小鼠颅顶前骨细胞亚克隆

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  • 平板细胞克隆形成试验

    概念：细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

  • 克隆形成实验及划痕实验、流式细胞术操作步骤

    [size=16px]克隆形成实验[/size][size=16px]及划痕实验[/size][size=16px]、[/size][size=16px]流式细胞术[/size][size=16px]操作步骤[/size]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力软琼脂克隆形成实验适用于悬浮生长的细胞。1. 配胶液：用蒸馏水和琼脂糖粉配制浓度为 0.3% 的琼脂糖液，高压灭菌，置于42℃ 水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。2. 配制含 20% FBS 的 2×1640 培养基，用 0.22 ?m 的滤器过滤除菌。3. 铺下层胶：将 0.6% 的琼脂糖胶液与 2×1640 培养基等体积混合，以每孔 1.5mL 加至 6 孔板中，室温等其凝固。4. 细胞计数：将细胞用 PBS 洗一遍，离心，加入新的培养基混匀稀释，计数。H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 均以 1×104/孔铺入 6 孔板。5. 铺上层胶：将 0.3% 的琼脂糖胶液与 2× 培养基 1：1 混合，加入 100 μL 细胞悬液，混匀后，每孔加入 1.5 mL 混合液。6. 放入 37℃，5%CO2 培养箱培养，约 2-3 周后终止培养。7. 比较细胞克隆形成能力的差异，利用 Graphpad prism5 作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。平板克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力平板克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞。1. 细胞处理：将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞，用 PBS洗一遍，用胰酶消化并计数。2. 接种细胞： 将细胞接种于 6 孔板中， SW1271-NC 、SW1271-shMSI1-1 、SW1271-shMSI1-2 接种密度为 3×103/孔，注意一定让细胞均匀分布。于 37℃，隔离CO2 静置培养 2-3 周（终止培养时间以不小于 2 周且克隆之间不发生融合为标准）。3. 出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去旧培养基， 用 PBS 清洗 2 次，用 4% 多聚甲醛固定液固定 20 min，吸除固定液，用蒸馏水清洗 2 次后加适量结晶紫染色15-20 min，用蒸馏水洗去结晶紫，自然风干，用扫描仪扫描成图片。4. 在低倍镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。5. 计算克隆形成率。细胞划痕实验1. 用记号笔在 12 孔板底部划两条平行线做为标记。2. 将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞接种至 6 孔板。3. 待细胞汇合度为 90% 左右时，用 10μL 枪头垂直于两条平行标记线进行划痕。4. 吸除培养基，1xPBS 漂洗 2 次，并换用无血清培养基培养。5. 分别在划痕后培养 0h，12h，24h，48h，72h 观察细胞迁移情况并拍照。流式细胞术1. 收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞(包括培养上清中的细胞)，收集 1 - 10 ×105 个细胞，用预冷 PBS 离心洗涤。用双蒸水稀释 5 ×Binding Buffer为 1 × 工作液，取 500 μl 1 × Binding Buffer 重悬细胞。2. 每管加入 5 μl Annexin V-APC 和 10 μl 7-AAD。3. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 5 分钟。4. 上机进行分析。

