微载体细胞计数

牛奶中的体细胞有两个来源。一是来自乳腺分泌组织中的上皮细胞（也称腺细胞）；二是来自与炎症进行搏斗时而死亡的白血细胞。腺细胞是正常的体细胞，是乳腺进行新陈代谢过程的产物，在奶中的含量相对恒定。而白细胞是一种防卫细胞，可以杀灭感染乳腺的病菌，还可以修复损伤的组织。因此白细胞在牛奶中的数量随奶牛的生理状态和健康水平有很大变化。 一、牛奶中体细胞上升的原因 1 、 由于乳腺被细菌感染出现乳房炎而使体细胞数量上升 。 牛奶中正常的体细胞为 20 万 /ml （标准）。但初产母牛和管理良好的牛群可能低于 10 万 /ml 。如果体细胞数超过 25 ～ 30 万个 /ml ，就接近不正常，说明有细菌传染，引起乳房炎。引起乳房炎的细菌有两大类：传染性的细菌和环境中的细菌，详见另文所述。 2 、 牛的年龄及泌乳状态 体细胞数随着牛的胎次（年龄）及泌乳阶段而上升。这是母牛自然免疫系统在分娩之前所表现出的一种免疫反应，其目的是为了提高乳腺的防御机能。到了分娩以后，如果乳腺未遭病菌感染，则牛奶中的体细胞数量会很快下降。 3 、应激和季节 高温和高湿条件下所引起的热应激，一般多出现在 7 、 8 月份，也可能引起牛奶中的体细胞数的上升。母牛表现发情症状时也有伴随体细胞上升的趋势，但报道不太一致。 4 、乳房创伤 在没有传染源的情况下，乳房内部创伤（如挤奶机负压过大，空吸时间过长或乳房被压伤等）也可以导致牛奶中体细胞数量增加。但当创伤愈合后，体细胞又可恢复正常。 5 、其它原因 包括挤奶设备的完好及工作状况，如脉动频率、真空负压大小及稳定性、集乳器的通透性，橡皮奶衬的完好及柔软性等都可以影响牛奶体细胞的数量。 此外，挤奶过程的卫生状况，乳头的护理及乳头的封闭影响着细菌进入乳头的机会，同时也影响着牛奶中体细胞的数量。 二、体细胞数制约着牛奶的产量及质量 1 、对牛奶产量的影响 当牛奶中的体细胞数量超过 30 万 /ml 时，日产奶量开始下降。上升幅度越大，产量下降幅度也越大（详细材料参考另文）。 2 、对牛奶质量的影响：当体细胞增加时，可以伴随乳白蛋白质的上升和酪蛋白质含量的下降，可以使奶酪的产量随之下降；在这种条件下奶牛的货架期和风味也随之受到影响。因此奶业发达国家一般均根据体细胞的数量标注奶价。对体细胞少的生产场家给予特殊奖励。

