全麦粉中呕吐毒素成分分析

文/武风娟 华测检测[color=black]近几年在食品药品监管部门组织的食品安全监督抽检中，发现个别小麦粉产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（[/color][color=black]DON[/color][color=black]，也称呕吐毒素）超过食品安全国家标准限量值。何为呕吐毒素？被呕吐毒素污染的食品可以吃吗？吃了会中毒吗？呕吐毒素污染的原因是什么？有哪些健康风险？如何防控？[/color][b][color=black]何为呕吐毒素？[/color][/b][color=black]脱氧雪腐镰刀菌烯醇[/color][color=black](deoxynivalenol[/color][color=black]，[/color][color=black]DON)[/color][color=black]，属单端孢霉烯族化合物，是禾谷镰刀菌、雪腐镰刀菌、燕麦镰刀菌和串珠镰刀菌等镰刀菌属的菌种引起的谷物赤霉病的重要指示性毒素，因易引起猪的呕吐，又称为呕吐毒素（[/color][color=black]Vomitoxin[/color][color=black]）。它是一种全球性的污染谷物的霉菌毒素之一，广泛分布在粮谷类农作物中，在大麦、小麦、燕麦和玉米中含量较高，在水稻、高粱、黑麦中含量较低，呕吐毒素也可通过饲料进入动物体内而导致肉制品被污染。上世纪[/color][color=black]70[/color][color=black]年代初日本的[/color][color=black]Yoshizawa[/color][color=black]和[/color][color=black]Morooka[/color][color=black]等首次分离了这种真菌毒素，阐明了其结构，并将其命名为[/color][color=black]4-deoxyni-valenol (DON)[/color][color=black]。这类毒素化学性质非常稳定，耐热、耐压、耐弱酸、耐储藏，在加工、储存及烹调过程中不能破坏其结构，加碱或高压处理才可破坏部分毒素，对人类健康造成很大威胁。目前已经被联合国粮农组织和世界卫生组织确定为最危险的自然发生食品污染物。[/color][b][color=black]谷物中呕吐毒素污染广泛存在[/color][/b][color=black]谷物呕吐毒素污染全球范围内易多发，主要原因是谷物在田间受到禾谷镰刀菌等真菌侵染，导致小麦发生赤霉病和玉米穗腐病，在适宜的气温和湿度等条件下繁殖并产毒，严重污染小麦、玉米等粮食及其制品。该毒素在谷物储藏期间，由于未经充分干燥或不当储存，也可能产生，目前在世界范围都难以做到根本防治。[/color][color=black]谷物赤霉病主要分布在潮湿的温带地区，我国大部分地区又恰恰处于这一地区，这是我国呕吐毒素污染较为严重的原因之一，在长江、淮河、黄河流域呈多发态势，多雨年份呕吐毒素的污染状况更为严重。[/color][b][color=black]呕吐毒素的危害[/color][/b][color=black]呕吐毒素，化学名称为[/color][color=black]3α,7α,15-[/color][color=black]三羟基[/color][color=black]-12,13-[/color][color=black]环氧单端孢霉[/color][color=black]-9[/color][color=black]烯[/color][color=black]-8[/color][color=black]酮，分子式为[/color][color=black]C[sub]15[/sub]H[sub]20[/sub]O[sub]6[/sub][/color][color=black]，相对分子质量为[/color][color=black]296.32[/color][color=black]，属[/color][color=black]B[/color][color=black]型单端抱霉烯族化合物，广泛分布于自然界，对人类和动物健康有极大危害。其[/color][color=black]12,13-[/color][color=black]环氧环为毒性基团，可与核糖体结合，造成核糖体毒性压力效应，激活多种蛋白激酶，调节基因表达，抑制蛋白合成并产生细胞毒性，对人和动物的免疫功能、繁殖功能产生明显的影响。[/color][align=left][img=,690,434]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011837206086_2066_3051334_3.jpg!w690x434.jpg[/img][/align][color=black]呕吐毒素[/color][color=black]DON[/color][color=black]通过污染的小麦、大麦、玉米等原料进入食品和饲料中，家禽食用污染的饲料后，使[/color][color=black]DON[/color][color=black]少量进入牛奶、肉和蛋中从而间接影响人类健康。低剂量[/color][color=black]DON[/color][color=black]可能引起动物的食欲下降、体重减轻、代谢紊乱等，大剂量可导致呕吐。人摄食被[/color][color=black]DON[/color][color=black]污染的谷物制成的食品后可能会引起厌食、呕吐、腹泻、头疼、头晕等以消化系统和神经系统为主要症状的真菌毒素中毒症，有的病人还有乏力、全身不适、颜面潮红，步伐不稳等似酒醉样症状（民间也称醉谷病），症状一般在[/color][color=black]2[/color][color=black]小时后可自行恢复。老人和幼童等特殊人群，或大剂量中毒者，症状会加重。国内外对[/color][color=black]DON[/color][color=black]致癌、致畸、致突变的毒性的研究结果不完全一致，但多数研究均表明[/color][color=black]DON[/color][color=black]具有致畸、胚胎毒性，可能是一种潜在的致癌物质，但国内外无其致癌作用的明显报道，因此其致癌作用尚无定论，但流行病学研究发现，[/color][color=black]DON[/color][color=black]的含量与食管癌的发生呈正相关。