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蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性[~119829~][~119828~]
蝮蛇【英文名】Pallsas Pit Viper【别名】虺、土虺蛇、土锦、灰地匾、地扁蛇、土球子【来源】药材基源:为蝰科动物蝮蛇除去内脏的全体。拉丁植物动物矿物名:Agkistrodon halys (Pallas)采收和储藏:春夏间捕捉。捕得后剖腹除去内脏,盘成圆盘形,烘干。亦可鲜用。【原形态】蝮蛇,全长60cm左右。头略呈三角形,与颈区分明显,背面浅褐色到红褐色,正脊有两行深棕色圆斑,彼此交错排列略并列,背鳞外侧及腹鳞间有1行黑褐色不规则粗点,略呈星状;腹面灰白,密布棕褐色或黑褐色细点。鼻间鳞宽短,排成⊥形;眶前鳞2,眶后鳞2(3),眶璨来新月形,颞鳞2+4(3);上唇鳞2-1-4(2-1-3、3-1-4)式。背鳞21(23)-21-17(15)行,中段最外行平滑或均具棱;腹鳞137-173,肛鳞完整;尾下鳞29-54对,少数为单行。【生境分布】生态环境:生活于平原、丘陵及山地,活动于稻田、耕作区、草地以及住宅附近。以鱼、蛙、鸟、鼠等为食。资源分布:广泛分布于我国各地。【性状】性状鉴别,本品呈圆盘状,盘径6-8cm,头居中体背黑灰色,有的个体有圆形黑斑,背鳞起棱,多脱落。腹面可见剖除内及的沟槽,脱落的腹鳞长条形,半透明。尾部较短,长6-8cm。质坚韧,不易折断。气腥。骨骼特征:鼻骨前端较突出,躯干椎的棘突较低矮,基本不后倾,椎体不突尖端较平截,多数成长短不等的竖刀状,尾椎脉突侧面观亦成短竖刀状。显微鉴别(1)鳞片;呈长椭圆形,长径3.2-3.5mm,短很能够1.2-1.3mm,有背棱,端突2个,长径178-196μm,短径107-221μm。乳突长三角形、长条形或多角形。(2)扫描电镜观察:背鳞表面无突起,却有纵向树枝交错排列的纹理,其表面具网格状纹饰,端窝2个,其表面有网状纹饰,有背棱。【化学成份】蝮蛇全体含胆甾醇(cholesterol),牛磺酸(taurine),脂肪,脂质,挥发油等。其中脂肪酸类分以油酸(oleic acid),亚油酸(linoleic acid),花生四烯酸(arachidonic acid)等不饱和脂肪酸含一多,另见微量的奇数(碳)脂肪酸。脂质类成分以磷脂(phospholipid)和胆甾醇居多,内脏中以三酰甘油(triglyceride)和胆固醇居多。同时在蛇体及内脏中也发现有磷酸乙醇胺(phosphorylethanolamine),磷酸胆碱(choline phosphate),磷酸丝氨酸(phosphoserine),磷酸肌醇(phosphoinositide),神经鞘磷脂(sphingomyelin)等种种磷脂。蝮蛇肛门腺分泌物有胆甾醇,癸酸(decanoic acid),二十一(烷)酸(heneicosanoic acid),二十(烷)酸(eicosanoic acid),十八(烷)酸(octadecanoic acid),顺-9-十八烯酸(cis-9-octadecenoic acid),十七(烷)酸(heptadecanoic acid),十八(烷)酸(hexadecanoic acid)等。【药理作用】毒性:粗制蛇毒成分复杂,作用亦很复杂。一般认为,蝮蛇毒是以血循毒为主的血循、神经混合毒。被咬伤的病人除局部出现肿胀、疼痛外;由于神经毒,常发生畏寒、目糊、眼睑下垂、颈项牵引感,当然更重要的是引起呼吸困难如双吸气、屏气、点头状或鱼口样呼吸等。呼吸麻痹是早期死亡的主要原因。动物试验也证明蝮蛇毒具有明显的神经毒的作用。另一方面,蝮蛇毒具有显着的血循毒,单纯的人工呼吸并不能延长动物的生存时间。临床病人也常出现面色苍白、多汗、心率加速、四肢厥冷、血压下降等严重中毒性休克症状。虽然有人认为江苏蝮蛇毒主要也是神经毒(据他们观察呼吸麻痹是主要症状及致死原因),但一般仍认为血循毒是主要的。它能大量释放血管活性物质如组织胺、5-羟色胺及缓动素(Bradykinin)等,破坏红细胞,增加毛细血管通透性,使血浆及体液大量丧失,血容量不足。