[align=center][font='calibri'][size=13px]生乳体细胞检测[/size][/font][/align]1、 [size=18px]生乳体细胞检测目的及意义[/size][size=18px]体细胞数的英文是Somatic Cell Count ， 缩写为SCC是指出现在正常牛奶中少量的动物身体细胞。以每毫升牛奶中的体细胞数表示，通常以千个计数。体细胞( scc ) 的组成，白细胞 (即巨噬细胞、嗜中性白细胞和淋巴细胞)和上皮细胞。[/size][size=18px]体细胞(SCC)越低牛奶质量越高SCC越高对原奶质量的影响越大，并对牛奶的保质期和乳制品如酸奶、奶酪等的产量、质量、风味等产生极大的不利影响。因此各国都将体细胞数作为牛奶质量标准中最重要的指标之一。[/size]2、 [size=18px]检测原理[/size][size=18px]采用荧光染色自动镜检原理，染色剂外无需额外的化学试剂；干粉式染色剂无需要样品稀释液。排除液体染色剂挥发的影响；体细胞检测范围1-1000万，建议有效计数范围为5万以上。[/size]3、 [size=18px]操作过程[/size][align=left][size=18px]第一步：充分搅拌后在取样瓶中用 100ul 的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]抽取 [/size][size=18px]100ul [/size][size=18px]奶[/size][size=18px],[/size][size=18px]加入到染色瓶中；第二步：把加入奶样后的染色剂瓶放置在搅拌器上，按 2 秒，松 [/size][size=18px]2 [/size][size=18px]秒，共搅拌 [/size][size=18px]10 [/size][size=18px]次， 静止 [/size][size=18px]2 [/size][size=18px]分钟让它充分染色，然后再放在搅拌器上按压搅拌 [/size][size=18px]3 [/size][size=18px]次。第三步：打开盖子，用另外一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]取样出 8ul 奶样在检测板半圆孔处缓慢排出，无需排气， 让样品慢慢渗过去，然后静置 [/size][size=18px]30 [/size][size=18px]秒，直至对面直线处充满样品。[/size][/align][align=left]4、 [size=18px]注意事项[/size][/align][align=left][size=18px]1、开机时，先接电源，打开机器，最后开平板，避免第二步自检不成功[/size][/align][align=left][size=18px]2、在进行检测时，若点击按钮没有反应，则机器可能进入了仿真模式，若出现 [/size][/align][align=left][size=18px]这种情况，可返回自检界面，调整箭头所指模式即可。[/size][/align][align=left]3、 [size=18px]仪器使用较长时间后，会出现卡顿现象，这种情况下可以清除以往检测数据，点击参数选项，进入页面。[/size][/align][align=left][size=18px]4、仪器使用时，请勿在平板上下载游戏，视频等占内存的软件，避免出现卡顿现象。 [/size][/align][align=left][size=18px]5[/size][size=18px]、仪器使用结束后，关机时请先关闭平板，再关闭机器，最后拔下电源。[/size][/align]

微载体培养技术（micro-carrier culture technique）于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术日趋完善和成熟，广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认最具发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，且容易放大。该技术已广泛用于培养各类型细胞，如293细胞、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞。一、微载体 微载体是指直径60-250 μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。常用商品化微载体有三种：Cytodex1、2、3，Cytopore和Cytoline。二、微载体培养原理与操作 其原理是将对细胞无害的微载体颗粒加入培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。 贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩增三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，因此细胞在微载体表面的贴附是进一步铺展和生长的关键。细胞主要通过静电引力和范德华力与微载体黏附，这取决于细胞与微载体的接触概率和相融性。 由于动物细胞无细胞壁，对剪切力敏感，因此微载体培养在操作中对搅拌转速及搅拌方式的要求都十分严格。微载体培养要求搅拌的速度非常慢，最大速度75 r/min。细胞微载体培养通常分为三个时期：贴壁期，过渡期和培养期。贴壁期和过渡期可以使用超低速细胞磁力搅拌系统进行培养，该系统具有超低的搅拌速度，剪切力小且能在低速下充分混匀细胞。三、微载体培养的优势产业化细胞培养首先需要提供足够大的细胞生长面积，使培养容器单位容积所提供的细胞生长面积有所增加，从而提高疫苗和生化制剂的产量；其次需要加强和改善细胞培养的环境，有利于细胞生长；第三，细胞的均一化程度要高，在一个大发酵罐内培养细胞，生长环境需一致。要满足以上三点要求，常规的培养瓶静态培养，甚至是转瓶都很难满足，而微载体培养技术则能很好的解决这些问题。总结 综上所述，微载体的优势可以归纳为以下几点：表面积/体积大，单位体积培养液的细胞产率高；把悬浮细胞和贴壁细胞培养融合在一起，兼有两者的优点；可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面的生长情况；简化细胞生长过程中对各种环境因素的检测和控制，重现性好；培养基利用率较高；放大容易；细胞收获过程不复杂；劳动强度小；培养系统占地面积和空间小等。