[/color][color=black]1993 [/color][color=black]年国际癌症研究机构（[/color][color=black]IARC[/color][color=black]）将呕吐毒素列入第[/color][color=black]3[/color][color=black]类，即尚不明确对人类是否有致癌作用，与咖啡因等同类。[/color][color=black]2001[/color][color=black]年联合国粮农组织[/color][color=black]/[/color][color=black]世界卫生组织（[/color][color=black]FAO/WHO[/color][color=black]）食品添加剂联合专家委员会（[/color][color=black]JECFA[/color][color=black]）第[/color][color=black]56[/color][color=black]次会议通过科学评估首次制定了呕吐毒素的暂定每日最大耐受摄入量（[/color][color=black]PMTDI[/color][color=black]）为[/color][color=black]1μg/kg b.w[/color][color=black]，即一个体重为[/color][color=black]60kg[/color][color=black]成年人的每日最大摄入量不超过[/color][color=black]60[/color][color=black]微克。进一步的代谢学研究发现呕吐毒素的乙酰基衍生物经代谢转化后可变成呕吐毒素，增加了总的[/color][color=black]DON[/color][color=black]毒性，在此基础上，[/color][color=black]2010[/color][color=black]年[/color][color=black]JECFA[/color][color=black]第[/color][color=black]72[/color][color=black]次会议将其[/color][color=black]PMTDI[/color][color=black]值变成组[/color][color=black]PMTDI[/color][color=black]值，包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇，脱氧雪腐镰刀菌烯醇的[/color][color=black]3-[/color][color=black]乙酰基衍生物和[/color][color=black]15-[/color][color=black]乙酰基衍生物，其值维持为[/color][color=black]1μg/kg b.w[/color][color=black]；其组急性参考剂量（[/color][color=black]Group ARfD[/color][color=black]）为[/color][color=black]8μg/kg b.w[/color][color=black]。根据评估结果，在食品安全限量范围内的呕吐毒素并不会对消费者的健康构成风险。[/color][b][color=black]各国对呕吐毒素的限量要求[/color][/b][color=black]由于脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的广泛存在，全球主要国家和地区都制定了脱氧雪腐镰刀菌烯醇限量标准。我国的《食品安全国家标准[/color][color=black]食品中真菌毒素限量》（[/color][color=black]GB 2761-2017[/color][color=black]）中规定谷物及其制品脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量为[/color][color=black]1000 μg/kg[/color][color=black]。《饲料卫生标准》（[/color][color=black]GB 13078-2017[/color][color=black]）中规定饲料原料和饲料产品脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限值为[/color][color=black]1-5mg/kg[/color][color=black]。美国的[/color][color=black]FDA[/color][color=black]（食品及药物管理局[/color][color=black])[/color][color=black]规定食品中的呕吐毒素[/color][color=black]DON[/color][color=black]的安全标准是[/color][color=black]1mg/kg[/color][color=black]，呕吐毒素[/color][color=black]DON[/color][color=black]的含量超过[/color][color=black]1mg/kg[/color][color=black]时就会对人及牲畜的健康产生损害，饲料用小麦及小麦制品中呕吐毒素[/color][color=black]DON[/color][color=black]的允许限量不得超过[/color][color=black]4mg/kg[/color][color=black]。欧盟制定的呕吐毒素[/color][color=black]DON[/color][color=black]限量标准相对较严，[/color][color=black]DON[/color][color=black]限量范围为[/color][color=black]200-1750μg/kg[/color][color=black]，加拿大的为[/color][color=black]600-2000μg/kg[/color][color=black]，日本的为[/color][color=black]1100μg/kg[/color][color=black]等。