微量营养素

近来我部接到多份政府信息公开申请，咨询婴儿配方食品中的营养素含量问题。为方便群众了解相关政策法规，增加食品卫生工作的透明度，特就有关问题说明如下：　　根据《食品安全法》、食品安全国家标准及我部网站公布的《乳品安全国家标准问答》，婴儿配方食品中营养素的含量应当符合《婴儿配方食品》(GB 10765-2010)的规定，营养素的种类应当符合《食品营养强化剂使用标准》(GB14880)规定的品种。　　新的《食品营养强化剂使用标准》(GB14880-2012)将于2013年1月1日起正式实施。新标准明确婴儿配方食品等食品属于“特殊膳食用食品”，对表C1中的营养强化剂，该标准只规定其化合物来源，含量以《婴儿配方食品》(GB 10765-2010)等相关标准的规定为准。在新标准正式实施日期前，鼓励并允许食品生产经营单位按照新的食品安全国家标准组织生产经营。

北京博晖创新光电技术股份有限公司(以下简称&ldquo 公司&rdquo 或&ldquo 本公司&rdquo )公告称，近日收到《科技部关于国家高技术研究发展计划生物和医药技术领域2014年项目立项的通知》文件(国科发社[2014]73号)。根据该通知由中生北控生物科技股份有限公司牵头实施的&ldquo 人体营养素检测关键技术与产品开发&rdquo 项目(以下简称&ldquo 项目&rdquo )获得立项通过。该项目共分6个子项，本公司承担其中&ldquo 医用ICP-MS人体微量元素分析系统的研制&rdquo 项。项目具体情况如下：　　一、项目名称(编号)：人体营养素检测关键技术与产品开发(2014AA022300)　　二、项目牵头单位：中生北控生物科技股份有限公司　　项目其他参与单位：中生(苏州)医疗仪器有限公司、天津三箭生物技术有限公司、北京九强生物技术股份有限公司、毅新兴业(北京)科技有限公司、北京博晖创新光电技术股份有限公司　　三、项目经费预算：项目总经费预算6492万元，其中863计划专项经费预算1892万元　　四、本公司承担项目子课题情况：　　项目名称(编号)：医用 ICP-MS 人体微量元素分析系统的研制(2014AA022306)　　863 计划专项经费：370 万元　　五、项目执行期：三年　　六、项目意义：　　项目立足于解决我国营养检测面临的技术瓶颈问题，开展营养检测所需的高性能诊断仪器和配套检测试剂的研制并进行产业转化，对于促进我国临床营养学科的建设和全民健康水平的提高，推动我国临床营养诊断产业的发展均具有重要意义。　　七、项目目标和主要研究内容　　针对我国当前营养检测面临的技术问题，开展营养监测相关(重点为维生素、微量元素和抗氧化能力)的关键设备、仪器和配套检测试剂的研制并实现产业转化，打破国外在该领域的垄断，为我国营养诊断、营养评价与疾病的营养治疗提供技术支撑，推动营养学科的建设和相关产业发展，提高重大疾病诊断和防治水平，促进全民健康水平的提高。　　此项目的参与标志着公司在人体微量元素检测领域新技术开发上迈出了重要一步，医用ICP&mdash MS人体微量元素分析系统如能研制成功将为医疗机构开展营养诊断、营养评价及与疾病的营养治疗提供技术支撑，推动我国临床营养学科建设和临床营养诊断产业的发展。　　此项目研发内容具有较高难度，项目拟达到的产业化能力和经济效益具有不确定性 公司作为项目参与单位分配到专项项目预算资金370万元，截止公告日公司尚未收到本专项项目经费，公司收到该笔经费后将按惯例计入递延收益，对财务指标无重大影响。提请投资者注意投资风险。公司将根据项目进展情况及时履行信息披露义务。

