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大家好: 我在做食品中呋喃妥因代谢物时,不知道什么原因,所有的样品都检出,标准品也不成线性,回收率很高有时能达到好几百,请问呋喃妥因代谢物检测过程中有什么因素可以影响?谢谢指点。(我用的是Thermo的TSQ Quantum [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url])
各位大侠求助啦 本人最近在做硝基呋喃代谢物,发现标准品不能溶解。不知道各位大侠都用什么溶的,甲醇乙腈都用过就是很难溶啊。。。。。。。还有最后这四种代谢物打出来的母离子都是一样的,这是什么问题啊? 跪 求各位大侠
原理:样品经盐酸水解,用2-硝基苯甲醛过夜衍生,调pH值7.1-7.5后,用乙酸乙酯提取,液相色谱-串联质谱检测,内标法定量。具体分析步骤如下:[b]1[/b] 试样的制备,水解和衍生化称取2.5g(粉体样品减半,精确至0.01g)制备的样品(鱼虾等取可食部分按标准要求取样),置于50mL塑料具塞离心管中,加入10mL 0.2mol/L盐酸溶液,用匀质机高速匀质1min,再依次加入200µ L 10ng/mL 内标标准液, 0.05mol/L的2-硝基苯甲醛衍生剂甲醇溶液400µ L,振摇1min,置于37°C,120rpm的恒温摇床中保持16小时。[b]1.2[/b]提取,净化和溶解[color=black]将上述衍生溶液取出放置至室温,加入5mL 0.2mol/L磷酸氢二钾溶液,振摇2min。用1mol/L氢氧化钠溶液,0.2mol/L盐酸溶液调节pH约7.1-7.5, (pH计调节,用水清洗电极于离心管中,控制体积不超过20mL)。5000转/min离心10min,取上清液于另一50m[/color]L[color=black]带盖塑料离心管中。加20mL乙酸乙酯, 振摇10分钟, 5000r/min离心5min,吸取上层乙酸乙酯溶液于另一带盖塑料离心管中;残渣中加20mL乙酸乙酯重新提取一次,合并乙酸乙酯层,提取液于 38°C用氮吹仪吹干,加入1.0mL20%甲醇水溶液,涡旋1min,过0.22µ m滤膜待进样。[/color][b]1.3 [/b]方法空白除不加样品外,其余步骤同上。[b]1.4 [/b]标准曲线和QC[b]1.4.1[/b]标准曲线:取5个50mL塑料具塞离心管,分别加入10μL,20μL,40μL,100μL,200μL硝基呋喃代谢物的标准溶液(50ng/mL),除不加样品外,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为0.5ng/mL, 1.0ng/mL, 2.0ng/mL, 5.0ng/mL, 10.0ng/mL。内标浓度为2.0ng/mL。[b]1.4.2 [/b]QC点:取1个50mL塑料具塞离心管,加入100μL 20 ng/mL的QC混合标准溶液,内标浓度为2.0ng/mL。除不加样品外,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为2.0ng/mL。[b]1.5 [/b]加标试验称取2.5g(粉体样品减半,精确至0.01g)样品,置于50 mL塑料具塞离心管中,加入40μL 50ng/mL标准溶液,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为2.0ng/mL。[b]1.6 [/b]仪器参数条件可参考GB/T 21311-2007。[b]1.7 [/b]定量计算 结果计算公式为 : [i]X[/i] = c • V / m式中:X---试样中被测组分残留量,单位为(µ g/kg);C---从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度,机读数,单位为(µ g /L) V---样品溶液定容体积,单位为(mL);M---试样的质量,单位为(g);注:计算结果需要将空白值扣除。[b]1.8[/b] 方法检测限水产品及肉类基质:呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ): 0.2µ g/kg;呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ): 0.2µ g/kg;呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD) : 0.2µ g/kg;呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM):0.5µ g/kg。基质干扰较大的粉类基质,方法检测限为: 呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ): 0.5µ g/kg;呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ): 0.5µ g/kg;呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD) : 0.5µ g/kg;呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM):1.0µ g/kg。[b]1.9 [/b]质量控制[b]1.9.1[/b]每次试验做一个方法空白,方法空白0.1ng/mL, 仪器最多间隔20针进1针方法空白.[b]1.9.2 [/b]标准曲线的回归系数大于等于0.995.[b]1.9.3[/b] QC点的浓度为2.0 ng/mL, 回收率应在80%-120%,仪器最多间隔20针进1针QC.[b]1.9.4 [/b]样品加标试验的回收率在70%-130%。[b]1.9.5 [/b]超过MDL的样品,进行双样定量分析, 相对百分比差值小于20%。[b]1.9.6 [/b]每次实验的同类基质至少做一个平行样.[b]1.10 [/b]注意事项[b]1.10.1[/b]对于含油较多的样品,在净化氮气吹干后,用2mL乙腈溶解,加2mL用乙腈饱和的正己烷去油,弃去上层正己烷,氮气38℃吹干, 加入1.0mL [color=black]20%[/color]甲醇溶液,涡旋1min,过0.22µ m滤膜待进样。[b]1.10.2 [u]对于动物肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣样品GB/T 21311-2007要求称取样品后加入10 mL 50%甲醇水溶液,振荡10 min后,以4000r/min离心5min,弃去液体,残留物加入10[/u][/b][u] [/u][b][u]mL 0.2mol/L盐酸溶液,之后步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。个人认为若样品测定值为阳性,经此步骤处理后结果会减小甚至变为阴性,建议可参考FDA的方法,省去(加入10 mL 50%甲醇水溶液)水洗步骤,更能客观反映样品真实含量。 温馨提示:夏天大家都喜欢吃小龙虾配冰镇啤酒,经检测发现虾类中硝基呋喃代谢物检出率非常高,希望大家最好不要经常吃,偶尔吃一次还是可以滴![/u][/b]