[/color][color=black]2015[/color][color=black]年国际食品法典委员会（[/color][color=black]CAC[/color][color=black]）首次颁布了[/color][color=black]DON[/color][color=black]限量标准，规定未加工的谷物中[/color][color=black]DON[/color][color=black]限量为[/color][color=black]2000μg/kg[/color][color=black]，谷物制品中限量为[/color][color=black]1000μg/kg[/color][color=black]，谷物基婴幼儿食品中限量为[/color][color=black]200μg/kg[/color][color=black]。根据风险评估结果，食品中[/color][color=black]DON[/color][color=black]含量在食品安全标准规定限量范围内不会对消费者的健康构成风险。[/color] [table=554][tr][td=4,1] [align=center]《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB 2761-2017）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][b][color=black]项目[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]食品类别（名称）[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]限量（[/color][color=black]μg/kg[/color][color=black]）[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]检验方法[/color][/b][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）[/align] [/td][td] [align=left]谷物及其制品 玉米、玉米面（渣、片） 大麦、小麦、麦片、小麦粉[/align] [/td][td] [align=center] 1000 1000[/align] [/td][td] [align=center]GB 5009.111[/align] [/td][/tr][/table][color=black] [/color] [table=573][tr][td=5,1] [align=center]《饲料卫生标准》（GB 13078-2017）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center][b][color=black]项目[/color][/b][/align] [/td][td=2,1] [align=center][b][color=black]产品名称[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]限量（[/color][color=black]mg/kg[/color][color=black]）[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]试验方法[/color][/b][/align] [/td][/tr][tr][td=1,5] [align=center]脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）[/align] [/td][td] [align=center]饲料原料[/align] [/td][td] [align=center]植物性饲料原料[/align] [/td][td] [align=center]≤5[/align] [/td][td=1,5] [align=center]GB/T 30956[/align] [/td][/tr][tr][td=1,4] [align=center]饲料产品[/align] [/td][td] [align=center]犊牛、羔羊、泌乳期精料补充料[/align] [/td][td] [align=center]≤1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]其他精料补充料[/align] [/td][td] [align=center]≤3[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]猪配合饲料[/align] [/td][td] [align=center]≤1[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]其他配合饲料[/align] [/td][td] [align=center]≤3[/align] [/td][/tr][/table][b][color=black]近三年呕吐毒素的监管现状[/color][/b][color=black]根据国家、地方食品安全抽检不合格信息汇总情况，自[/color][color=black]2016[/color][color=black]年至今，粮食加工品的抽检合格率均在[/color][color=black]98%[/color][color=black]以上，其中小麦粉共检出[/color][color=black]150[/color][color=black]批次不合格，[/color][color=black]120[/color][color=black]批次检出脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）超标，占整体不合格小麦粉样品的[/color][color=black]80%[/color][color=black]。