替米考星替米卡星标准

p 　　 strong 仪器信息网讯 /strong 德国时间2015年6月13日，借ACHEMA 2015召开前夕，IKA(艾卡)公司在德国南部小镇施陶芬的总部举行了盛大的2015年工厂参观活动。来自全球30多个国家的IKA代理商代表约200余人参加了此次活动，仪器信息网作为媒体代表也应邀参加。 /p p 　　参观IKA的活动，从早晨开幕式开始。IKA集团副总裁Mr. Eble致欢迎辞，他带领大家回顾了自2012年ACHEMA展会开始，IKA推出的50款新品近况，及未来几年IKA公司的愿景蓝图。 /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" 6_副本.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/db70ec5e-281f-4729-983f-4d1a9c187e16.jpg" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" 　 span style=" COLOR: rgb(36,64,97)" 　 span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" IKA集团副总裁Mr. Eble /span /span /p p 　　接下来，各种参观开始，从新品展示厅到售后服务中心，从应用实验室到生产车间，全新的配件，高度自动化的组装设备，不停奔走往来运输货物的机器人& amp #823& amp #823在那里我们体会了IKA非凡的产品标准化生产和质量控制。 /p p 　　 strong 全球统一的产品质量管控体制 /strong /p p 　　IKA创建于1910年，是一家具有百年历史的家族企业，历经几代人的奋斗，IKA现已成为实验室小型仪器设备全球著名的供应商，公司在美国、中国、印度、马来西亚、日本和韩国设有分公司，全球员工约900人。尽管每年高额的产品销售额，且产品的组装并不集中一地，IKA却能够保证其产品的稳定性和产品质量，这得益于其完善的质量管控体制。 /p p 　　据IKA管理人员给我们介绍，其中的关键是标准化。IKA制定严格的产品质量标准，并在全球执行。这个标准是由IKA工业工程管理和质量保证部门中心制定，细致到定义了每件产品的精度。IKA在全球有6个工厂，每个产品的生产流水线都严格执行由IKA中央工业工程团队设计的统一标准。并且IKA公司会组建高素质员工对各工厂执行定期审计，这样最大保证了IKA各地产品的一致性。 /p p 　　IKA产品核心部件采取统一供给原则。IKA的生产设施主要分为两部分：一个是装配，另一个是PCB生产。PCB(每件IKA产品的控制系统)是IKA公司核心竞争力之一。产品组件的装配工厂在全球有6个，但是PCB的生产却只在IKA的总部，德国施陶芬镇。 /p p 　　工作人员介绍说，PCB的新产品研发与产品运行效果、质量息息相关。因此所有IKA的PCB产品研发人员都是高素质人才。在开发新的PCB之后，IKA除了要对新增功能进行测试外，还要从生产的角度对其进行评估，以确保产业化后能达到最佳的成本控制和可靠性。PCB只有经过长期多方面的检测评估被确定其可靠性之后，IKA公司才会交付生产，并集散到全球其他装配工厂。 /p p 　　 strong 高自动化的产品生产 /strong /p p 　　IKA的产品生产流水线高度自动化是产品标准化的有力保证。工作人员为我们介绍说，为了确保高效的工作流程，每条流水线的装配工序都将分配在不同的地方，一道工序完成后，都将自动流转到下个地点，完成下一道工序。从开始到结束，每个组件进行装配的工序全部由自动机器人来完成。不仅如此，产品原料的搬运、成品的入库全部由无人驾驶运输系统来完成。 如此高的自动化流水线主要得益于IKA有一条清晰的组件加入流程。IKA观察每个配件组装过程，将不符合整体流程或特殊的组件在其他工作区进行生产并组装，并在适当的时候加入到整个装配流程中。IKA不断改进工作流程，以便每件事都能够加入到这个流程中。 /p p 　　在那里，我们看到流水线上的设备全都被永久的安装，每件工具都清楚的放在各自的位置上。相关工作人员给我们介绍说，那样是为了方便工作人员核查每件设备都能在工作中起到应有的作用。 /p p 　　在IKA磁力搅拌器的生产线上，一个工人和一台机器人就完成了磁力搅拌器的组装及最后的包装入库。在这条生产线上，我们还看见一个可以自动将纸皮折成箱子的自动装置，而包装好的产品搭载在一个无人驾驶的“小货车”上，便可以自动入库。 /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" 5.