。如何让真正的国产菜籽油赢得消费者信赖，需要相关部门从上游源头监控。 　　行业人士告诉记者，无论是国储入库，还是企业生产的菜籽油质量把控，最可行的是检测菜油的芥酸水平。进口菜油的芥酸水平很低，大概只有1~2ppm，而国产菜油的芥酸含量大概为4个ppm。如果芥酸水平太低，油的来源就值得怀疑。

植物甾醇是常见的植物活性成分，同时也是人类饮食中的主要脂类成分组成部分。其结构与胆固醇类似，均具有环戊烷多氢菲母核，图1中的β-谷甾醇、菜油甾醇、和豆甾醇为较为常见的植物甾醇。由于植物甾醇与胆固醇具有相似的结构，二者均需溶于胶束后才能被人体吸收，植物甾醇能与膳食来源的胆固醇竞争进入混合胶束从而减少肠道对于胆固醇的吸收，因此有助于控制血液中的总胆固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯水平，从而减少心血管疾病的风险（图2）[1]。近年来，随着人们对健康饮食的日益重视，越来越多的科研人员开始关注到含植物甾醇的食品及植物的分析技术的开发与运用，本文将重点介绍基于气相色谱-氢火焰离子化检测器联用技术及液相色谱-大气压化学电离质谱联用技术的植物甾醇分析方法。图1. 常见的三种植物甾醇结构图2. 植物甾醇降低血清胆固醇的示意图[1]1. 植物甾醇的分析技术食物与植物中的甾醇类成分经过前处理并富集后，可采用不同的分析技术与手段开展分析与鉴定。目前最常用于植物甾醇定量分析的技术为气相色谱法（Gas Chromatography，GC）。液相色谱法（Liquid chromatography，LC）、薄层扫描法（Thin Layer Chromatography Scanning，TLCS）等也可以进行植物甾醇组分的分离与定量分析。1.1 气相色谱-氢火焰离子化检测器联用技术（GC-FID）技术原理：氢火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector，FID）的工作原理是基于有机化合物能够在火焰中发生自由基反应而被电离从而对待测物进行分析[2]。如图3所示，FID离子室中火焰分为A层预热层；B层点燃火焰；C层温度最高，为热裂解区，有机化合物CnHm在此发生裂解而产生含碳自由基CH：CnHm→CH含碳自由基进入反应层D层，与外面扩散进来的激发态原子或分子氧发生反应，生成CHO+及e-：CH+O→CHO++e-形成的CHO+与火焰中大量水蒸气碰撞发生分子-离子反应，产生H3O+离子：CHO++H2O→H3O++CO化学电离产生的正离子（CHO+，H3O+）和电子（e-）在外加直流电场作用下向两极移动而产生微电流，收集极与基流补偿电路间的电流作为微电流放大器的输入，微电流放大器输出的电流信号（或电压信号）经A/D转换器，将模拟信号转换成数字信号，由计算机记录下来并进行数据处理从而获得色谱峰。图3. 氢火焰离子化检测器（FID）的示意图技术特点：火焰离子化检测器（FID）是气相色谱常用的检测器，它对几乎所有有机物均有响应，特别是对于烃类化合物灵敏度高且其响应与碳原子数成正比。与此同时，它对于气体流速、压力、温度变化的细微差异相对不敏感，不易受到外界环境改变影响。通过该法对植物甾醇进行分析时，需要对样品进行衍生化处理，将游离的植物甾醇转化为适合GC分析的疏水性衍生物，如生成三甲基硅醚（TMS）衍生物。目前广泛使用于植物甾醇分析的衍生化试剂包括有：含N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺（N-methyl-N-trimethylsilylfluoroacetamide，MSTFA）无水吡啶溶液、含1%的三甲基氯硅烷（Trimethylchlorosilane，TMCS）的双三甲基硅基三氟乙酰胺（Bis-trimethylsilyltrifluoroacetamide，BSTFA）等。通过GC-FID对植物甾醇进行定量时，常使用的内标包括有白桦脂醇（Betuline）、5α-胆甾烷醇和5α-胆甾烷-3β-醇等。分析仪器：1957年，澳(大利亚)新(西兰)帝国化学工业公司（Imperial Chemical Industries of Australia and New Zealand，ICIANZ）中央研究实验室的McWilliam和Dewar开发了第一台FID。