氯硝基咪唑标准品

使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]技术测硝基咪唑及其代谢物 使用内标法 在做液相优化的时候标准品和内标物的峰没有办法分开 内标物和标准品的需要完全分开吗

[b][font=宋体]硝基咪唑的危害及检测目的[/font][/b][font=Calibri][font=宋体]硝基咪唑类药物[/font][/font][font=宋体]（[/font][font='Times New Roman']nitroimidazole,NMZs[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri][font=宋体]是一类具有抗原虫感染和抗厌氧菌的硝基杂环类抗菌药物[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri][font=宋体]其具有抗菌和抗原虫作用[/font][/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri][font=宋体]近年来作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产中[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri][font=宋体]同时也是一种生长促进剂[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri][font=宋体]以促进畜禽的生长及改善饲料[/font][/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri][font=宋体]转换率[/font][/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri][font=宋体]由于这类化合物含有的硝基杂环类[/font][/font][font=宋体]物质[/font][font=Calibri][font=宋体]具有潜在致癌、致畸和致突变作用[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri][font=宋体]因此欧美等发达国家已禁止在食源性动物中使用硝基咪唑类药物[/font][/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri][font=宋体]我国也对硝基咪唑类药物进行了严格的限制[/font][/font][font=宋体]，[/font][font='Times New Roman']2020[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri][font=宋体]生效实施的[/font][/font][font='Times New Roman']GB 31650-2019[/font][font=Calibri][font=宋体]《食品安全国家标准[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri][font=宋体]食品中兽药最大残留限量》中仅规定了甲硝唑和地美硝唑[/font][/font][font=宋体]两[/font][font=Calibri][font=宋体]种物质允许作治疗[/font][/font][font=宋体]使[/font][font=Calibri][font=宋体]用[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri][font=宋体]但不得在动物性食品中检出[/font][/font][font=宋体]；同年[/font][font=Calibri][font=宋体]农业[/font][/font][font=宋体]农村[/font][font=Calibri][font=宋体]部[/font][/font][font=宋体]公告第[/font][font=宋体]250[/font][font=宋体]号，[/font][font=Calibri][font=宋体]将[/font][/font][font=宋体]洛硝达唑、替硝唑[/font][font=Calibri][font=宋体]列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》中[/font][/font][font=宋体]。[/font][font=宋体]本文阐述了如何将[/font][font=宋体]硝基咪唑类化合物[/font][font=宋体]从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标[/font][font=宋体]GB/T 21318-2007[/font][font=宋体]，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。[/font][b][font=宋体]检测项目：[/font][/b][font=宋体]硝基咪唑类原药及代谢产物[/font][b][font=宋体]应用范围：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]猪肉[/font]/[font=宋体]鸡肉[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]牛肉[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]猪肝[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]鸡肝[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]牛肝[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]猪肾[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]牛肾[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]鱼肉[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]奶粉[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蜂蜜[/font][/font][b][b][font=宋体][font=宋体]液相色谱[/font]-质谱/质谱法[/font][font=宋体]方法原理：[/font][/b][font=宋体]样品中残留的[/font][font=宋体]8[/font][font=宋体]种硝基咪唑、[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体][font=宋体]种代谢物用甲醇[/font]-[font=宋体]丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以凝胶色谱（[/font][/font][font=宋体]GPC[/font][font=宋体]）净化，再经固相萃取（[/font][font=宋体]SPE[/font][font=宋体][font=宋体]）净化，采用液相色谱[/font]/[font=宋体]串联质谱确证，外标法定量测定。[/font][/font][font=宋体]前处理仪器：[/font][/b][font=宋体]凝胶色谱仪（配有馏份收集浓缩器）；组织捣碎机；均质器；超声波发生器；旋转蒸发器；高速[/font][font=宋体]离心机；[/font][font=宋体]氮吹仪；固相萃取装置；具塞锥形瓶（[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]）；分液漏斗（[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]）；浓缩瓶（[/font][font='Times New Roman']50 mL[/font][font=宋体]、[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]）。