产气荚膜梭菌定性

2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标，有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备，我们根据标准的要求做个简单介绍。根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材：1. 电子天平：实验室常用仪器2. pH计或精密pH试纸：实验室常用仪器或耗材3. 恒温培养箱：实验室常用仪器4. 冰箱：实验室常用仪器5. 恒温水浴箱：实验室常用仪器6. 显微镜：实验室常用仪器7. 无菌吸管：实验室常用耗材或仪器8. 无菌试管：实验室常用耗材9. 无菌平皿：实验室常用耗材10. 厌氧培养装置：华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统11. 过滤设备：华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置12. 滤膜:实验室常用耗材13. 无齿镊子：实验室常用耗材其他会用到的设备：HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图一、 样品1. 污染较轻的水样，可直接取100 ml水样进行检验。2. 污染严重的水样，可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释，取100ml进行检验。使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪：自动称重，自动按比例稀释。二、 过滤水样先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置：配备直排泵，无需废液瓶，直排废液；火焰灭菌支架和滤杯，提高实验效率。三、 厌氧培养过滤完水样后，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上，滤膜截留细菌面与培养基完全贴紧，避免气泡产生，然后将平皿倒置于厌氧培养装置内，于36℃±1℃厌氧培养18 h~24 h，计数黑色菌落数。使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统：使用灵活、成本低，培养效果有保障，操作简单、智能。四、菌落计数对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数使用华端生物HD-C系列菌落计数仪：手动菌落计数器辅助计数，操作方便；全自动菌落计数仪：软件自动计数，计数快捷、准确。五、 细菌鉴定用上述培养液涂片，革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端，其宽度一般不超过菌体宽度。使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪：自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化，批量大时可节约大量时间。使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统：标准化的试剂操作，仪器自动判读结果，避免人工判读偏差。六、其他仪器使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪：自动分装培养基或者其他微生物试剂，方便、快速。使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪：相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。杭州华端生物科技有限公司创始团队十多年来一直专注于为用户提供有竞争力的食品、药品、医疗及科研微生物实验室的整体解决方案与服务。2021年我们开始运营品牌“华端生物”，品牌寓意中华之端，华端人不断创新研发，提升产品竞争力，打造新国货。在企业发展过程中，我们始终秉持这一理念，不断引进、培养高科技人才，加大研发力度，并通过对产品持续创新、服务坚持初衷和团队共同成长的持续投入，不断推出符合市场需求的解决方案和服务。我们坚信，“更好的产品、更好的服务和更好的团队”是我们能够赢得客户青睐的核心竞争力，我们会始终不忘初心、砥砺前行，实现“与客户共同保障食品安全、药品安全和公共卫生安全”的社会使命。以史为鉴、开创未来。杭州华端生物科技有限公司诚挚期待与广大用户深入交流，与想要加入团队共同奋斗的同仁，携手前行，共创美好未来。核心价值观：拼搏、专注，突破、创新！企业愿景：提升国产微生物检测设备的竞争力！公司使命：为食品、药品和公共卫生安全提供保障。