目前FID检测器已经成为应用最广泛的气相色谱检测器之一，其获取、操作成本、维护要求均相对较低。市面上的气相色谱仪基本上均可配置FID检测器，包括安捷伦9000、8890、8860和7890气相色谱系列，赛默飞 TRACE 1300、1100系列，岛津Nexis GC-2030，珀金埃尔默 2400等进口气相色谱系统以及福立 GC9790、GC 9720，常州磐诺GC1949，上海仪电分析GC 128、北分瑞利 GC3500系列等国产气相色谱仪。1.2 液相色谱-大气压化学电离质谱联用技术（LC-APCI-MS）技术原理：大气压化学电离化（Atmospheric Pressure Chemical Ionization，APCI）原理与化学离子化相同，但离子化在大气压下进行。流动相在热及氮气流的作用下雾化成气态，经由带有几千伏高压的放电电极时离子化，产生的试剂气离子与待测化合物分子发生离子-分子反应，形成单电荷离子，正离子通常是(M+H)+，负离子则是(M-H)-。大气压化学离子化能在流速高达2 ml/min下进行，常用于分析分子质量小于1500道尔顿的小分子或弱极性化合物，主要产生的是(M+H)+或(M-H)-离子，很少有碎片离子，是液相色谱-质谱联用的重要接口之一。图4. 大气压化学电离源（APCI）的示意图技术特点：植物甾醇的发色团数量少，因此不适合通过紫外检测器检测；同时植物甾醇质子亲和力较小、酸性较弱、不宜在溶液中形成质子化的离子或去质子化生成阴离子，因此通过电喷雾电离（Electron Spray Ionization，ESI）的电离效率相对较差。由于植物甾醇亲脂性较强，分子量一般小于1000 Da，采用APCI离子源可以提供更高的植物甾醇检测灵敏度，且无需对样品进行衍生化，极大地缩短了分析所需的时间。研究人员还发现植物甾醇分析过程中，采用正离子模式能够提供了比负离子模式更高的灵敏度，且易于生成准分子离子峰[M+H]+、[M+H-H2O]+ [4]。分析仪器：目前国内外均有大量厂商生产搭配有APCI离子源的液相色谱质谱联用系统，已运用于药物研究、食品安全检测、生命科学和分子生物学等多个领域。Agilent 6470、6490系列三重四极杆液质联用系统，Bruker EVOQ LC-TQ液相色谱质谱联用系统，PerkinElmer QSight 400系列三重四极杆质谱仪，SHIMADZU LCMS-2020、LCMS-2050液相色谱质谱联用系统以及国产的江苏天瑞LC-MS 2000液质联用系统，杭州谱育科技EXPEC 5310LC-MS/MS、EXPEC 5250 气相/液相色谱-三重四极杆质谱联用仪、EXPEC5510LC-MS/MS、禾信仪器LC-TQ5100等均配置有APCI离子源。国产的江苏天瑞LC-MS 2000液质联用系统，杭州谱育科技EXPEC 5310系列质谱仪等均配置有APCI离子源。2. 应用实例2.1 基于GC-FID快速分析橄榄油中的植物甾醇在对特级初榨橄榄油样本进行皂化处理后，国际橄榄理事会（International Olive Council，IOC）方法采用乙醚对皂化样本多次液液萃取以提取植物甾醇；研究人员优化后前处理方法采用反相聚合物基质固相萃取柱对皂化样品中的植物甾醇进行提取。同时研究人员基于GC-FID建立了同时快速定量17种脂质（含内标胆甾烷醇）的分析方法，其中包括16种植物甾醇，这17种脂质的GC-FID色谱图如图4所示[5]。通过分析比对不同前处理方法结果，研究人员发现优化后前处理方法简单、省时，并减少了溶剂的使用量，但是与IOC官方方法获得的结果较为一致。通过GC-FID快速定量17种脂质的分析方法也有助于评估高价值且容易掺假的特级初榨橄榄油的真实性。图5. 特级初榨橄榄油样品采用IOC方法（A）及优化前处理方法（B）处理后，分别经由GC-FID分析得到色谱图。（1）胆固醇；（2）菜籽甾醇；（3）24-亚甲基胆固醇；（4）菜油甾醇；（5）菜油烷甾醇；（6）豆甾醇；（7）Δ7-菜油甾醇；（8）赪桐甾醇； (9）β-谷甾醇；（10）谷甾烷醇；（11）Δ5-燕麦甾醇；（12）Δ5,24-豆甾二烯醇；（13）Δ7-豆甾醇；（14）Δ7-燕麦甾醇；（15）高根二醇；（16）熊果醇；（IS）胆甾烷醇。