更加严重的是对心脏的直接损害,被咬伤的病人心电图有窦性心律不整、异位节律、P波变尖、R彼低电压、传导阻滞、S-T段下降、T波扁平或倒置等变化,联系到实验动物中毒死亡后的尸解情况--心肌出血、心肌纤维浊肿断裂,可以认为蝮蛇毒对心脏的毒性是循环衰竭引起死亡的主要原因。由于休克、溶血及对各脏器的直接损害(如肾等),可发生酸中毒、急性肾功能衰竭等。严重咬伤病人常出现酱油色尿以及尿中蛋白、管型、隐血均呈阳性等。防治感染也是非常重要的问题。竹叶青、龟花蛇毒亦为以血循毒为主的混合毒。一般局部症状较重,而全身症状较轻,如能及时正确抢救,死亡率较低。【炮制】蝮蛇霜:取蝮蛇煅烧存性,研成粉末。【性味】味甘;性温;有毒【归经】脾;肝经【功能主治】祛风;通络;止痛;解毒。主风湿痹痛;麻风;瘰疬;疮疖;疥癣;痔疾;肿瘤【用法用量】内服:浸酒,每条蝮蛇用60度白酒1000ml浸3个月,每次饮5-10ml,日饮1-2次;或烧存性研成细粉,每次0.5-1.5g,日服2次。外用:适量,油浸、酒渍或烧存性研末调敷。【注意】阴虚血亏都慎服,孕妇禁服。
老树发新枝——血凝抑制试验原始记录改版记为评估家禽免疫效果,基层(市级、县级)兽医实验室每年需要对大量的家禽血清样品开展禽流感和新城疫免疫抗体监测,经常开展的项目有禽流感H5Re-6、H5Re-7、H7N9、ND等,一般县级实验室每年检测量为3000+份次,市级实验室每年检测量更是高达20000+份次。如何填写血凝抑制试验原始记录成为一个非常头痛的问题。一、实验过程简介http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015093020101837_01_1627156_3.jpg从整个检测过程看,只需要80min即可完成实验。但由于样品量大,一般每次检测120份样品×4个项目=480项次,加样、稀释、振荡等耗时较多,一般早上开始实验,判定结果均需要到下午4时以后。二、原来的表格格式及存在的问题原来的原始记录格式如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015093020103893_01_1627156_3.jpg该原始记录表信息较全面,但存在以下几个问题:一是不能真实反映实验结果,记录的是经实验人员观察并进行判断后的凝集程度,而且容易篡改;二是数据记录量非常大,每个检测需要记录12孔的反应程度,每个孔填写“-”、“+”、“++”、“+++”或“++++”。按照每孔填写4划计算,每个检测需50划才能完成填写,全年3000+份次检测量,需填写15W+划以上;三是大量原始记录事后誊写而非实时记录。每次实验一般检测120份样品(即480个检测),实验结束已经接近下午下班。如果如实在原始记录上填写,加班3小时也无法完成记录工作。于是经常出现不规范的操作:或者只记录一个结果,每个孔的凝集程度事后估摸着填写;或者非常潦草地在草稿上记录,然后誊写到原始记录上。种种做法均不符合资质认定及考核的要求;四是检测过程中部分信息仍然不全,如抗原的实际用量。三、原始记录格式的改进针对上述问题,对原始记录格式及记录方法作了较大改动,具体内容如下:1.将常用的4个检测项目放在一张原始记录表上;2.增加检测过程的记录,尽量达到“通过原始记录可以复原实验”的目的;3.删除原先工作量最大的每个样品12孔的凝集程度的记录;4.事先能确定的信息,通过电脑打印;事先不能确定的信息,通过手写记录;5.增加拍照环节,在进行判定结果的同时,对反应板进行拍照,并将照片作为原始记录的一部分。通过上述改动,判定结果时只需记录一个结果,外加拍一张照片即可,基本可以做到实时记录。忙时可以两人同时操作,一个记录一个拍照,绝对搞定。改版后的原始记录如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568857_1627156_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568858_1627156_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509302012_568859_1627156_3.jpg虽然根据有关要求对原始记录进行了改进,但肯定还存在着很多不妥之处,希望各位批评指正!