助壮素

[b][font=宋体]【检查】 矮壮素 助壮素[/font][/b][font=宋体] 照高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱法（通则0512和通则0431）测定。[/font] [b][font=宋体]色谱、质谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=宋体] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱（2.1×150mm，1.6μm）；以0.1％甲酸（含5mmol/L 甲酸铵）溶液为流动相A，以95%乙腈溶液（含5mmol/L甲酸铵、0.1％甲酸）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速：0.3 ml/min；柱温：40℃。[/font] [table][tr][td=1,1,129] [font=宋体]时间(分钟)[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]流动相A[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]流动相B[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]0～1[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]90%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]10%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]1～5[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]90%→66%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]10%→34%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]5～8[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]66%→63%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]34%→37%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]8～8.5[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]63%→55%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]37%→45%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]8.5～15[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]55%→25%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]45%→75%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]15～15.1[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]25%→0%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]75%→100%[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,129] [font=宋体]15.1～20[/font][/td][td=1,1,118] [font=宋体]0%[/font][/td][td=1,1,144] [font=宋体]100%[/font][/td][/tr][/table] [font=宋体]采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化（ESI）正离子模式下多反应监测（MRM），监测离子对见下表：[/font] [table][tr][td=1,1,103] [font=宋体]测定成分[/font][/td][td=1,1,116] [font=宋体]定量离子对m/z[/font][/td][td=1,1,141] [font=宋体]定性离子对m/z[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,103] [font=宋体]矮壮素[/font][/td][td=1,1,116] [font=宋体]122.1→58.2[/font][/td][td=1,1,141] [font=宋体]122.1→63.1[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,103] [font=宋体]助壮素[/font][/td][td=1,1,116] [font=宋体]114.1→98.1[/font][/td][td=1,1,141] [font=宋体]114.1→70.2[/font][/td][/tr][/table] [b][font=宋体]对照品储备液的制备[/font][/b] [font=宋体]精密吸取对照品溶液（50 μg/ml）1ml，置10ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备溶液（5 μg/ml），于-20℃冰箱中密封、避光保存，于使用前回复至室温。[/font] [b][font=宋体]基质混合对照品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] 取空白基质样品3g，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液10ml。精密量取上述混合对照品储备液80μl，加空白基质溶液920μl，摇匀，即得基质混合对照品溶液1号（浓度400 μg/L）。再精密量取基质混合对照品溶液1号0.5ml，加空白基质溶液0.5ml，摇匀，即得浓度200 μg/L的对照品溶液。同法制备浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/Lg、10μg/L、5μg/L、2μg/L、1μg/L的溶液，即得系列基质混合对照品溶液。（标示浓度分别为1、2、5、10、25、50、100、200、400 ng/ml）[/font] [b][font=宋体]供试品溶液的制备[/font][/b][font=宋体] 取本品（药材及饮片）粉末（过三号筛）约3g或配方颗粒3g，精密称定，置具塞离心管中，加入1%的冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15 mL，涡旋混匀，置振荡器上剧烈振荡（3000 r/min）5分钟，于冰浴中冷却10分钟（或冷藏放置30分钟），加入无MgSO[sub]4[/sub]（经马弗炉600℃脱水）6g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（3000 r/min）5分钟，离心（4000 r/min）5分钟，用微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取续滤液，即得。[/font] [b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=宋体] 分别精密吸取供试品溶液和不同浓度基质混合对照品溶液各2μl，注入高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱联用仪，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标制备标准曲线。从标准曲线读出供试品溶液中相当于矮壮素和助壮素的量，计算即得。[/font]