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/noimg/f8eef85f-277a-40b4-8b15-039790c61b52.jpg" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" 无人驾驶“小火车”和包装自动装置 /span /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" img title=" 4.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/noimg/733c7501-c783-4693-ae77-403d38dd655a.jpg" / /span /p p 　　机械手正在安装IKA多点加热磁力搅拌器的电路板，机械手通过不同工具头的更换，逐步完成焊接、线圈安装等过程，工人只需将所需的材料和配件放入即可。 /p p 　　 strong 虐待式的产品出厂检测试验 /strong /p p 　　在参观IKA产品出厂测试单元后，我们最大的感觉是IKA对产品的测试是自虐式的。IKA在产品生产的多个环节均设置了自动检测程序，检测内容涉及产品的所有方面。在磁力搅拌器的测试单元，整个功能测试包括安全测试、能耗、显示功能、速度、最高温度及温度分布，还有连接不同外部装置的功能测试等。相关工作人员为我们介绍说，不包括加热阶段，整个测试过程，每个单元花费5分钟，一个产品整体花费时间根据产品的功能范围而有所不同。在整个测试过程中，不管其中哪一项出现了问题，这台产品都将被拆散在一个隔离带，不会混到合格产品中，也不会被交付给客户。为了符合IKA严格的产品质量标准，所有的产品在离厂前，都要通过功能测试，这个标准被执行在IKA所有的产品生产地点。也就是说IKA全球采用相同的测试标准。保证了IKA标准化的产品和质量控制。 /p p 　　除了产品外，为了保证绝对可靠的质量检验，IKA严格界定标准，员工需要通过严格的培训测试。这些培训都是专门制定的程序质量体系。这个体系十分完备，为每个员工提供了每个测试步骤。一旦员工完成测试步骤，测试结果都要自动传回系统。只有每个测试步骤反馈的结果是正常的，才会进入到下一个测试阶段。 /p p 　　都说德国人的严谨是全世界出了名的，在这里有了更深刻的认识。IKA非凡的产品标准化生产和质量控制让我们赞叹不止。 /p p 　　 strong 参观花絮 /strong /p p 　　为了欢迎各地的代理商朋友，IKA在施陶芬小镇的古堡举行了一场盛大的Party，IKA的工作人员、Party演员及服务人员均穿着中世纪的衣服，让我们也一起体会了古老的德国文化，以及欧洲人的能歌善舞。中国是IKA最重要的市场之一，受到IKA总部的特别重视。娱乐活动中选出三个经销商，其中两个来自中国大陆，一位来自北京，一位来自上海. /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" 3.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/e09942aa-c152-4c17-80d7-2a8e82cfbaf2.jpg" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" 城堡Party掠影 /span /p p 　　IKA仪器小巧精致、人性化、安全功能等方面的周密设计给笔者留下深刻的印象 IKA产品在保障实验操作安全同时，也为实验室工作人员增添了不少乐趣。 /p p 　　也正由于在保证产品稳定可靠的质量之外，始终坚持“别具匠心”的设计理念，不断完善调整市场营销策略，拓展更广阔的市场空间，“百年IKA”才使得“小仪器”开拓出了“大市场”。 /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img style=" FLOAT: none" title=" 2.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/f891e2df-ef98-42f1-a38f-31d746305748.jpg" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img style=" FLOAT: none" title=" image1_副本.