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  • “中中”和“华华”来了！世界首例体细胞克隆猴诞生记
    p 　　拔根汗毛，吹口气，就能变出一大堆小猴子。如今，“齐天大圣”孙悟空的这项绝活，真的成为了现实。 /p p 　　最近，在中国科学院神经科学研究所非人灵长类研究平台出生的两个猕猴宝宝“萌”化了所有人，它们时而一起嬉笑打闹，时而依偎着自己心爱的“Hello Kitty”毛绒玩具，时而瞪着大大的眼睛，好奇地望着这个世界。 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201801/noimg/7696dbb3-c7ab-4fc7-bc3d-a18b33961f3c.jpg" title=" 中华.jpg" / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(0, 112, 192) " “中中”和“华华” /span /p p 　　这两个小猴子的“父母”，是中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越中心研究团队。经过五年不懈努力，他们在国际上首次实现了非人灵长类动物的体细胞克隆。1月25日在线出版的《细胞》杂志以封面文章形式发表了这项成果。 /p p 　　这两只名叫“中中”和“华华”的小家伙，也在一夜之间，成为世界上最珍贵的一对小猕猴。 /p p 　 strong 　克隆猴为何这么难? /strong /p p 　　自从1997年“多莉羊”体细胞克隆成功后，人类就打开了一扇新的窗户。 /p p 　　20年间，许多哺乳类动物的体细胞克隆相继获得成功，不仅诞生出马、牛、羊、猪和骆驼等大型家畜，还诞生了小鼠、大鼠、兔、猫等多种实验动物。 /p p 　　然而，与人类最为相近的非人灵长类动物的体细胞克隆，却一直没有得到解决，成为世界性难题。美国、中国、德国、日本、新加坡和韩国等多家科研机构在此方面进行不断探索和尝试，但始终未能成功。 /p p 　　“一个主要的限制因素，是供体细胞核在受体卵母细胞中的不完全重编程，导致胚胎发育率低。”文章通讯作者、中科院神经科学研究所非人灵长类研究平台主任孙强说，“另外，非人灵长类动物胚胎的操作技术不完善，这些都影响了实验的成功。” /p p 　　胚胎操作的一个必要步骤是给卵母细胞去核。但与其他动物不同的是，猴子的卵母细胞不透明，因此去核操作非常困难。 /p p 　　科研人员想出了使用偏振光的方式来给细胞“打光”，但为了尽可能减少对细胞的影响，操作必须在极短时间内完成。 /p p 　　为此，文章第一作者、中科院神经科学研究所非人灵长类研究平台博士后刘真花了大量的时间，去训练这项技术，最终实现了在10秒内精准完成体细胞核移植的显微操作。 /p p 　　同时，科研人员不断尝试各种实验方法，通过表观遗传修饰促进体细胞核重编程，显著提高了体细胞克隆胚胎的囊胚质量和代孕猴的怀孕率。 /p p 　　2017年11月27日，世界上首个体细胞克隆猴“中中”在中科院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心非人灵长类平台诞生 12月5日，“中中”的妹妹“华华”也顺利诞生。 /p p 　　 strong 真正有用的动物模型 /strong /p p 　　体细胞克隆猴是在中科院战略性先导科技专项“脑功能联结图谱与类脑智能研究”的支持下，完全由中科院团队独立完成的国际重大突破。 /p p 　　“这个成果真正实现了生命科学领域的弯道超车，意义重大。”中科院院长白春礼评价称，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代，实现了我国在非人灵长类研究领域由国际“并跑”到“领跑”的转变。 /p p 　　体细胞克隆猴的成功，为动物模型家族再添“新成员”。 /p p 　　当前，药物研发通用的动物模型是小鼠。