[/font][b][font=宋体]检测仪器：[/font][font='Times New Roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS+ESI[/font][font=宋体]源[/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]前处理方法[/font][font='Times New Roman']1.[/font][font=宋体]提取[/font][font=宋体]肌肉组织、脏器组织样品及水产品[/font][/b][font=宋体]准确称取约[/font][font=宋体]20 g[font=宋体]样品（精确至[/font][font=Times New Roman]0.1 g[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体]于[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]具塞锥形瓶中，加入[/font][font=宋体]10 g[font=宋体]硅藻土（[/font][font=Times New Roman]80[/font][font=宋体]目[/font][/font][font=宋体]～[/font][font=宋体]120[font=宋体]目）与样品充分混匀，再依次加入[/font][/font][font=宋体]5 mL[font=宋体]饱和氯化钠水溶液和[/font][font=Times New Roman]70 mL[/font][font=宋体]甲醇[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]丙酮（[/font][font=Times New Roman]3+1[/font][font=宋体]），高速均质提取[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]。将提取液移入离心管中，于[/font][/font][font=宋体]10000 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体] min[font=宋体]，将上层[/font][/font][font=宋体]提取液移入[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体][font=宋体]浓缩瓶中。残渣每次再用[/font]50 mL[font=宋体]甲醇[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]丙酮（[/font][font=Times New Roman]3+1[/font][font=宋体]）重复提取两次，合并提取液。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][font=宋体]蜂蜜、乳及乳制品样品[/font][/b][font=宋体]准确称取约[/font][font=宋体]20 g[font=宋体]样品（精确至[/font][font=Times New Roman]0.1 g[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体]于[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]具塞锥形瓶中，[/font][font=宋体]加入[/font][font=宋体]10 mL[font=宋体]饱和氯化钠水溶液和[/font][font=Times New Roman]70 mL[/font][font=宋体]甲醇[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]丙酮（[/font][font=Times New Roman]3+1[/font][font=宋体]），超声波提取[/font][font=Times New Roman]30 min[/font][font=宋体]。移入离心管中，于[/font][/font][font=宋体]10000 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font=宋体]2[/font][font=宋体] min[font=宋体]，将上层[/font][/font][font=宋体]提取液移入[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体][font=宋体]浓缩瓶中。残渣每次再用[/font]50 mL[font=宋体]甲醇[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]丙酮（[/font][font=Times New Roman]3+1[/font][font=宋体]）重复提取两次，合并提取液。[/font][/font][b][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]2.[font=宋体]液液分配[/font][/font][/b][font=宋体]将提取液于[/font][font=宋体]40[/font][font=宋体] ℃水浴中旋转浓缩至只剩水相，并转移至[/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体][font=宋体]分液漏斗中，加入[/font]50 mL[font=宋体]饱和氯化钠水溶液和[/font][/font][font='Times New Roman']25 mL[/font][font=宋体][font=宋体]乙酸乙酯，振摇[/font]3 min[font=宋体]，静置分层，收集乙酸乙酯相。水相再用[/font][/font][font=宋体]20 mL[font=宋体]乙酸乙酯重复提取两次，合并乙酸乙酯相。经无水硫酸钠柱脱水，收集于[/font][/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]浓缩瓶中，[/font][font=宋体]于[/font][font=宋体]40[/font][font=宋体] ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入[/font][font='Times New Roman']5 mL[/font][font=宋体][font=宋体]乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）溶解残渣，并用[/font][font=Times New Roman]0.45 [/font][/font][font='Times New Roman']μm[/font][font=宋体]滤膜过滤，待净化。[/font][b][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体]3[/font][font='Times New Roman'].[/font][font=宋体]净化[/font][font=宋体]凝胶色谱（[/font][font='Times New Roman']GPC[/font][font=宋体]）净化[/font][font=宋体]凝胶色谱净化条件如下：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]净化柱：[/font]700 mm[font=宋体]×[/font][font=Times New Roman]25 mm[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]Bio Bcads S X3[/font][font=宋体]，或相当者；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]流动相：乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]流速：[/font]4.7 mL/min[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]样品定量环：[/font]5.0 mL[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]预淋洗体积：[/font]50 mL[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]洗脱总体积：[/font]210 mL[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]开始弃去体积：[/font]90 mL[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]收集体积：[/font]90 mL[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]最后弃去体积：[/font]30 mL[font=宋体]。