2.2 基于LC-APCI-MS/MS快速分析饲料中的植物甾醇相较于GC-FID或GC-MS，LC-APCI-MS/MS无需进行样品衍生化即可完成植物甾醇的定量分析，极大地缩短了样品前处理时间。研究人员建立了基于LC-APCI-MS/MS的植物甾醇分析方法，并可在8分钟内快速定量6种目标植物甾醇[6]，图6为胆固醇与6种植物甾醇混合标准溶液（500 ng/mL）的MRM提取离子流色谱图。该方法提供了一种适用于大豆、向日葵、草料、犊牛成品饲料和上述饲料混合物在内的不同类型饲料中的植物甾醇定量的方法。同时将实验结果与其他相关研究结果进行比较，显示出良好的一致性。该方法简单、快速，可以将其应用于其他饲料和食品中的植物甾醇分析。图6. 不同研究化合物混合标准溶液的MRM提取离子流色谱图。①麦角甾醇；②胆固醇；③岩藻甾醇；④Δ5-燕麦甾醇；⑤菜油甾醇；⑥豆甾醇；⑦β-谷甾醇3.小结与展望植物甾醇是植物中的生物活性化合物，同时因其在降低血液胆固醇水平方面有着重要意义，植物甾醇可作为保健食品中的功效成分用于调节人体机能。在这种情况下，有必要建立适合于保健食品中植物甾醇类化合物的分析方法，以评估保健食品质量。同时随着分析技术的发展和相关研究的不断深入，更多快捷、灵敏的分析技术也将成为植物甾醇分析的有力工具，并为更多不同的植物甾醇类化合物在降低血脂、预防心血管疾病等健康领域的运用提供支持与保障。参考文献：[1] Zhang R, Han Y, McClements D J, et al. Production, characterization, delivery, and cholesterol-lowering mechanism of phytosterols: A review[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2022, 70(8): 2483-2494.[2] 胡坪, 王氢. 仪器分析（第五版）[M]. 北京：高等教育出版社，2019.[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2020版）：四部[M]. 北京：中国医药科技出版社，2020.[4] Mo S, Dong L, Hurst W J, et al. Quantitative analysis of phytosterols in edible oils using APCI liquid chromatography–tandem mass spectrometry[J]. Lipids, 2013, 48: 949-956.[5] Gorassini A, Verardo G, Bortolomeazzi R. Polymeric reversed phase and small particle size silica gel solid phase extractions for rapid analysis of sterols and triterpene dialcohols in olive oils by GC-FID[J]. Food chemistry, 2019, 283: 177-182.[6] Simonetti G, Di Filippo P, Pomata D, et al. Characterization of seven sterols in five different types of cattle feedstuffs[J]. Food Chemistry, 2021, 340: 127926.

实施4年多的油菜籽托市收购政策走进了窄胡同。 　　10月28日，中储粮披露，2家委托收储企业利用进口转基因菜油冒充托市收购菜油，但是未公布企业具体名单。10月29日，本报从湖北省粮食局了解到，湖北被调查出违规的企业为中纺农业湖北有限公司，当地粮食局对中纺农业处罚15万元，取消2013年委托收储资格，并收回委托收购资金。 　　中储粮官方告诉本报记者：目前，国家粮食局、财政部驻各省专员办在牵头调查，中储粮在配合，现在还在核实企业的具体问题，相关企业名单需要由官方来公布，中储粮公布不合适。而对于如果出现直属企业人员与相关企业串通作假，中储粮会追究相关人员责任。 　　