(一)概述矮壮素又名稻麦立、三西，低毒。纯品为白色粉状结晶，工业品为淡黄色或黄棕色粉末，略带鱼腥臭味。易溶于水。在中性或微酸性溶液中稳定，遇强碱物质，在加热情况下分解失效。主要应用于防止麦类作物倒伏，增加有效分蘖。防止棉、花徒长，减少蕾铃脱落，增强作物抗逆能力等。喷药要适时，用量要适当，以免产生药害。(二)粮谷冲矮壮素残留的测定1．原理根据矮壮素的溶解性用甲醇提取试样，提取液经氧化铝柱净化，与苯硫钠反应生成衍生物后，用配有质量选择检测器的气相色谱仪(GC-MSI))测定，外标法定量。2．试剂与材料无水硫酸钠(于650℃灼烧4h，冷却后储于干燥器中备用)、中性氧化铝(于650℃灼 烧4h，储于密封容器中，使用前在130℃烘2h，储于干燥器内冷却备用)、苯硫钠、甲醇、2-丁酮、6mg／mL苯硫钠的2-丁酮溶液(称取0.6g苯硫钠于具塞三角瓶中，加入100mL经 无水硫酸钠脱水的2-丁酮)、矮壮素标准品(CAS为998-81-5，纯度大于98．0％)。矮壮素 标准溶液：准确称取适量的矮壮素标准品，精确至0.0001g，用甲醇配制成浓度为100mg/L 的标准储备溶液锕据需要再用甲醇稀释成适当浓度的标准溶液，保存于4℃冰箱中，可使用90d。3．仪器气相色谱-质谱联用仪(配有电子轰击离子源)、超声波提取器、中性氧化铝柱、离心管(5mL，具磨口 塞)、旋转蒸发器。4．分析步骤(1)提取 称取粉碎并通过2.0mm圆孔筛的试样20g(精确至0．01g)于250mL具塞 锥形瓶中，加入60mL甲醇，于超声波提取器上提取20min，提取液经2g无水硫酸钠过滤。分别两次用20mL甲醇洗具塞锥形瓶和无水硫酸钠，合并滤液。(2)净化上述提取液注入氧化铝柱，收集全部流出液，分别两次用10mL甲醇洗柱， 合并流出液，于旋转蒸发器上蒸发至近干，用甲醇转移至5mL离心管中，用氮气吹干备用。(3)衍生化在氮气保护下将2mL 6mg/mL苯硫钠的2-丁酮溶液加入上述离心管中，于80℃水浴上反应30min，冷却至室温，经0.45μm滤膜过滤供色谱测定。(4)标准工作液的制备 准确吸取适量的标准溶液至具塞离心管中，氮气吹干，在氮气 保护下，将2mL 6mg/mL苯硫钠的2-丁酮溶液加入上述离心管中，于80℃水浴上反应30min，冷却至室温，经0.45μm滤膜过滤供色谱测定。(5)色谱分析①气相色谱一质谱条件 毛细管色谱柱：30m×0.25mm(内径)×0．25mm(膜厚)，HP-5MS柱。进样口温度250℃，检测器温度280℃。载气：氮气，纯度≥99．999％，1mL / min。进样量：1μL。电离方式：EI。电离能量：70eV。选择监测离子(m／z)：91、109、 124。测定方式：选择离子监测方式。进样方式：无分流进样，1．5min后开阀。柱温:50℃(2min）── 20℃/min──→185℃(9min)②气相色谱一质谱测定根据样液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，按上述条件进行色谱分析。标准工作液和待测样中矮壮素的响应值均应在仪器线性范围内。对标准工作液与样液等体积进样测定。在上述气相色谱一质谱条件下，矮壮素保留时间约为6．4min，矮壮素标准品衍生物的气相色谱图、质谱图。③空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。5．结果计算试样中矮壮素含量按下式进行计算X=( AVc×1000)/ Asm式中，X为试样中矮壮素含量，mg/kg；A为样液中矮壮素衍生物的峰面积；V为最终 样液的体积，mL；c为标准溶液中矮壮素的浓度，mg/mL；As为标准工作液中矮壮素衍生 物的峰面积；m为最终样液相当的试样质量，g。计算结果保留两位有效数字。6．精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。7．检出限本方法对玉米、荞麦中矮壮素残留的检出限为0.01mg/kg，线性范围为0.005～1．00mg/L。

[font=宋体]最近小弟在做矮壮素和缩节胺的分析，前处理用[/font][font=Arial]SCX[/font][font=宋体]小柱，但回收率太低，哪位大虾做过这方面的，请指点小弟一下？不胜感激！[/font]