2012年初，香港新港府总部多处发现退伍军人杆菌，证实是会议厅的厨房和立法会综合大楼3楼茶水间的两个样本，检出嗜肺军团菌。港府大楼求诊的8名员工，基本都是24岁至42岁青壮年，检测结果显示，无须入院，或可能是流感样型。换季时节，是军团菌高发的季节，由嗜肺军团菌引发的军团菌肺炎在非典型肺炎中是病情严重的一种，未经有效治疗的病死率高达20%。 　　嗜肺军团菌是一种有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌属多形态性的短小球杆菌。嗜肺军团菌不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。不能分解明胶、糖类或尿素，不可参加酵解反应。嗜肺军团菌无色，也非自身荧光。氧化酶与过氧化氢酶测试呈阳性，为β-内酰胺酶阳性。专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味。革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。 嗜肺军团菌 　　卫生部于2006年颁布了《公共场所集空调通风系统卫生管理办法》、《公共场所集中空调通风系统卫生规范》，规定对集中空调系统冷却水和冷凝水作出了嗜肺军团菌“不得检出”的规定。 　　流行病学研究阐明，冷凝塔、加湿器及风管等是病原体的来源，空气及气溶胶是病原体的传播媒介。夏季和秋季是军团菌最适宜生长的季节，也是发病率最高的季节。 　　军团菌的检测军团菌因为个体小，生长缓慢，难检出，并具有传染性，对检测实验室和实验人员的操作有相当高的要求。近日，我要测工作人员联系了广州工业微生物检测中心，了解了嗜肺军团菌的检测方法及检测过程： 　　嗜肺军团菌的检测 　　国内外的军团菌检测方法主要依据 ISO11731-1:1998 ISO 11731-2：2004(E)、《军团菌的检测和计数》及《公共场所集空调通风系统卫生管理办法》。定性测试两种方法的检测步骤大致相同，基本包括以下步骤： 　　1. 采样及运送 　　采样容器可为无菌玻璃瓶,聚乙烯瓶或无菌采样袋，并且瓶口或袋口能密封；采样量一般在300-400ml 左右，如果经过氯或臭氧消毒的水，采样后加入少量硫代硫酸钠溶液，以中和样品中的氧化物；采样至送达实验室最长时间不得超过2天。 嗜肺军团菌取样 　　2. 样品处理 　　对含少量军团菌的样品一般用薄膜过滤法来浓缩样品的浓度，如有杂质的样品可静置沉淀或离心过滤去除，并对样品进行热处理和酸处理以减少非军团菌的生长。 嗜肺军团菌样品前处理 　　3. 接种和培养 　　军团杆菌在分类学上是一种独特的需氧革兰氏阴性杆菌，无荚膜，在普通培养基上不生长，属于细胞内寄生菌。目前标准培养基为活性碳酵母浸膏琼脂平板，也称军团菌生长平板(BCYE)。接种在 BCYE 平板上的样品在温度为35-37º C，培养10天，在浓度为2.5% CO2 的环境下培养更有利于军团菌的生长。军团菌的菌落通常呈白色、灰色、有荧光。 接种和培养 　　4. 军团菌的鉴定 　　挑取至少3个疑似军团菌的菌落接种至军团菌生长 BCYE 平板和半光氨酸缺失的 BCYE-Cys 平板，在35-37º C条件下培养至少5天，凡是在 BCYE 平板上生长而在平板和半光氨酸缺失 BCYE-Cys 平板上不生长，并且血清学阳性的的则判为军团菌。 嗜肺军团菌检测 嗜肺军团菌检出 　　嗜肺军团菌的预防 　　第一，，对军团菌主要滋生地 -- 中央空调系统、冷热水循环系统、冷凝脱水盘、空气加湿器等进行定期清洁处理。定期更换冷却水和冷冻水，避免贮存水长期滞留，保证空调系统注入水的洁净，必要时采取杀菌杀藻等消毒措施；定期清洗空调冷却塔及管道，对大型建筑物的中央空调系统要定期使用消毒抑菌剂清洁。 　　第二，使用空调(包括冬天使用暖空调)的房间应经常开窗通风，经常保持室内环境的卫生和空气流通，有条件的话对室内空气进行净化和杀菌处理。 　　第三，使用空调期间，一旦出现发烧、咳嗽、胸痛、呼吸不畅，不应只考虑“感冒”，应及时就诊检查，警惕军团菌病。只要早期发现及时治疗，效果较好。 　　关于广州工业微生物检测中心 　　广州工业微生物检测中心通过了CNAS实验室认可及广东省CMA计量认证，已为多家星级酒店、商业广场及企业的生活用水、冷却塔、泳池水等水源提供了检测及咨询服务，出具的军团菌检测报告得到国家卫生监督部门的承认。

矿泉水新标取消菌落总数强调致病菌 或致部分水企转型纯净水(图) 矿泉水新标准的出台或将迫使部分企业转做纯净水 　　记者近日从国家标准化委员会获悉，备受关注的《饮用天然矿泉水》和《饮用天然矿泉水检验方法》的两个国家标准发布，其中溴酸盐有了与世界卫生组织一致的限定值，最高不得超过0.01mg/L。同时增加了粪链球菌、铜绿假单胞菌和产气荚膜梭菌3项微生物指标。 　　记者从多家水企获悉，如要达标，必须先进行设备的改造，根据企业规模，少则数十万，多则上百万。因此，不排除有水企为降低成本而转型生产纯净水。 　　取消菌落总数强调致病菌 　　“此前媒体所报道的溴酸盐致癌也间接导致新标准的修改，总体来说是一个进步。”广州一水企负责人告诉记者，溴酸盐这个问题一直都存在，只是没有引起足够的重视，加上旧的《饮用天然矿泉水》国家标准已经十多年没有修改，确实已经到了要修改的地步。 　　据其介绍，正常情况下，水中不含溴酸盐，但普遍含有溴化物。当用臭氧对水消毒时，溴化物与臭氧反应，氧化后会生成溴酸盐。国际癌症研究中心(IARC)认为，溴酸钾对实验动物有致癌作用，但溴酸盐对人的致癌作用还不能肯定，为此将溴酸盐列为对人可能致癌的物质。 　　记者了解到，新标准取消了菌落总数，更强调致病菌。广州八奇饮用水有限公司总经理罗灏认为，这更具科学性。他表示，菌落总数是一个很笼统的概念，产品一开封就会受到污染，菌落总数不合格也是很正常的，但强调致病菌则是另一个概念，更能保障人体健康。 　　不堪成本压力或转型纯净水 　　据了解，如要达标，企业必须先进行工艺和设备的改进。罗灏表示，对于矿泉水来说，新标准的实施对产品要求更严格了，但实际上，在保留矿泉水原有口感的情况下，又对溴酸盐有限定值，对企业来说也是不小的难题。溴酸盐致癌在国内的说法也是这几年才出现，目前技术上还不是很成熟，但仍有各种方法可以尝试，大家正在研究一个更高效、节约成本的方法。 　　记者了解到，企业首先要进行设备的改造，根据企业规模，少则数十万，多则上百万。“不排除有水企转做纯净水，纯净水不存在溴酸盐的问题。”某矿泉水负责人告诉记者，新标准的出台也是规范市场的一个手段，不能达标的将被清出市场。