但小鼠与人类相差甚远，药物研发人员在小鼠模型上花费了巨大资源，但筛选到的候选药物用在病人身上，却大都无效，或有不可接受的副作用，这使得诸如阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病，以及免疫缺陷、肿瘤、代谢性疾病等不能得到有效治疗。 /p p 　　这让非人灵长类动物模型成为生命科学研究和人类疾病研究的急需。 /p p 　　因此，除了基础研究上的重大意义外，利用体细胞克隆技术制作脑疾病模型猴，为人类社会面临的重大脑疾病的机理研究、干预、诊治带来了前所未有的光明前景。 /p p 　　“这项成果使猕猴有望成为真正有用的动物模型。”中科院院士、美国科学院院士、中科院神经科学研究所所长、脑智卓越中心主任蒲慕明说。 /p p 　　白春礼也相信，体细胞克隆猴的成功，以及未来基于体细胞克隆猴的疾病模型的创建，将有效缩短药物研发周期，提高药物研发成功率，使我国率先发展出基于非人灵长类疾病动物模型的全新医药研发产业链，有力推动我国新药创制与研发，助力“健康中国2030”目标实现。 /p p 　　 strong 伦理问题?不存在的! /strong /p p 　　两只小猴子目前正在实验室里健康活泼地生活着，但人们的疑问也随之而来：克隆猴出来了，克隆人还会远吗? /p p 　　对于这个公众高度关切的问题，蒲慕明明确表示，中科院做这项工作的目的，不是为了克隆人，而是为了提高人类健康、研究脑科学基本问题服务的。 /p p 　　相反，这项工作还可能使一些伦理争议得到化解。 /p p 　　目前，中国每年出口数万只猕猴，主要用于药物筛选。在蒲慕明看来，这么大批量的动物实验，在伦理方面是有问题的。“我们做这项工作，就是要解决这一伦理问题。” /p p 　　有了体细胞克隆猴技术，人们就能使用体细胞在体外有效地做基因编辑，准确地筛选基因型相同的体细胞，产生基因型完全相同的大批胚胎，用母猴载体怀孕出生一批基因编辑和遗传背景相同的猴群。 /p p 　　也就是说，中科院神经科学研究所的这项技术，让人们在一年内就能制备大批遗传背景相同的模型猴，大大减少了个体差异对实验的干扰。这样，只要使用很少数量的克隆猴，就能够完成很有效的筛选。 /p p 　　“任何科学发现都是双刃剑，既有可能带来巨大的进步，也有可能造成一系列危机，核能、基因编辑都是典型的例子。”在蒲慕明看来，生命科学的伦理问题不仅仅是科学家需要注意的，更需要政府部门以及整个社会大众共同参与，通过立规、立法等方式，来约束人们的行为，做出正确的决策。 /p p 　　“对新技术，我们要重视，但不要害怕。”他最后补充说。 /p
    时间： 2018-01-25
    作者： Yanan
  • 肿瘤干细胞克隆的高内涵筛选应用
    肿瘤干细胞（CSC）除了具有高度致瘤性、无限的增殖潜力和产生恶性肿瘤的能力外，还在肿瘤转移和治疗后原发肿瘤的再增殖中发挥作用，更可以抵抗传统的化疗以及更现代的靶向治疗，CSC的这些特性使得开发治疗恶性肿瘤的有效疗法变得复杂。克隆形成试验作为CSC功能研究的一个标准，通过检测CSC形成克隆的能力，既可以评估其干性，也可以对后续的放化疗进行个性化的用药指导，但是目前对CSC的克隆表征进行高通量筛选还存在，考虑到CSC的复杂性及其临床相关性，需要有更高效的方法来对CSC的克隆表征进行高通量筛选分析，并在此基础并开发更有效地针对这些人群的药物或其他疗法。Advanced High-Content-Screening Applications of Clonogenicity in Cancer一文就提出了一种运用高内涵系统来量化2D和3D细胞培养模型中CSC克隆数量、大小和形态，并基于荧光标记区分克隆的高通量方法。图一：2D培养模式下用化合物61预处理的SW620细胞克隆图像，全实验组克隆计数、平均表面积和全孔融合率定量分析在2D培养模式中，使用极限稀释法将SW620结直肠癌细胞从2500个细胞/孔稀释至1个细胞/孔，并配合不同化合物处理，在培养的第8天对细胞进行核染色。结合明场与Hoechst 33342染色图像，对细胞形成的克隆数量、面积和融合度进行了分析，数据显示SW620细胞的克隆形成对TOP2A抑制剂（化合物61）的处理呈现出浓度依赖性反应，并且不同处理方式（预处理VS.连续处理）克隆的生长情况也有所不同。