也有不少企业人士对调查结果不太满意，认为造假已经是普遍现象，此次调查仅查出2家企业造假，存在大事化小之嫌。 　　本报之前实地调查也了解，委托收储企业利用进口转基因菜油冲顶国产菜油赚取巨大差价并不是个案，各省委托企业几乎都存在，只不过未被揭露出来。此次检查暴露出冰山一角，也让实行了4年多的托市收购政策亟待调整。 　　东方艾格大宗农产品分析师马文峰表示，托市政策前两年还可以，国内油脂价格低于国外，现在国内价格远高于国外，托市结果补贴了国外油菜籽，应该将托市改为直接对农民补贴。 　　中纺农业被指造假 　　10月28日，中储粮称，通过调查，在湖北、湖南、四川三省共发现3个方面问题，涉及企业16家。其中，违反收购政策，将进口油菜籽掺入临储库存的企业2家，湖北一家企业掺入994吨进口菜籽油，湖南一家企业掺入483吨，两家企业均为委托收储企业。目前，上述两家企业涉及临储油菜籽已全部退出临储库存，地方粮食行政管理部门也对其进行了处罚。中储粮总公司也将严肃追究相关直属企业的监管责任。 　　10月29日，湖北省粮食局宣传部门告诉记者，湖北造假企业为中纺农业湖北有限公司。 　　中纺农业官网简介显示，中纺农业系国务院国资委直属企业中纺集团公司全资子公司，2009年5月在荆州注册成立，注册资本1亿元，是荆州市政府重点招商引资项目。主要从事油菜籽、棉籽、大豆收购加工、贸易等，拥有油罐容量达37500吨，原料库容4万吨。 　　目前进口转基因菜籽油到岸后的成本价在7928元/吨，今年国家托市收购的菜籽折油价格在10400元/吨以上，二者价差2400多元，该企业掺入994吨进口菜籽油，至少可赚238.56万元价差。 　　本报从湖北当地企业了解到，中纺农业2013年获得的委托收储菜籽量为1.8万吨，2012年的收储量在2万吨左右。 　　事实上，本报记者在湖南、四川等地调查时，当地一些企业就明确告诉记者，委托收储企业利用进口菜油冒充现象比较普遍。本报记者以合作的名义采访多家企业也都向记者毫不讳言自己到港口采购菜油或者到外地采购菜饼的行为。 　　事实上，不少油脂行业人士告诉记者，调查委托收储企业是否存在用转基因菜油顶包很简单：一是检查委托企业的收储手续，包括卖菜籽农民的身份证复印件、专用增值税发票等 二是调查受委托企业相应时间段内的菜油、菜粕进出情况，相应的财务账单和业务往来明细单 三是查验企业的加工开机情况。加工一吨油菜籽，需消耗大约0.6kg溶剂，42kg煤，0.1吨水，30度电 四是查验入库菜籽油的芥酸水平，进口菜油芥酸水平很低，大概只有1~2ppm，而国产菜油的芥酸大概为4个ppm。 　　托市收购待调整 　　粮油行业人士告诉记者，托市收购过程中出现种种作假问题，说明目前政策实施和执行上存在两个问题：一是政策执行企业道德操守存在问题，目前的法律对其威慑不大 二是收储体制存在漏洞，垄断，封闭，不公平，造成了极大的寻租空间。 　　现在已经到了亟待调整的重要关口，需要以市场为导向，重塑国内油脂行业保护机制。 　　事实上，油菜籽托市收购不仅没补贴国内农民，导致国内油菜籽产业下滑，反而补贴了国外的农场主。 　　国家粮油信息中心的数据显示，国内种植面积和产量逐年下降。2009年油菜籽产量1366万吨、2010年度产量1308万吨、2011年度产量1250万吨、2012-2013年度1250万吨。　　有企业给记者提供的数据为2012年1150万吨、2013年为900多万吨。 　　而同期，中国进口菜籽和菜油的主要地区加拿大的油菜种植面积和产量逐年攀升。近4年，加拿大菜籽种植面积分别为1500多万公顷、1600万公顷、1700多万公顷和近2000万公顷。近三年，加拿大菜籽价格上涨了40%，而国内只上涨不到20%。 　　本报拿到一份研究数据显示，2009~2012年间，因为托市收购，国外菜籽和菜油价格不断攀升，初步估算4年间国内额外支出了50亿元人民币。 　　马文峰建议，对包括油脂行业在内的粮油行业，用直补政策代替国家托市收购，对油脂行业直接补贴或者目标价格补贴，国家对农业实施直接补贴政策已经实施了较长时间，对于油脂行业是可以借鉴的。 　　中国粮油协会一负责人表示：目前多个部门都在讨论研究如何调整，但是调整涉及多方面，比较难找到一个妥善的办法，如果改成直补，按照面积补贴，可能会发生虚报面积 如果按照产量补贴，可能会存在虚报产量等问题。