推荐厂家
暂无
暂无
抗氧化剂检验方法的发展趋势是各类食品中抗氧化剂的多组分同时测定。色谱技术如高效液相色谱、气相色谱、离子色谱已成为抗氧化剂分析的主要手段。其中高效液相色谱法占主导地位,基本上能进行所有抗氧化剂的分析,气相色谱法主要应用于脂溶性抗氧化剂的分析,离子色谱法主要应用于水溶性抗氧化剂的分析。
(1)[url=https://baike.baidu.com/item/BHA/9348086?fromModule=lemma_inlink]BHA[/url]:[url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B8%81%E5%9F%BA%E7%BE%9F%E5%9F%BA%E8%8C%B4%E9%A6%99%E9%86%9A/0?fromModule=lemma_inlink]丁基羟基茴香醚[/url]。因为加热后效果保持性好,在保存食品上有效,它是国际上广泛使用的抗氧化剂之一,也是中国常用的抗氧化剂之一。和其他抗氧化剂有协同作用,并与增效剂如[url=https://baike.baidu.com/item/%E6%9F%A0%E6%AA%AC%E9%85%B8/2203792?fromModule=lemma_inlink]柠檬酸[/url]等使用,其抗氧化效果更为显著。一般认为BHA毒性很小,较为安全。(2)[url=https://baike.baidu.com/item/BHT/3310624?fromModule=lemma_inlink]BHT[/url]:[url=https://baike.baidu.com/item/%E4%BA%8C%E4%B8%81%E5%9F%BA%E7%BE%9F%E5%9F%BA%E7%94%B2%E8%8B%AF/0?fromModule=lemma_inlink]二丁基羟基甲苯[/url]。与其他抗氧化剂相比,稳定性较高,耐热性好,在普通烹调温度下影响不大,抗氧化效果也好,用于长期保存的食品与焙烤食品很有效。是国际上特别是在水产加工方面广泛应用的廉价抗氧化剂。一般与BHA并用,并以柠檬酸或其他[url=https://baike.baidu.com/item/%E6%9C%89%E6%9C%BA%E9%85%B8/0?fromModule=lemma_inlink]有机酸[/url]为增效剂。相对BHA来说,毒性稍高一些。(3)[url=https://baike.baidu.com/item/PG/0?fromModule=lemma_inlink]PG[/url]:[url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B2%A1%E9%A3%9F%E5%AD%90%E9%85%B8%E4%B8%99%E9%85%AF/0?fromModule=lemma_inlink]没食子酸丙酯[/url]。对热比较稳定。PG对猪油的抗氧化作用较BHA和BHT强些,毒性较低。(4)[url=https://baike.baidu.com/item/TBHQ/0?fromModule=lemma_inlink]TBHQ[/url]:[url=https://baike.baidu.com/item/%E7%89%B9%E4%B8%81%E5%9F%BA%E5%AF%B9%E8%8B%AF%E4%BA%8C%E9%85%9A/0?fromModule=lemma_inlink]特丁基对苯二酚[/url]。是较新的一类酚类抗氧化剂,其抗氧化效果较好。
酒中抗氧化能力ORAC分析1.实验原理ORAC反应是一个经典的氢原子转移(HAT)的氧化过程。在实验条件下,一分子的AAPH失去一分子氮气,生成两分子AAPH自由基(方程1)。在空气中,生成的AAPH自由基很快与O2反应(方程2)生成相对稳定的过氧自由基ROO· 。荧光素的荧光衰退曲线表明过氧自由基对荧光素的破坏程度,在没有抗氧化剂存在的情况下,ROO·从FL获得一个氢原子(方程3),致使荧光素的荧光衰退;在有抗氧化剂(ArOH)存在的情况下,ROO·从抗氧化剂获得一个氢原子,生成ROOH和一个稳定的抗氧化剂自由基ArO· (方程4),致使荧光素被过氧自由基破坏的速率受到抑制(见图1)。R-N=N-R 2R· + N2 (1)R·+O2 ROO· (2)ROO· + probe (荧光素) ROOH + oxidized probe (失去荧光) (3)ROO·+ArOH(抗氧化剂) ArO· + ROOH (4)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/10/201310141626_470806_1613776_3.gif图1 ORAC检测示意图2.实验方法ORAC法即氧自由基吸收能力(又称为抗氧化能力指数),是一种测量不同食品抗氧化能力的国际通用标准单位,检测数值愈高代表其抗氧化能力就愈强。ORAC法适合抗氧化剂的高通量筛选,是目前评价抗氧化物质抗氧化活性的最为准确、灵敏度高、应用范围广的方法之一,目前国际上已经有很多商品的标签注明抗氧化能力(ORAC值)。将空白、样品以及标准抗氧化物(Trolox)各20μL,分别与160μL荧光素溶液混合后37℃保温30min,然后再加入AAPH溶液20μL,迅速开始测定,利用荧光酶标仪配备软件记录荧光强度,初始荧光强度值记为f0,以后每隔一段时间测定一个点,荧光强度分别记为f1, f2 …,抗氧化剂作用下荧光衰减曲线下的积分面积,扣除无抗氧化剂的空白曲线下面积,得出抗氧化剂的曲线下净面积(Net AUC)。抗氧化剂的ORAC值是通过其荧光衰退曲线的曲线下净面积与标准抗氧化物质Trolox的曲线下净面积相比得出的,ORAC值以Trolox当量μmol Trolox equivalent/g (μmol TE/g)或μmol Trolox equivalent/L (μmol TE/L)表达。我们将以ORAC方法来验证,包括线性(定量限与检测限)、精密度与准确度、重复性与稳定性、回收率等。通过验证方法的可行性,以此来评价保健酒的抗氧化能力。3.试剂溶液的制备3.1磷酸盐缓冲溶液3.1.1缓冲溶液储备液0.75 M K2HPO4:130 g K2HPO4溶于1 LddH2O;0.75 M NaH2PO4:90 g NaH2PO4溶于1 LddH2O 3.1.2缓冲溶液工作液分别量取K2HPO4贮备液81 mL,NaH2PO4贮备液19 mL,混合后用ddH2O定容至1000 mL,这样得到75 mM,pH 7.4的缓冲溶液,冰箱下贮存。3.2荧光素钠盐溶液荧光素钠盐贮备液1:称取0.0456g荧光素钠盐定容到100 mL磷酸缓冲液,4℃黑暗贮存;荧光素钠盐贮备液2:1000μL贮备液1用磷酸缓冲液定容至100mL,4℃黑暗贮存;荧光素钠盐工作液:800μL贮备液2用磷酸缓冲液定容至100mL,4℃黑暗贮存。3.3 Trolox标准溶液的配制0.0125 g Trolox定容到50 ml磷酸缓冲液中,得到1000μM的贮备液,−20℃ 贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成100,50,25,12.5,6.25μM的工作液。3.4 AAPH溶液0.414g AAPH完全溶于10mL pH7.4,75mM的磷酸缓冲溶液,即得153mM的溶液,冰浴保存。(8h的有效期,现配现用)3.5