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/1b72fc2b-03d2-4d33-a7fe-e474f8db0997.jpg" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" IKA中国区领导层合影 /span /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" 德国IKA集团全球销售总监刘宝键(右三) /span /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" /span /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" img title=" IMG_7139_副本.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201508/insimg/17ec4ab8-0dba-45e2-a20d-5b92e88e3a0e.jpg" / /span /p p style=" TEXT-ALIGN: center" span style=" FONT-FAMILY: 微软雅黑,Microsoft YaHei COLOR: rgb(54,96,146)" 来自中国的代理商合影留念 /span /p p style=" TEXT-ALIGN: right" span style=" FONT-FAMILY: 宋体,SimSun COLOR: rgb(0,0,0)" 编辑：孙立桐 /span /p

对于外泌体研究的新手来说，细胞培养上清液是非常好的实验材料，外泌体相对容易收集。我们可以首先从细胞上清开始来熟悉整个外泌体的研究流程，充分了解整个流程需要使用的仪器、试剂以及准备时间，对我们后续的实验安排有很大帮助。其中比较重要的一点是要确定有足够的初始细胞上清液来收集外泌体，以保证我们能够拿到足够多的蛋白、核酸来进行后续分析。我们可以逆向思维，通过后续检测所需蛋白/核酸量——外泌体量——细胞上清量，来确定初始细胞上清体积。先从细胞上清开始，熟悉了整个过程后，我们再进行其他相对较难的实验材料进行研究。01细胞系选择无论贴壁细胞或是悬浮细胞，能分泌更多外泌体的细胞系肯定是优先选择的。一般说来，肿瘤细胞的外泌体分泌水平要高一些，但并不是所有肿瘤细胞系都能分泌足够多的外泌体，我们可以借鉴文献中的细胞系推荐1。以常用基因转染的HEK293为例，是比较公认的分泌外泌体水平较高的细胞系。或者，以每100ml的细胞上清收集到的外泌体蛋白可达到5~20μg范围作为标准2，例如我们可以从100ml的细胞上清中获得10μg的外泌体蛋白，如果后续要做蛋白质组学分析（需50μg蛋白），那么初始细胞上清就需要扩大到之前的5倍，500ml，500ml上清差不多是通过离心方法可处理的大样品量了。如果后面收集到的外泌体蛋白都不够进行一次WB，那就要考虑一下是不是要换个细胞系了。如果外泌体蛋白小于3μg，那么考虑到扩大体系的实验难度和后续实验的顺利进行，那证明我们用的细胞系不太合适做外泌体研究。*虽然很多生物样品或是细胞系在文献中没有出现过，许多外泌体相关的数据库（ExoCarta, Vesiclepedia, Evpedia等）可以提供帮助，在上面我们可以查到有哪些细胞系已经有人成功进行外泌体提取了。或者也可以咨询一些做外泌体的生物公司，看看他们是用哪些细胞系来制备商业化的标准外泌体样品的。02优化细胞培养条件及细胞系选择影响外泌体质量和回收率的另外一个重要因素是在收集之前细胞的培养状态。好的收集时间段是细胞状态好、生长旺盛，即处于对数期的细胞3，并且在细胞传代之前收集细胞上清，这个时候细胞所分泌的外泌体量达到高4。准备好的细胞上清液，细胞密度也要适合，贴壁细胞如果细胞密度过高会出现接触抑制，对所分泌的外泌体也会有影响。所以，理想的条件是在细胞融合达到70%~80%后的40~48h后收集外泌体（此时约融合至90%）。要注意，为了避免FBS外泌体的污染5，收集外泌体的40~48h之前需换成无血清培养基，注意此时40~48h仅作为推荐参考。像有些细胞在无血清培养基培养24h后没有发生存活率和细胞形态改变，那么可以进行上清收集。如果出现死细胞增加、细胞形状改变、状态变差等情况时，使用EV-delepted FBS培养基来代替无血清培养基，EV-delepted FBS可以直接购买也可以自己制备（使用SW 41Ti转头在4℃，35,000rpm(Rmax 210,000 ×g)离心16h后小心收集上清）。但是这样仍无法完全避免血清外泌体的污染，需要清楚样品中血清外泌体的含量，增加一组没有培养细胞的培养基的平行样品作为阴性对照是必要的。