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在体育界,对于睾丸激素的滥用越来越需要一个新的检测方法。 目前,GC-MS被用来从尿液中检测排泄物的睾丸激素/表睾(甾)酮比值。 当T/E的比例超过6:1的时候,传统上被认为是确证为睾丸素的管理。 这个比值被接受,由于世界流行的T/E比例低于该比例。但是, 有少部分的天然的就超过了6:1, 这样一些无辜者就被错误的判别成了有罪。 以下工作揭示了天然和合成的睾丸素荷尔蒙在C13方面的差异。这个应用文章揭示了传统的测试方法的失败,和使用GC-C-IRMS方法分析的成功。睾丸激素庚酸酯,丙酸睾丸甾酮库存是从日本获得。参比类固醇,吉拉德氏试剂T(羧甲基,三甲基氨基氯化酰胺)和铋酸盐是从Sigma公司获得。Sephadex LH-20是AB公司产品,Sep-pakcartridges来自waters。B-葡(萄)糖苷酸酶/芳香基硫酸酯酶是从Sigma和Boehringer Mannheim公司获得。所有的试剂均是分析6级。关于这个研究的志愿者5个中国男子(年龄:19-22)参与这个研究。在肌肉注射250mg庚酸睾丸酮之前的两天,收集尿样。在注射后的最初四天里,收集两个尿样(20ml),虽然只有每天清晨收集的样品用于分析。清晨点的尿样在第5-9天收集,后面依次是第11,13,15天。
德国和以色列研究人员能够利用实验室器皿里的少量细胞培育出老鼠精子。他们认为,利用从睾丸里提出来的“生殖细胞”培育精子的这项技术,最终将能在人类身上产生作用 新浪科技讯 北京时间1月5日消息,科学家已经在体外培育精子方面取得新突破,这一重大发现将能帮助不育男性生育属于自己的孩子,而不是利用捐献精子。 德国和以色列研究人员能够利用实验室器皿里的少量细胞培育出老鼠精子。他们认为,利用从睾丸里提出来的“生殖细胞”培育精子的这项技术,最终将能在人类身上产生作用。该科研组现在正在“尽快”在人类身上重现这一结果。德国明斯特大学的斯特凡-斯库拉德教授领导的这个科研组,是世界上首个能利用生殖细胞培育精子的研究组。生殖细胞是睾丸里负责产生精子的细胞。 科学家在生殖细胞被称作果胶体的一种特殊化合物环绕的环境下培育精子,这种环境与睾丸里的环境非常类似。以色列班固利恩大学的穆罕默德-胡雷赫尔教授也在培养精子,他说:“我认为,我们将能通过从睾丸里提取包含生殖细胞的组织,在实验室环境下刺激精子产生,最终培育出男性精子。”有关这项精子试验的发现,已经出现在《自然》杂志上。获得这一发现的科学家现在已经开始试验在体外培育人类精子。 英国国家医疗服务体系(NHS)负责人、男性不育顾问斯蒂芬-戈登大加称赞这一突破。他说:“这是一项出人意料的新发现,它将彻底变革不育治疗,令每一位男性都能有自己的亲骨肉。不育男性都想有自己的孩子,但是目前他们的愿望还无法变成现实。但是通过老鼠试验获得的重大发现,使这种情况有可能变成现实。”英国顶级不育专家、爱丁堡大学的理查德-沙普教授希望参与这项试验,他说:“这是向成功培育出人类精子迈出的重要一步。” 过去50多年间,男性不育问题变得越来越严重,男性的精子数大量减少。导致这种情况的部分原因是污染和塑料包装里含有雌激素等环境因素。泌尿科医生戈登说:“即使借助最新的显微外科技术,仍有数千名男性无法生育亲骨肉,只能依靠精子捐献。”胡雷赫尔表示,他的科研组目前正在“尽快”在人类身上再现老鼠试验取得的成功,以便帮助不育男性。“我们已经采用了相同试验,就如我们在实验室里利用老鼠做试验一样,我们采用人类细胞,不过目前还未取得成功。我们相信,只要它在老鼠等哺乳动物身上有作用,它就对人类也有效。我们正在利用大量不同化合物进行研究,以便获得生殖细胞,培育精子。我们认为它有可能变成现实,而且或许很快就会梦想成真。” 这项研究成果发表在本月的《亚洲男性学》杂志上。胡雷赫尔说:“我们能产生可以繁育后代的精子,我们可以利用它们繁育小老鼠。这些精子显然很健康,而且也不存在遗传受损问题。我们花了多年时间才达到这个阶段,因此产生人类精子的技术不会在一夜间出现,但是老鼠试验取得成功后,我们已经开始人类研究。”为了加快制造人类精子的方法取得成功的步伐,胡雷赫尔的科研组打算开始与爱丁堡大学的理查德-沙普进行合作。 沙普说:“这项研究显示,在体外培养人类精子并非不可能。生殖细胞需要合适环境。这是让它们以为它们仍在睾丸里的关键。”他认为,一种新颖方法或许能让它变成现实。他建议把活老鼠作为制造人类精子的“寄主”。他说:“你要做的就是提取一些含生殖细胞的人类睾丸组织,然后把它们放置在老鼠的皮肤下,利用老鼠‘卵化’这些细胞。然后取出培育出来的精子,用来治疗不育。但是我们首先需要证明萃取出来的精子不包含老鼠细胞,如果我们希望利用该技术,我想我们就可以做到这些。” 戈登也在私营新生命诊所治疗不育,他说:“有几十亿人投入到女性不孕的研究中来,但是人们对男性不育的研究兴趣较小。有很多不育男性希望这项研究取得成功,因为这样他们以后就不用依靠捐献精子要小孩了。” 用在实验室里培育出来的人类精子治疗不育之前,需要获得相关部门的许可。但是沙普等研究人员认为,这个障碍将会被攻克。他说:“我们需要证明的主要问题,是精子不存在遗传损伤,并与睾丸产生的精子一样。用来进行女性不孕治疗的卵子和晶胚,也接受了类似检测。”
体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理(如缺血、缺氧)、化学和生物因子(如神经营养因子)等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制,药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。 我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作,取得了一些经验,现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一.鸡胚背根神经节组织块培养 主要用于神经生长因子(NGF)等神经营养因子的生物活性测定。在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。1. 材料和方法 (1)选正常受精的鸡蛋,置于37℃生化培养箱内孵化,每日翻动鸡蛋一次。 (2)取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳,从气室端敲开蛋壳,用消毒镊剥除气室部蛋壳。(3)用弯镊钩住鸡胚颈部,无菌条件下取出鸡胚置小平皿内,除去头部后,腹侧向上置 灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔,除去内脏器官。(4)在解剖显微镜下,小心除去腹膜,暴露脊柱及其两侧,在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧 排列的背根节(图1),用一对5号微解剖镊小心取出。(5)置背根节于解剖溶液内,用微解剖镊去除附带组织,接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料 培养瓶中,在DMEM无血清培养液中培养。2. 结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S,20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。二.新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养背根神经节(DRG)细胞起源于神经嵴,NGF研究先驱Levi-Montalcini的实验表明,外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外,分离培养的神经节在NGF存在的情况下,神经突起的生长在一天之内可长达数毫米,因此,利用培养的DRG细胞,进行轴突生长发育的研究,是最为经典而常用的方法之一。