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实验室工作7年了,很多人问我怎要才可以把实验做好,做得漂亮。对于这个问题,我再看看到很多做事毛糙,手忙搅乱的师弟师妹时,只能笑而不语。生物实验不是化学实验,很少会爆炸,真的没必要慌乱,和很多工作一样,需要用“心”去做。 不说废话,回归正传。今天谈谈“含抗生素平板培养基的配制窍门”。当然,对于很多做这个实验做得炉火纯青的同行,实在没必要看下去了。下面写的只是供那些在这个环节不太了解的朋友看。 基本步骤如下: A.琼脂、蛋白粉、无机盐、…..去离子水….等等,混匀,溶解,具体成分看你培养神马菌了; B. 120度,高压灭菌; C. 加抗生素,加神马抗生素,看你要筛选神马菌,氨苄青霉素?链霉素?潮霉素B? D. 倒平板。 别以为这个大家都会。讲一个真实故事给大家听,以前有一个做实验也是蛮拼的同学,要做含青霉素的筛选平板培养基,他一次不成功,就做第二次,但是还是不成功,一直做了2个月还是不成功。。。他的科研热情实在值得学习,只是财力不是很雄厚的老板实在伤不起。我们好奇,怀疑他没加青霉素,就问他加了没,他回答时也很有底气,自信地告诉我们,加了,加了不少------可惜都是在高温灭菌前加的!如此高温,哪家的抗生素不分解啊? 在这里,我想强调的是,加抗生素,除了要选择时,还要择温度!加抗生素必须在灭菌之后加,加的时候一定要等琼脂培养基凉下来再加。温度降到什么时候为宜呢?就是45~50度的范围。当然,有些牛人,靠手摸,感觉不烫,就刚好是45~50度。作为搞科研的,我不推荐用这种方法。我推荐大家用恒温循环水浴。建议不要用国产的水浴,因为隔壁实验室发生过漏电事件……我用过几个进口品牌,发现德国IKA的恒温水浴最好,安全,精准,好用。可惜当时递交采购单时太草率,就选了一个基本型的ICC恒温水浴。五楼的小黄老师有钱就这么任性,挑了个IKA控制型,可以远远的无线控制~~听说无线控制距离可达10米~~~ 45~50度是一个很合适的温度,一方面可以保持抗生素的活性,另一方面,琼脂在这个时候不凝。轻轻晃动几下培养基,让抗生素混匀,切忌不要使劲,否则起了起泡就很难看了。后续,只要小心的把培养基倒到培养皿上,于是高质量的含抗生素的培养基就做好了~
药品GMP指南中,用于样品处理的试验间和用于制备双碟的受控区[即受控非分级(clean not classified, controlled not classified , CNC)区域],请注意该实验室无洁净级别要求,操作台宜稳固并保持水平。因为没有做过抗生素检定,想请教一下各位,抗生素效价测定中,供试品以及对照品溶液的配制在一般区进行,菌液的制备由阳性室进行制备,将供试品溶液、对照品溶液、菌液、培养基以及双碟通过传递窗传入双碟的制备的D级区里面,在D级的不锈钢实验台进行加菌以及加供试以及对照溶液,制备完成后,传出至培养间进行培养。这个过程有没有问题?
-内酰胺类化合物除外。对于这些抗生素,为防止假阳性反命的发生,通常不检测其抑 制特性,而检测其中的13 -内酰胺酶.因为菌株的抑制剂除抗牛素外还有i污剂或消毒 剂等其他物质。噬菌休或其他热敏性抑制剂可能产生假阳件结果,在确认试验前对样品 进行热处理便可以排除:这类试验通常有对比结果,所以必须按要求规范实验操作。is 法中测试的灵敏度和痕贵抗生素的检出限取决丁特定测试条件下选用菌株的敏感性。常 用的对奶中抗生素的常规分析方法是纸片分析法和染色剂还原法二本书对这些方法举例 迸行r描述。另外,也可使用快速现场测试法,这些方法町用于农场或平台放行检测。检 测芦-内酰胺抗生素的SNAP测试(美国缅因州IDEXX实验室)就是其屮的一个例子,它 可在lOmin内得到检测结果:Bell等人也证明该方法是一种可靠的现场检测方法。 (1)片碟法将敏感菌株接种于琼脂培养基后倾倒平板,并使之凝固,然后将浸泡在 样品中的小圆形滤纸片放在琼脂忐面。将平板智于适当的温度下培养,直至长出菌落。 若有抗生素或其他抑制物渗人培养基,则在纸片周围会出现清晰的抑菌圏。通过与巳知 对照平板抑制圈直径的比较(条件是严格的标准状态),可得到牛奶中抗生素的含量 所有敏感菌株均可用于此项试验,如藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌 改进的方法使用了嗜热的嗜热脂肪芽孢杆菌作为敏感阐株,其优点为平板可在55℃培养,能较快 地得到检测结果。AOAC官方规定片碟法检测内酰胺抗生素时所使用的敏感菌株为 嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(AOAC, 1995)