图二：3D培养模式中SW620细胞克隆的计数和形态学分析在3D培养模式中，采用同样的方法对SW620细胞（混于基质胶中）进行稀释，从40000个细胞/400μl稀释至约1248个细胞/200μl，并以50μl/孔接种于96孔培养板中，培养到第7-10天时同样对细胞进行核染色（Hoechst 33342）并使用高内涵系统对样品进行3D成像和分析，结果显示与2500个细胞相比，在5000个铺板细胞上观察到的克隆数量增加了一倍以上，而克隆表面积和体积则保持相对一致。图三：3D培养模式中A549细胞克隆的形态学分析为了评估这一体系在不同种类、不同形态的肿瘤细胞中的适用性，研究中还用A549肺癌细胞进行了验证，形态学进行分析发现A549细胞球长成了两种不同典型形态的克隆—“圆形”、“分支”，随后用高内涵分析软件对这两种细胞球的体积、表面积、椭球轴（长度、短轴与长轴之比、中轴长度、最短轴长度、倾斜度和方向）、球度和最大厚度等形态学参数进行定量，这些结果表明A549细胞可能含有两种不同的CSC亚群。图四：2D培养SW620克隆中CD44和CD24的免疫荧光染而对CSCs的细胞表面标志物（高CD44 ，低CD24）进行图像分析后发现，CD24表达在所有细胞接种浓度下不变，CD44表达随着细胞数量的减少而增加，CD44high/CD24low在细胞中的表达与其干细胞潜能一致。对比只分析膜区域的荧光强度和全细胞区域分析的结果其表达趋势是相似的。本文中介绍的工作概述了克隆形成集落的2D和3D分析的方法、算法和工作流程，可广泛适用于其他HCS仪器和成像分割软件。这些高内涵技术可用于研究促进CSC干性的复杂机制，但也可广泛用于其他药物的发现，以及评估小分子药物、生物制剂和放射治疗的治疗潜力。高内涵系统的智能预扫功能允许灵活地执行初始低倍镜大范围扫描以定位感兴趣的克隆，并自动以更高的放大倍数仅对所需克隆的XYZ位置进行重新扫描。在大量样本中定位研究人员感兴趣的特殊对象大大减少了使用整个成像过程所需的时间。参考文献Esquer H , Zhou Q , Abraham A D , et al. Advanced High-Content-Screening Applications of Clonogenicity in Cancer[J]. SLAS DISCOVERY Advancing the Science of Drug Discovery, 2020
    时间： 2021-09-18
    作者： PerkinElmer
  • 比格犬软骨细胞的运输与保存及使用方法！
    比格犬软骨细胞的运输与保存及使用方法！ 一、细胞简介平台编号：Bio-53547规格：1×10⁶ Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞细胞名称：比格犬软骨细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述软骨细胞存在于关节软骨中，负责分泌II型胶原和其它类型的胶原以及非胶原的细胞外基质大分子。成软骨细胞的增殖和分化与脊椎动物骨架的发育有着密切的关系。软骨细胞能分泌和响应一系列的生长因子，包括IGF-1和IL1。体外培养的软骨细胞是研究软骨修复和关节炎病理的有用模型。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的关节组织。2)细胞鉴定：Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！
    时间： 2023-08-11
    作者： 百欧博伟生物
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  • 多功能全自动细胞克隆分析及分离系统 400-805-0826