[/color][img=,690,416]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011837428587_7923_3051334_3.jpg!w690x416.jpg[/img][color=black]备注：数据来源于食安通网站食品抽检信息与分析模块[/color][color=black]在[/color][color=black]120[/color][color=black]批次呕吐毒素超标的样品中，有检测数据的共[/color][color=black]112[/color][color=black]批次，呕吐毒素的检测值在[/color][color=black]1000μg/kg-5000μg/kg[/color][color=black]之间，其中分布在[/color][color=black]1000μg/kg-2000μg/kg[/color][color=black]之间的样品最多，占总体的[/color][color=black]68.75%[/color][color=black]，[/color][color=black]4000μg/kg -5000μg/kg[/color][color=black]之间样品仅[/color][color=black]3[/color][color=black]批次，不足总体的[/color][color=black]3%[/color][color=black]。[/color][align=left][b][color=black]呕吐毒素的检测值分布情况[/color][/b][/align][table=576][tr][td] [align=center][b][color=black]呕吐毒素检测值[/color][color=black] [/color][color=black]（单位：[/color][color=black]μg/kg[/color][color=black]）[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]1000-2000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]2000-3000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]3000-4000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]4000-5000[/color][/b][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]检测值分布数量[/align] [/td][td] [align=center]77[/align] [/td][td] [align=center]24[/align] [/td][td] [align=center]8[/align] [/td][td] [align=center]3[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]占比情况[/align] [/td][td] [align=center]68.75%[/align] [/td][td] [align=center]21.43%[/align] [/td][td] [align=center]7.14%[/align] [/td][td] [align=center]2.68%[/align] [/td][/tr][/table][color=black]食品添加剂联合专家委员会（[/color][color=black]JECFA[/color][color=black]）制定的呕吐毒素的暂定每日最大耐受摄入量（[/color][color=black]PMTDI[/color][color=black]）为[/color][color=black]1μg/kg b.w[/color][color=black]，以一个体重为[/color][color=black]60kg[/color][color=black]成年人计算含不同浓度呕吐毒素的样品的每日最大摄入量。含[/color][color=black]1000μg/kg[/color][color=black]呕吐毒素的样品，每日的最大允许摄入量为[/color][color=black]60mg[/color][color=black]，含[/color][color=black]5000μg/kg[/color][color=black]呕吐毒素的样品，每日的最大允许摄入量仅为[/color][color=black]12mg[/color][color=black]，超过最大允许量，则会对身体健康产生影响。[/color][align=center][b][color=black]含不同浓度呕吐毒素的样品的最大允许摄入量[/color][/b][/align] [table=553][tr][td] [align=center][b][color=black]呕吐毒素浓度[/color][color=black] [/color][color=black]（单位：[/color][color=black]μg/kg[/color][color=black]）[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]1000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]2000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]3000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]4000[/color][/b][/align] [/td][td] [align=center][b][color=black]5000[/color][/b][/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]最大允许摄入量 （单位：mg）[/align] [/td][td] [align=center]60[/align] [/td][td] [align=center]30[/align] [/td][td] [align=center]20[/align] [/td][td] [align=center]15[/align] [/td][td] [align=center]12[/align] [/td][/tr][tr][td=6,1] [align=left]备注：呕吐毒素的PMTDI为1 μg/kg b.w，以一个体重为 60 kg 成年人的每日最大摄入量计算[/align] [/td][/tr][/table][b][color=black]小麦粉中呕吐毒素超标原因[/color][/b][color=black]小麦粉中的呕吐毒素主要由小麦本身含带，生产加工未能实现小麦中呕吐毒素清除。