[/font][/font][b][font=宋体]凝胶色谱净化步骤如下：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]将[/font]5 mL[font=宋体]待净化液按照凝胶色谱净化条件进行净化，合并馏份收集器中的收集液于[/font][/font][font='Times New Roman']250 mL[/font][font=宋体]浓缩瓶中，于[/font][font='Times New Roman']4[/font][font=宋体]0[/font][font=宋体] ℃水浴中旋转浓缩至近干，加入[/font][font=宋体]5 mL[font=宋体]甲醇以溶解残渣，待净化。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]固相萃取（[/font][font='Times New Roman']SPE[/font][font=宋体]）净化[/font][/b][font=宋体]使用前用[/font][font=宋体]5 mL[font=宋体]甲醇预淋洗[/font][font=Times New Roman]C18[/font][font=宋体]固相萃取柱（[/font][font=Times New Roman]1 g[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]6 mL[/font][font=宋体]），将[/font][font=Times New Roman]5 mL[/font][font=宋体]溶解液倾入[/font][font=Times New Roman]C18[/font][font=宋体]固相萃取柱中，以[/font][font=Times New Roman]1 mL/min[/font][font=宋体]的速度收集流出液，再用[/font][font=Times New Roman]10 mL[/font][font=宋体]甲醇进行洗脱。收集全部洗脱液于[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]浓缩瓶中，于[/font][/font][font='Times New Roman']4[/font][font=宋体]0[/font][font=宋体] ℃水浴中旋转浓缩至干。用甲醇溶解并定容至[/font][font=宋体]1.0 mL[font=宋体]，经[/font][font=Times New Roman]0.45 [/font][/font][font='Times New Roman']μm[/font][font=宋体]滤膜过滤后，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测定和确证。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]国标解读及注意事项[/font][/b][font='Times New Roman']1.[/font][font=宋体]硝基咪唑标准物质用甲醇配成[/font][font=宋体]1000[/font][font='Times New Roman'] μg/[/font][font=宋体]mL[font=宋体]的标准[/font][/font][font=宋体]储备液，在[/font][font='Times New Roman']0[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]～[/font][font='Times New Roman']4[/font][font=宋体] ℃条件下避光保存，可使用[/font][font='Times New Roman']12[/font][font=宋体]个月。[/font][font=宋体]2.[/font][font=宋体]如果有条件，建议凝胶色谱净化系统中配合使用紫外检测器，准确监测目标化合物及杂质的流出情况。[/font][b][font=宋体]3[/font][font='Times New Roman'].[/font][font=宋体][font=宋体]固相萃取净化过程中，[/font]C18[font=宋体]柱作为净化柱使用，注意上样过程中就需要收集流出液，再和洗脱液进行合并。[/font][/font][font=宋体]4.[/font][font=宋体]国标方法中使用基质添加标准曲线，外标法进行回收率的校正。注意做肉类样品的基质添加标准曲线前，先进行洗涤，然后加标，再进行后续提取净化等流程。[/font][font='Times New Roman']5.[/font][font=宋体]建议使用硝基咪唑标准物质相对应的同位素内标，进行回收率的校正。[/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献[/font][/b][font=宋体]GB/T 21318-2007 [/font][font=宋体]动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法[/font][align=center][font=Calibri] [/font][/align][align=center][img=,554,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010301416299459_3472_3793_3.png!w554x415.jpg[/img][font=Calibri] [/font][/align][align=center][/align][align=center][/align][font=宋体][/font][align=center][font=宋体]图[/font][font=宋体]1 [/font][font=宋体]肌肉组织、脏器组织样品及水产品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图[/font][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][img=,554,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010301416169976_4411_3793_3.png!w554x415.jpg[/img][/align][font=宋体][/font][align=center] [/align][align=center][font=宋体]图[/font][font=宋体]2 [/font][font=宋体]蜂蜜、乳及乳制品样品中硝基咪唑残留量测定的前处理流程图[/font][/align][font=宋体][/font][font=宋体][/font][align=center][b][font='Times New Roman'][font=宋体]表[/font][/font][font='Times New Roman']1 [/font][font='Times New Roman'][font=宋体]硝基咪唑标准物质信息表[/font][/font][/b][/align][align=center][font=宋体][img=,690,]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010301416445861_6609_3793_3.jpg!w690x892.jpg[/img][/font][/align]