    多功能全自动细胞克隆分析及分离系统CellCelector Flex 将高内涵成像系统，高精度全自动细胞挑取机械臂和强大的成像处理分析软件相结合，可对单细胞、细胞团、球体、类器官、单细胞克隆以及贴壁细胞进行全自动检测、筛选、挑取和分离。挑取技术：已经获得专利的挑取技术支持极快的细胞扫描和挑取，从而快速分离细胞。温和地进行细胞转移，保证高度的细胞完整性和生长速率。对于一些应用，如单细胞克隆，可以实现高达 100% 的挑取/转移效率。CellCelector Flex关键特征多功能 &bull 适用于贴壁细胞、悬浮细胞或半固体培养基中的细胞 &bull 单细胞、细胞团、球体或菌落 &bull 原代细胞或细胞系 &bull 活细胞或固定细胞灵活 &bull 明场、相差和荧光成像 &bull 自动、半自动或手动细胞筛选，以供挑取分离 &bull 兼容标准或定制源容器和目标容器，如微孔板、培养皿、载玻片、过滤器、芯片、PCR板或管&bull 可升级的定制解决方案，可整合至大平台可靠 &bull 对特定细胞亚群超过95%的挑取准确性 &bull 对移动的检查对象进行自动重新定位 &bull 如果挑取失败，可重新挑取 &bull 软件自动检测是否成功挑取温和挑取 &bull 不影响细胞特性 &bull 可分离准备用于分子表征或下游培养的纯完整细胞 &bull 挑取后的细胞完整性和存活率高（包括单细胞克隆应用中高达95%及以上的存活率）快速 &bull 实验操作时间短 &bull 每次挑取仅20至30秒上游|下游兼容 &bull 无需复杂的样本制备，无需昂贵的耗材 &bull 与多个上游富集技术（免疫磁珠富集、基于尺寸的分离等）兼容 &bull 抽吸和点样体积小（降至约1 nL） &bull 单细胞PCR、NGS、RNA-Seq、细胞克隆、滴度分析、放大工艺等记录 &bull 符合GLP和GMP标准的完整工作流程记录 &bull 通过在每次挑取事件前后拍摄的实时、高质量图像进行质量控制 &bull 每一个被检测/捕获的对象都可以通过其唯一的ID进行识别，并可以在整个过程中从源板到终板进行完整的追踪，方便导出所有捕获的图像和数据 CellCelector Flex 关键应用单细胞分离&bull 稀有单细胞分离&bull 循环肿瘤细胞CTCs分析和分离&bull 胎儿细胞cbNIPT&bull 精子细胞分离&bull 原生质体/植物细胞&bull 单细胞异质性分析&bull CRISPR单细胞克隆细胞系开发&bull 用于细胞系开发的单细胞克隆 &bull mini Pool建立及筛选 &bull 从半固体培养基中进行菌落挑取及转移抗体发现&bull 单B细胞筛选 &bull 基于纳米孔的杂交瘤筛选 &bull 来自半固体培养基的杂交瘤克隆的筛选和挑取 &bull 杂交瘤亚克隆 &bull 基于微球的检测干细胞&bull iPS单细胞克隆 &bull 干细胞克隆挑取 &bull 造血干细胞克隆挑取 &bull 球体分离 CellCelector Flex 挑头我们根据CellCelector Flex 在不同领域的应用提供多种挑头。针对特定的细胞类型和挑取捕获模块对所有毛细管和挑头进行了优化，以保证温和、精准地挑取挑取细胞、细胞团以及克隆，整个过程无污染。CellCelector Flex 纳米孔板CellCelector Flex 纳米孔板含有十万到数百万个纳米孔，将细胞悬液接种后，数万个纳米孔有效地将细胞隔离开来，并确保共培养环境以促进单克隆生长。有效替代有限稀释法，FACS。&bull 高通量：每孔可获得400-600个单细胞（相当于有限稀释法25块96孔板！）&bull 高效节约：避免重复稀释，单次试验即可获得单克隆性、活力且高产的克隆&bull 100%单克隆性：自动图像鉴别单细胞并跟踪其生长到克隆，避免交叉污染&bull 单细胞活率超95%，无需昂贵外源生长因子CellCelector 机柜当处理活细胞时，无菌条件和经过调节的生理相关环境是关键因素。FlowBox 孵育箱可提供以下独特组合： &bull 经过HEPA过滤的垂直层流 &bull 对温度、湿度和CO2水平的精确控制 &bull 即使在检修门打开时，也能智能控制风速和排气量 &bull 高能紫外线灯，用于表面灭菌 &bull 源板和终板的最优细胞存活率 &bull 用户友好型控制面板 &bull 在不失去受控条件的情况下，充分方便地接触放置在里面的仪器和实验装置
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    厂商： 德国赛多利斯集团
    品牌： 赛多利斯/SARTORIUS
    型号： CellCelector Flex