03外泌体的提取方法目前被大家认可的方法就是超速离心，因为超离的方法可以收集到完整的细胞外囊泡群，并且几乎所有的实验材料（细胞上清、血液、体液等）都可以通过超离的方法来进行外泌体提取。当然超离的方法也有需要改善的地方，比如样品量很小的情况下，超离对外泌体的回收率不高，但是超离作为一种物理分离的方法，可以在不破坏外泌体群体特性的情况下进行分离的。当前，除了超离外还有许多外泌体分离方法，每种方法都有它的优势和劣势，首先我们需要理解各种分离方法的原理和特点，再根据我们的实验需求才能找到合适的外泌体提取方法。超离方法是可以获得整个外泌体群体，适合于研究整个外泌体群体特性。Yoshioka博士：众多外泌体分离方法中，我们使用超离沉降的方法作为实验室提取外泌体的标准方法5（见下图）。这个Protocol主要包括三个步骤：1.小心收集细胞上清并低速（4℃，2,000xg，10分钟）去除悬浮细胞（死细胞）。2.用0.22μm孔径过滤器过滤上步中收集到的包含外泌体的上清液，去除大颗粒和细胞碎片。3.将上步中的滤液进行超离处理，使用贝克曼库尔特SW 41Ti水平转头、13.2ml超净离心管（Product Number:344059，Beckman Coulter），4℃下35,000rpm(Rmax 210,000xg)离心70分钟。离心过后外泌体在离心管底聚集成沉淀，通常是肉眼不可见的。然后用预先过了0.22μm孔径过滤器的PBS进行清洗，洗掉与外泌体一起沉降的成分，例如微颗粒和蛋白。小心倾倒掉第3步超离后的上清，残留少量液体进行2~3s的涡旋振荡重悬沉淀，然后加入PBS，重悬后的样品同样的条件再进行一次超离。再次超离过后的外泌体仍然需要重悬，倾倒掉上清后，再进行2~3s的涡旋振荡重悬，这时的外泌体样品就可以进行下步分析了。从离心管中转移外泌体样品到储存管（比如1.5ml微量离心管）时，在吸取时我们可以用移液枪先大概测量一下样品体积，后面在储存管中补充PBS到我们之前预估的样品体积，比如，我们想收集到100μl的外泌体样品，但是从离心管中转移到微量管中只有80μl（注意：使用13.2ml超净离心管，平均下来每次收集到的外泌体样品大概80μl），我们加20μl PBS到微量管中再混匀一下就可以保存了。外泌体样品可以在4℃保存，并且要尽量早的用于分析。另外，外泌体样品是不能反复冻融的，与细胞类似，反复冻融过程会破坏外泌体。现在大家普遍认为外泌体是具有异质性的，整个外泌体群还可以细分为亚群（例如尺寸、蛋白表达等），不同的亚群也具备不同的特性，正如前文所说，通过超离的方法可以收集完整的外泌体群体。也有些文献也报道过使用不同的离心条件，可以将尺寸大小不同的外泌体亚群分开。目前，还没有特别统一的外泌体超离提取步骤，像转头类型、离心管类型、离心力以及离心时间等离心条件在不同的文献上都会有些许的差异。04参考文献1. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]2. Valadi H et al. Nat Cell Biol. 2007 9(6): 654–6593. Beckman Coulter. Interview article: Basics and Vision of Exosome Research. 20154. Urabe F et al. Clin Transl Med. 2017 6(1): 455. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]

透射电子显微镜（TEM）具有原子水平的分辨能力，它不仅可以在观察样品微观形态，还可以对所观察区域的内部结构进行表征，成为纳米技术研究与发展不可或缺的工具。特别是TEM配合图像分析技术对多相体系中纳米颗粒粒度进行分析具有一定的优势。本文将对已实施的GB/T 42208-2022 《纳米技术 多相体系中纳米颗粒粒径测量透射电镜图像法》进行解读。多相体系是指体系内部不均匀的体系，在物理化学中也称为非均相体系、混相体系或者复相体系。而纳米颗粒受尺寸限制往往存在于材料基体中，形成多相体系来增加整个材料特性，这可能关系到后续产品的性能和安全性，因此对多相体系中纳米颗粒的评价尤为重要。透射电镜能作为最直观、准确的设备能够对样品内部进行评价，在多相体系中的纳米颗粒粒径表征中不可或缺。本标准从很大程度上完善和补充国内现有标准的不足，给出较为完整的多相体系中纳米颗粒粒径分析评价方法，不仅对于多相体系中纳米颗粒的粒径这种需要探讨体系内部的颗粒测量给出了方案，而且对于不同TEM的颗粒测量结果一致性评判具有重要的参考价值。本文件适用于固相多相体系中的粒径测量。