随着重组DNA技术的迅猛发展，外源基因在不同宿主中的表达使得各种重组蛋白的工业生物生产成为可能。选择合适的宿主是生物工艺设计中的关键步骤之一，具体取决于：1.上游培养效率2.易于基因编辑和分子工具的可用性3.翻译后修饰的能力，如糖基化4.蛋白质（用于下游加工和作为生物制药成分等）的分泌能力目前，多种生物已被应用于重组蛋白的生产，尤其是大肠杆菌，易于基因改造，具有在酵母水解物等多种基质上快速生长并产生高蛋白滴度的优势。已成为迄今为止业界追捧的主力军。典型的生物工艺优化通常需要进行一些初步试验，以发现适用于宿主菌株并提高目的重组蛋白表达的培养基成分（特别是氮基营养素）。对于此类应用需求，能够提高实验效率和参数准确度的高通量筛选平台成为热门工具。贝克曼库尔特BioLector通过在线测量关键培养参数提供可放大的高通量分析。本案例为通过BioLector对多种酵母营养素就生物量生长和重组蛋白的形成进行评估和比较，筛选出了适合大肠杆菌重组蛋白生产和诱导时间的理想培养基。方法培养菌株：大肠杆菌BL21(DE3)pET-28a(+)EcFbFP。培养基：以标准TB培养基（Carl Roth）为参照物，对多个TB 样（Terrific 液）培养基进行比较。不同的TB 样培养基使用不同的酵母提取物。BioLector培养条件：在接种至微孔板之前，先在250 mL摇瓶中进行预培养， 37°C培养6小时。然后使用48孔梅花板（MTP-BOH2）在 BioLector中进行培养。温度 37°C ，振摇速度：1400 rpm。分别在每个培养孔中填充800μL培养液用于非诱导实验，填充790μL用于诱导实验。诱导实验中，在诱导时间点上添加 10μL 50μM 的 IPTG。环境氧气浓度保持在35%，避免培养物缺氧。BioLector在线测量：培养过程中对生物量、EcFbFP(黄素荧光蛋白)、pH以及 DO进行在线测量。结果不同TB样培养基的生物量生长情况：培养实验中，不同酵母营养素的培养基中生物量的生长情况如上图所示：培养基不同，最终的光密度和生长速率也会不同。ProCel 6 中的大肠杆菌OD最高，培养基 ProCel 3 中的大肠杆菌的OD低。ProCel 6为本特定工艺的最高生长速率。上图为培养过程的DO值。培养基 ProCel 3 和 ProCel 4 中的培养物未达到0%的氧饱和度，这表明由于耗氧量有限，该培养基中的菌株代谢活性较低。相反，其他培养物包括TB标准培养基，均在短时间内达到0%的氧饱和度，表明菌株代谢活性高。不同酵母营养素TB样培养基的产物生成：通过将IPTG 添加到培养物中来诱导 T7 聚合酶的表达促进黄素荧光蛋白的生成。BioLector使用梅花板为48个培养物提供了独立的培养空间，因此可测试不同的诱导时间点。使用自动化工作站整合BioLector后的 RoboLector 系统还可以自动进行培养诱导。首先选择一个固定的诱导时间点。分别为培养启动后的3小时、3.75小时和4.5小时。下图所示为每种TB样培养基在诱导时间下所测荧光的平均值。荧光动力学清晰地表明不同培养基有不同的EcFbFP（黄素荧光蛋白）表达水平。表现出最强荧光信号的两个样本为：ProCel 2，诱导点为3.75小时；ProCel 5，诱导点为 3 小时。经过 7.7 小时的培养，ProCel 5 的荧光值达到102.94a.u.，而ProCel 2 的荧光值达到 101.82 a.u.。本方法的不足之处在于未比较不同样本的生物量对蛋白质产量的影响。经过3小时的培养，一些培养物的OD已达到6，而其他培养物仅达到3。当诱导具有不同光密度的培养物时，可能会对在每种酵母营养素上生长的实验大肠杆菌的蛋白质生产性能造成误解。鉴于此，我们采用了一种新方法，将诱导点与生物量信号耦合。使用BioLector的信号驱动RoboLector，依赖于特定生物量的诱导对于每个单独的孔都是可行的。为自动化工作站设置3、6或8的OD目标值，以根据孔内培养物的生长动力学自动添加IPTG以诱导蛋白质生产。如下图所示，ProCel 2表现最佳，最终值为 146.23 a.u.，培养时间是 12.3 小时；ProCel 5表现次之，最终值为138.1 a.u.。与之前进行的一系列实验相比，本实验中的排名与在特定时间点进行诱导的实验不同。这一观察证明了最佳工艺条件的重要性，并使这些条件具有可比性。此处数据表明：与之前的实验相比，本实验中的荧光值更高。正如该领域诸多论文中所强调的那样，诱导时间确实是一个关键参数。同样，在优化大肠杆菌重组蛋白生产的过程中，也必须评估诱导剂的浓度。另外，与对照TB培养基相比，这里测试的一些酵母氮源产生了更高的重组蛋白产量。这些结果凸显了选择培养基成分的重要性，这些成分能够在特定的生物工艺中实现高而稳定的产量。结论通过BioLector系统，贝克曼库尔特可为用户提供适用于各种应用领域的高通量筛选平台。其独特的梅花形微孔板尤其适用于好氧培养，如同实验室生物反应器，BioLector系统通过非侵入式传感器使客户能够获取更多的在线测量参数。正如本应用，通过BioLector系统可轻松实现培养基的筛选，整合自动化工作站的RoboLector，还可实现更多功能。补料、pH调控以及文中所述的诱导功能，所有这些均可在小规模实验中实现，帮助客户同时兼顾成本和效率。RoboLector高通量自动化微型生物培养平台欲了解该应用详情，请扫描下方二维码下载应用指南《利用BioLector进行大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素的筛选》