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    Cellvento 4CHO-C克隆培养基是一种化学成分限定、无动物成分的培养基，开发用于单细胞克隆（SCC）和中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系的稳定细胞库筛选和恢复。这款升级版培养基支持CHO和CHOZN细胞株开发，可用于替代CHOZN技术指南中的EX-CELL CHO克隆培养基。它为从细胞株开发到生产规模的整个工艺提供了化学成分限定的培养基解决方案。该配方设计不含水解产物或其他未知成分，具有卓越的性能和批间一致性。该培养基含有次黄嘌呤和胸苷（HT），但为了提高筛选灵活性，它不含L-谷氨酰胺、甲硫氨酸亚砜亚胺（MSX）或甲氨喋呤（MTX）。更多信息，e.g., 培养方案，贮存，表现性能，订购信息等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： 默克/Merck
    型号： 生长培养基 - Cellvento&reg 4CHO-C
    价格： 面议
  • 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 400-809-9706
    高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 全自动的筛选流程可以在更短时间内筛选更多克隆。经过已有用户证明，可以显著提高筛选效率、克隆产量，并节省时间和成本。主要特性：1.更短时间筛选更多克隆2.优质图像结合智能化分析软件3.准确、自动化克隆挑选，避免有限稀释,4.增加生物治疗药物细胞系的产量 创新的筛选流程更少时间筛选更多克隆：缩短细胞系和抗体开发时间： 挑取表达水平更优的细胞克隆：1.使用半固体培养基培养细胞，获得独立的单个细胞克隆2.高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以快速筛选上万个克隆 - 大大增加找到更优克隆的概率 - 白光成像用于识别克隆位置 - 荧光成像用于定量表达水平3.多种检测方法可选 - 不用标记，直接检测杂交瘤分泌的 IgG 或抗原特异性 MAbs - 检测加入标记的重组蛋白或表达的荧光标记蛋白4.客观的成像分析，使用户可以准确筛选到更优表达水平的克隆，并尽可能早的排除表达水平低的干扰克隆5.根据克隆表达水平自动排序，并准确、自动化挑取克隆，避免有限稀释的繁琐和出错几率。 满足药品监管的要求：针对人 IgG 的项目，使用不含动物源成份的试剂：CloneMedia，CloneMatrix，Recombinant CloneDetect 以及 XP media。确保形成独立的单克隆：使用 CloneMedia 半固体培养基培养细胞，有利于增加铺板效率和形成独立单个克隆，有利于克隆识别和挑取。1.基于多种基础培养基，针对 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 的应用进行专门优化2.适用于多种细胞，经过优化和验证的专用培养基可选：Per.C6，CHO-s，CHO DG44，HEK，CHOK1SV，杂交瘤以及骨髓瘤细胞等3.有标准成份，无动物源成份以及无谷氨酰胺成份等多种培养基可选,4.使用 CloneMatrix 甲基纤维素浓缩液，用户自己配制特殊用途培养基CloneMedia 培养基获得的克隆，使用 CloneSelect Imager 成像不同于传统的培养方法，半固体培养基的细胞铺板密度更高，并且可以保证形成独立的单个克隆，有利于下一步单克隆的挑取。一个成熟的培养方法使用半固体培养基培养细胞形成克隆，这种方法已经非常完善：“EASIER TO PLATE OUT LARGE NUMBERS OF CELLS AND TO RECOVER MANY INDEPENDENT HYBRIDOMA CLONES”A simple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas for the production of monoclonal antibodies (J. Immun. Methods (1982) 50, 161-171)目标蛋白检测：使用基于荧光的方法检测分泌蛋白荧光耦联的 CloneDetect 检测试剂可以原位检测分泌表达的人、小鼠以及大鼠抗体。