考虑到多相体系的多样性，胶体和生物组织中的纳米颗粒，只要样品制备满足透射电子显微镜观察的要求，也适用本文件.一、背景纳米材料由于表面效应、量子尺寸效应、体积效应和量子隧道效应等，使材料表现出传统固体不具有的化学、电学、磁学、光学等特异性能。同时，受到尺寸的限制，纳米材料单独使用的场合有限，往往存在于材料基体中，形成多相体系来增加整个材料特性。但是由于纳米颗粒粒径较小、比表面积较大、表面能较大，极易团聚，致使其在多相体系中很难表征和评价。研究多相体系中纳米颗粒的粒度测量，对优化材料结构，改善材料的性能有着极大的促进作用，对推动纳米材料的应用和发展具有重要的意义。多相体系中纳米颗粒不同于单一的纳米颗粒，它对检测方法、样品处理及样品制备都有较高的要求。扫描电子显微镜和原子力显微镜由于成像原理的问题，不利于多相体系中纳米颗粒的测量。因此在本标准发布之前，国内该内容处于空白，本标准聚焦透射电镜的成像原理，对样品制备、图像获取、图像分析、结果表示、测量不确定度等技术内容给出了充分的、系统的说明。二、规范性引用文件和参考资料本标准在制定过程中，在符合GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》国家标准编写要求的基础上，充分参照了现行相关国家标准中的相关术语及技术内容的表述，包括颗粒系统术语、纳米材料术语、微束分析、粒度分析、纳米技术等各个专业领域；同时，在规范表达上，也充分征求了行业专家、资深从业者、用户的意见和建议，力求做到专业、通俗、易懂。 三、制定过程本标准涉及的领域较为专业，因此集合了国内相关领域的一批权威代表性机构合作完成。牵头单位为国家纳米科学中心，主要参加单位包括国标（北京）检验认证有限公司、北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）、深圳市德方纳米科技股份有限公司、中国计量大学、北京粉体技术协会等。对于标准中的重要技术内容，如实验步骤、不同多相体系样品的制备方法、图像获取方式、图像分析、数据处理等均进行了实验验证，确定了标准中相关技术的操作可行性。四、适用范围本文件适用于固相多相体系中纳米颗粒的粒径测量和粒径分布。胶体和生物组织中的纳米颗粒，只要样品制备满足透射电子显微镜观察的要求，也适用本文件。 五、主要内容本标准描述了利用透射电子显微镜图像处理和分析技术进行纳米颗粒在多相体系中分散的粒径测量方法的全流程，包含了标准所涉及的术语和定义，TEM的成像原理，不同类型样品的制备方法，详尽的实验步骤，结果表示以及测量不确定度的来源，并在附录中针对不同的样品类型给出了实用案例。术语及定义：即包括了纳米颗粒、分散的术语定义，还包括了TEM中明场相、暗场像、扫描透射电子显微图像和高角环形暗场像等几种成像方式的定义。一般原理：利用透射电镜图像评估纳米颗粒在多相体系中的粒径测量，主要基于透射电子显微镜中电子束穿透样品成像的原理，并对图像进行处理，通常需要借助粒径分析软件进行粒径测量，以避免人为因素的干扰。样品制备：纳米颗粒在多相体系中的分散，由于多相体系材料不同，样品制备方法不同，系统的介绍了纳米复合材料的制备、多相固态金属材料的制备以及多相生物材料的制备方法，这包含了超薄切片技术、离子减薄技术、生物染色技术等。实验步骤：包含了装样、仪器准备、图像获取的全过程。需要注意的是根据多相体系材料及其中纳米颗粒的种类和状态的不同，在测试过程中要明确选用明场、暗场、高角环形暗场等合适的成像技术，并保证有足够清晰度和对比度的透射图像，能够准确识别到图像中的纳米颗粒。除此之外，为了使拍摄所得的图像中包含有足够的样品数量进行粒径测量，需要在不同的位置多次拍摄。具体的过程，本标准在附录A中以镍基高温合金多相体系中纳米颗粒为例，给出了详细过程。粒径测量：多相体系中的纳米颗粒的透射电子显微镜图像通常存在背景亮度不均匀、分散相边界与图像背景灰度差小的特点，因此需要图像处理将样品图像从背景中区分出来。总体目标是将数字显微照片从灰度图像转化为由离散颗粒和背景组成的二值化图像。重点采用阈值算法进行单个颗粒的测量。同时，颗粒粒径测量时测量颗粒数量对测量不确定的影响较大，因此需要确认最少测量颗粒数，这也取决于实际的测量需求。在结果表示方面，实验室可以根据实际需求，只评价纳米颗粒粒径的大小，也可以以纳米颗粒的分布范围为评价目标。在标准的附录中给出了两种分布范围方式。不确定度：对多相体系中纳米颗粒的粒径测量的测量不确定度主要来源包含了样品均匀性、样品制备、图像处理和测量所需的颗粒数不足等。在上述基础上，给出了测量报告的信息及内容。本文作者：常怀秋 高级工程师；国家纳米科学中心 技术发展部Email：changhq@nanoctr.c