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如何检测哌嗪、乙二胺、三乙烯二胺、二乙烯三胺、氨乙基哌嗪、二甲苯、均三甲苯?
[font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体],是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学,并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点,两者的亲和常数([/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体])比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体([/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体])至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍,是目前已知强度最高的非共价作用,这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品,拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白,覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势,适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中,生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此,生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现,也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程,提高了效率。此外,由于生物素的小尺寸([/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]),不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析,将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液,[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢?这需要非常严苛的条件(例如,[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]),这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质,最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密,但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后,亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用:在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上,结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定,[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定,[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类(氨基、醛基或巯基)以及分子的酸碱性,选择相应的活化生物素和反应条件;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时,活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例;生物素:[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体];[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响,可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性;标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]
[font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品,拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白,覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势,适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-Tag[/font][font=宋体]生物素标记蛋白:[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]重组蛋白融合一个额外的[/font][font=Calibri]15[/font][font=宋体]个氨基酸序列,即[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体],通常连接至蛋白的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]C-[/font][font=宋体]末端。 [/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]肽段被大肠杆菌生物素连接酶[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]所识别,[/font][font=Calibri]BirA[/font][font=宋体]连接酶通过酶促反应将生物素连接到[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]序列内的单个赖氨酸残基。因此,[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签蛋白以特定位点的方式进行生物素化,从而实现标记均一。 这使固定在亲和素包被表面的蛋白方向具有一致性,并且由于[/font][font=Calibri]Avi[/font][font=宋体]标签位于蛋白的末端,因此对蛋白活性的影响通常很小,有助于保持生物素化的蛋白与未标记的蛋白保持相同的特性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物素与链霉亲和素[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]亲和素([/font][font=Calibri]SA[/font][font=宋体])之间的强非共价相互作用,具有高灵敏度和高特异性。义翘神州开发了多种[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]生物素标记的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势:[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性,经[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BLI[/font][font=宋体]等验证[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 多种属,覆盖细胞治疗、抗体、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体等热门靶点[/font][/font][font=宋体]? 高批间一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]化学标记生物素蛋白:[/font][font=宋体][font=宋体]化学标记法,是将蛋白[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]末端游离胺基及内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合,通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子。化学标记法具有灵敏度高、[/font][font=Calibri]tag free[/font][font=宋体]等特点,是常用的生物学方法之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]产品优势:[/font][font=宋体]? 高信号强度,每个蛋白分子通常平均含有多个生物素,有助于对其检测。[/font][font=宋体]? 标记方法简单,检测灵敏度高。[/font][font=宋体][font=宋体]? 高生物活性,[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]等验证,批间一致性高[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生物素标记蛋白应用:[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、用于生物素标记的三种天然产物分子探针的设计与合成研究[/font][/font][font=宋体]从中药中提取分离得到的天然产物具有结构多样、药理作用广泛的特点,常被用来作为先导化合物开发新药,因此需要对其具体作用机制进行研究。天然产物药理作用广泛对应着多靶点的特性,但其靶标蛋白的难以确定也阻碍了人们对其的进一步研究与开发。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]基于亲和性蛋白组学分析方法([/font][font=Calibri]Affinity-based Protein Profiling,ABPP[/font][font=宋体])是基于活性小分子与靶标蛋白之间的亲和作用,在活性小分子上引入报告基团,利用亲和层析技术可以将靶标蛋白进行分离的一种方法,其作为一种十分有效的工具被广泛应用于天然产物靶标蛋白的发现。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选取三个从中药中提取分离得到的活性天然小分子,设计合成相应的小分子探针,旨在为它们靶标蛋白的发现以及作用机制的研究提供一个有效的工具,具体内容如下:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、对目前主要的用于天然小分子的靶标蛋白鉴定方法进行了介绍,且着重介绍了[/font][font=Calibri]ABPP[/font][font=宋体]方法及其在天然产物靶标蛋白鉴定的应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、以薯蓣皂苷元和生物素为原料,经过酯化、酰胺化、取代、水解反应等步骤分别合成含有长臂亲脂性链和亲水性链的薯蓣皂苷元生物素标记探针[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8,[/font][font=宋体]并以[/font][font=Calibri]MTT[/font][font=宋体]法对其进行抗肿瘤活性评价。实验得到的探针分子、重要中间体用[/font][font=Calibri]MS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1H-NMR[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]13C-NMR[/font][font=宋体]表征,确认所得化合物结构与目标化合物一致。细胞活性实验结果表明合成的探针分子[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]具有与薯蓣皂苷元相当的抗肿瘤活性,且对探针分子标记的靶标蛋白进行电泳分析,发现了三条薯蓣皂苷元可能特异性作用的蛋白条带,这些结果都为后续薯蓣皂苷元抗肿瘤靶标蛋白的发现奠定基础。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font]