因为克隆本身不需要产生荧光，所以不需要对目标蛋白加入额外荧光标记分子。1.根据实验检测要求以及表达蛋白类型，选择合适的检测试剂，比如 FITC 标记抗人检测试剂2.加入液体检测试剂到半固体培养基3.高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 对克隆进行成像、分析并根据所有克隆的荧光信号水平进行排序 检测方法的选择检测分泌 IgG 的单克隆抗体 高质量成像，智能化分析：成像1.白光和荧光成像可以用于计算克隆的大小以及荧光强度（代表目标蛋白的表达量）。 数据显示：1.软件根据克隆的荧光强度、大小等物理参数对克隆自动进行排序，得到所有克隆的 2D 柱状图表。2.克隆的筛选和选取主要依据以下参数：- 大小，边缘圆度以及克隆距离- 根据荧光强度排序- 用户可以通过软件中设置“proximity”的值，去掉距离太近的克隆 数据追踪：1.软件自动将所有克隆的统计信息排列成表，可以随时导出想要克隆的信息2.软件按照用户自定义的顺序挑取克隆到 96 孔板，并自动记录克隆来源、位置信息以及荧光强度等统计学参数 克隆挑取和转移：1.用户可以根据成像数据和统计分析的结果自定义最终要挑取的克隆数目和挑取顺序2.系统自动选择用户自定义的克隆，并将每个克隆转移到 96 孔目标微孔板，用于培养后进一步分析或克隆扩大培养3.XP Medi a CHO Growth A 是针对 CloneMedi a CHO Growth A 半固体培养基专门优化，适用于挑取克隆进一步放大培养的液体培养基，可以获得更好的挑取后生长效果。 快速筛选特异性抗体克隆：高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以从融合后自动化筛选，一步找到目标杂交瘤克隆；是一个高效的自动化筛选方法。1.筛选更多克隆——发现更多的阳性克隆2.实验过程更加快速高效，e.g.7-10 天可以筛选到 100-500 个特异性杂交瘤克隆3.通过避免阳性克隆的丢失以及早期排除阴性克隆，大大节省下游工作时间和成本4.原位筛选抗原特异性或者分泌 IgG 杂交瘤——适用于多种类型抗原分子（从 160 KD 的复合体蛋白到 2.6 KD 的磷酸肽） 快速检测抗原特异性IgG克隆FITC 标记 60 KD 抗原 快速从退化克隆中筛选高产克隆一些杂交瘤细胞系在 MAb 的产量方面退化严重，或者分泌性比较差。已有用户使用 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 从退化的克隆中成功恢复了高产克隆株。 增加生物药物细胞系的产量高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 相比传统方法，可以在短时间内筛选更多的克隆，能够大大增加找到稀少的高产克隆的概率。通过下面的实例 (MedImmune LLC)，比较了传统的有限稀释和 高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 的有效性。 更短时间筛选更多克隆 原位荧光显示高产细胞株，早期排除不需要的克隆 在工艺进一步优化前即获得高产克隆 (NS/O: 4-5 g/L，CHO: 5-6 g/L)细胞系稳定性表达量不稳定是细胞系筛选早期阶段的主要问题。高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 可以直观分析克隆的稳定性。把筛选到的克隆铺到半固体培养基，4-7 天培养后，使用高通量细胞克隆筛选系统 ClonePix 2 进行成像分析，比较子代克隆和亲代克隆的表达量，验证克隆稳定性。也可以培养 7-14 天后，重新对亚克隆进行筛选。 经过两轮筛选之后稳定性细胞系数据
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    厂商： 美谷分子仪器（上海）有限公司
    品牌： 美谷分子/Molecular Devices
    型号： ClonePix 2
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