研究表明，小麦面粉中呕吐毒素的阳性检出率为[/color][color=black]87%[/color][color=black]，麸皮检出率则相对更高，达到[/color][color=black]97%[/color][color=black]以上。从小麦中呕吐毒素生长部位来看，主要存在于外部果皮之中，因而外部麸皮较加工后形成的小麦粉来说，呕吐毒素的含量更多，但小麦粉中呕吐毒素的含量也足以影响人体健康。[/color][color=black]小麦粉的呕吐毒素来源主要有两种原因，一是小麦生产加工未能除去的小麦原有的真菌产生的呕吐毒素。小麦生长过程中可能由于雨水太多，造成小麦在成熟季节遭受严重的雨水浸透，引发有毒菌类生长，这些菌类与温度、湿度、通风以及日照等因素息息相关，我国处于亚热带和温带气候区域，小麦生长极易受到潮湿温热气候影响受到毒素菌类污染，赤霉病便是最为突出的表现。含有呕吐毒素的小麦在生产加工成小麦粉的过程中，由于正常加工不能改变其化学性质，仅仅是物理加工显然不能够对其毒素造成影响，故而小麦粉中呕吐毒素含量往往较高。二是小麦粉自身存储不当引起的霉变产生呕吐毒素。小麦粉加工生产后储存过程中由于环境较为潮湿引起端孢霉烯族毒素生长，往往也称为“发霉”，从而使小麦粉中含有一定的呕吐毒素，而这些在小麦粉生产后包装便无法进行检测，从而更容易影响人体健康。[/color][b][color=black][/color][color=black][img=,690,182]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907011838079833_7342_3051334_3.jpg!w690x182.jpg[/img][/color][/b]相关建议[color=black]对于一个以面食为主食的家庭来说，每日的面食摄入量很容易超过每日的最大允许摄入量，所以应引起社会的关注。针对呕吐毒素污染问题，应加强“从田间到加工过程”的全链条风险控制，构建全程质量安全追溯体系，关键环节层层把关，减低污染风险。[/color][color=black]加强抗病品种培育、轮作倒茬、疫情预报和病害防治工作，特别是在小麦抽穗扬花等时段加大谷物真菌污染的防控力度，从源头杜绝和减少污染。加强粮食收购和储运监测的监管，严控污染小麦进入食品流通和加工环节。[/color][color=black]企业应加强原料质量把关，包括加强原料产地污染情况调研，提升原料现场收购呕吐毒素快速检测能力，合理确定检测频次，避免采用超标粮食作为食品原料。[/color][color=black]监管部门应当密切关注原粮污染监测调查情况，对重点地区产出的粮食及其制品加强抽查和监督管理，必要时强制企业对其制品标注原产地和呕吐毒素检测含量。[/color][color=black]消费者日常应妥善保存家中的谷物类食品，选购谷物类食品时，应该选择正规可靠企业生产，且产品标识（名称、质量等级、商品量、贮存条件、保质期、生产日期、生产许可证、生产者或者销售者等）清楚的商品，开封后尽快使用，剩余的产品应按照贮存条件妥善保存，避免二次污染；注意食品摄入的多样性，可以大米、小麦、玉米等多种主食轮流使用；注意更换不同品牌及不同产地的产品，以降低呕吐毒素在体内长期累积的风险。[/color]

“呕吐毒素”测定过程中的“呕吐”经历声明：本文为吐槽贴，而非中毒贴，想看中毒经历的请绕行！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gif1 前言 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）又称呕吐毒素，是镰刀菌属禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等的次级代谢产物，是一种常见的真菌毒素，其广泛存在于小麦、大麦、玉米等粮食作物中。人和动物长期大量摄入DON后会抑制蛋白质的合成，造成呕吐、腹泻、厌食、恶心、神经紊乱等毒性效应。DON的性质十分稳定，烘焙、高温、高压等食品加工方法对它的影响很小，120℃的高温仍然不能使其降解，当温度升高到210℃处理30～40 min才能被破坏。为减少DON对人类的危害，目前很多地区和国家都制订了相应的标准来限制粮食中DON的含量，《GB 2761-2011食品中真菌毒素限量》标准中规定谷物及其制品中DON的限量为1000μg/kg。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669509_1669358_3.jpg 粮食中DON的检测方法主要有胶体金快速测试法、酶联免疫法、薄层色谱法、高效液相色谱法以及液相色谱-质谱/质谱法。GB 2761-2011推荐谷物及其制品中DON按GB/T 23503规定的方法测定，即用提取液提取试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇，经免疫亲和柱净化后用高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。于是参照标准要求准备和采购相关的试剂、标准品和免疫亲和柱，然而测试的过程却是一波三折，煞费苦心。2 实验部分2.1仪器分析条件—参照GB/T 23503-2009标准方法 色谱柱：C18 (250mm×4.6mm ,5μm)；流动相：甲醇：水=20:80；流速：0.8mL/min；进样体积：20μL；柱温：30℃；检测波长：218nm2.2 样品前处理—参照呕吐毒素免疫亲和柱说明书http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015482811_01_1669358_3.jpg3 遇到的问题与分析 实验中与标准中所用的色谱柱规格不一致（标准中色谱柱规格：C18柱,250mm×4.6mm , 5μm），可能导致分析时待测物质的保留时间、分离度等产生差异，因此对标准品进行稀释并按照上述分析条件进行测试(标准品浓度为200μg/mL，稀释后的标准溶液记为标准溶液A)，测试结果如下。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015494769_01_1669358_3.jpg 10μg/mL的标准溶液色谱图中出现了两个具有较高响应的色谱峰，且峰型、分离度均较好，顿时有点茫然，仿佛出现了“真假美猴王”，不知道哪个才是DON的色谱峰。对标准溶液继续稀释，在低浓度的时候发现组份1容易被试剂或其它组分干扰，而组份2几乎没有什么影响，而且在做标准曲线的时候发现组份2的峰面积与浓度有很好的线性关系，如图4，于是就将组份2默认为DON的色谱峰。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015505937_01_1669358_3.jpg “理想总是很美好，现实却是很悲惨”，在方法验证的过程中遇到了难题，加标样品按照上述流程进行前处理后，上机测定的色谱图中“一贫如洗”，没有出现组份2的色谱峰，也没有组份1的色谱峰。难道是样品中添加的DON浓度太小，低于检出限了？增大加标浓度，结果与之前一样还是没有检出。难道是提取的问题？为了验证这一想法，直接用水提取加标小麦粉中的DON，测定色谱图中组份1和组份2又“重出江湖”，并且组份2有很好的回收率。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015521152_01_1669358_3.jpg 排除掉提取的原因后，继续排查免疫亲和柱的柱效。取1mL浓度为2μg/mL的标准溶液直接过免疫亲和柱，分别用1mL的水和甲醇进行淋洗和洗脱，收集过柱后的标液、淋洗液和洗脱液并上机测试，测定结果如下图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015531638_01_1669358_3.jpg 测试结果表明，标准溶液经过免疫亲和柱时大部分待测物质与填料都是“擦肩而过”，少量保留在填料中的DON也被水给“洗刷”了下来，最后用甲醇洗脱时不见了DON的踪影。本以为是免疫亲和柱出了问题，因为按照说明书要求，免疫亲和柱要于“2-8℃冷藏保存，不可冷冻”，虽然买回来就进行了冷藏，但不能保证运输途中温度也符合保存要求。重新购买免疫亲和柱，有了上述的“前车之鉴”，觉得采购这东西还是不要“舍近求远”，联系当地的经销商，经过沟通了解到他们代理的免疫亲和柱与原先使用的品牌不一样，但能提供试用柱。于是决定先试用再购买，第二天销售人员亲自送来了两根试用柱，免疫亲和柱装在离心管中并有冰袋保持环境的温度，销售人员送来的时候冰袋都还没有完全解冻。由于只有两根试用柱，使用的时候还是很小心翼翼的，直接用标准溶液过免疫亲和柱，检查该款免疫亲和柱的性能，测试下来的结果与之前的结果同出一辙，看到结果时有点傻眼，也很茫然，联系两家的经销商都保证免疫亲和柱的质量没有问题。他们的免疫亲和柱没有问题，那我的问题出在哪了？后来在论坛中看到了相关的帖子，发现一丝端倪，有网友发帖阐述物质2并不是DON的色谱峰，而是溶剂乙酸乙酯的色谱峰，实验室对此进行了验证，果然，物质2的出峰时间和乙酸乙酯的出峰时间一致，而且查看标准物质证书发现，该标准品的介质正是乙酸乙酯。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015544405_01_1669358_3.jpg 既然物质2是乙酸乙酯，那么物质1就是DON吗？重新梳理测试过程和测试结果，对物质1是DON也产生了怀疑，原因在于物质1过免疫亲和柱的时候也没有能够产生保留。于是将疑点转移到标准品上，此次对标准品进行了更换，采购以乙腈为介质的标准品进行测试(标准品浓度为100μg/mL，稀释后的标准溶液记为标准溶液B)。测试前先用乙腈对标准溶液进行稀释，测试结果如下。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015560628_01_1669358_3.jpg 对比两份标准溶液的色谱图，相同分析条件下两者的测试结果截然不同，完全不像同一种物质的标准溶液，以乙腈为介质的标准溶液色谱图中虽然没有了物质2即乙酸乙酯的色谱峰，但是也没有物质1的色谱峰，而是在13min附近另出了一个色谱峰，该色谱峰峰型较差，似乎是与标准溶液中的干扰物质没有完全分离。不管该峰是不是DON的色谱峰，还是先对其进行分离，否则会影响定性和定量。先通过调节流动相比例进行优化，分离结果并不是很理想，然后将甲醇换成乙腈进行分离，此时完全不出峰，更换新的色谱柱也是一样的结果。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015571262_01_1669358_3.jpg 在分离条件优化的过程中再一次遇到难缠的问题：（1）干扰物质与待测组份就是一对好朋友，无论怎么调节流动相，两者总是形影不离，不离不弃；（2）以乙腈和水为流动相时干扰物质与待测组份同时消失；（3）此次测试用的标准溶液浓度为20μg/mL，是标准中最大标准溶液浓度的4倍（标准中最大浓度为5μg/mL），虽然甲醇：水=15：85时干扰物质与待测组分有所分别，但是响应值很小，很难达到标准中方法检出限。 新买的标准品，新配的标准溶液，出峰出的如此难看，而且还有杂质干扰，于是打电话给经销商，经销商提供了标准品生产单位的联系方式，几经周转联系到了相关的技术人员。首先将检测过程中遇到的现象和疑惑告之对方，然后咨询对方是否遇到过类似情况，最后征询对方能否提供解决方案。对方果然见多识广，他们在实验过程中以及客户的反馈中均遇到过这样的情况，建议尝试用水对标准溶液进行稀释。真是不试不知道，试完真奇妙。用水稀释后的干扰物质消失了，同时峰的响应值也变高了很多，这就是传说中的溶剂效应。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092015584817_01_1669358_3.jpg 标准溶液B用水稀释后解决了干扰和响应的问题，标