耐热稳定性

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  • 895专业型热稳定性测定仪,与StabNet软件配套使用,它是一款先进的可以自动测定聚氯乙烯(PVC)和其他含氯的高分子材料热稳定性的分析系统。 电脑上的StabNet软件完全控制测量仪的运行。在仪器的机身上,每个测量位置都有自己独立的启动按钮。此外,仪器上彩色液晶屏显示每个测量位的状态。一次性的反应管可大大减少实验的清洗工作量,从而节省了时间和成本。特点一览仪器▼ 通过电脑可以控制仪器的所有功能▼ 每个测量位,有独立测量启动键▼ 仪器液晶屏显示每个测量位的状态▼ 独特的配件使仪器具有前所未有的测量可靠性和操作简便性▼ 价格低廉的一次性玻璃测量附件▼ 结实耐用的测量杯盖一体化电导测量池▼ 每台仪器有两个加热模块,八个测量位(每个加热模块有四个测量位)。一台电脑最多可以控制四台仪器。软件▼ 清晰而布局合理的用户界面▼ 数据库有灵活的过滤,排序和统计功能▼ 数据结果透明度高,这是由于数据库存储了所涉及的:▼ 测量结果、方法、仪器设置参数▼ 测量结果的重新评估或重新计算的数据历史▼ 高级别的数据安全,来自操作型数据库和自动备份功能▼ 客户端服务器带来良好的网络兼容功能▼ 用户管理可自由配置的访问权限▼ 符合GLP所有的要求895 聚氯乙烯和其他含氯的高分子材料的热稳定性(脱氯化氢方法) 基于聚氯乙烯制成的塑料制品在测定的温度下分解释放出气态HCl。按照DIN 53381 part 1或ISO 182 Part 3测定PVC的热稳定性时,塑料制品释放的HCl被流动的氮气转移到装有去离子水的测量池中,引起测量池中溶液电导率的变化。 PVC材料的热稳定性通过测定产生HCl的时间来定义的。一般可定义,当测量池的电导率的变化值达到50 s/cm时所需要的时间称为稳定时间。这个方法可以用于整个加工阶段的PVC热稳定性的测定,也可以用来测定其稳定剂的性能。
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  • 895专业型热稳定性测定仪,与StabNet软件配套使用,它是一款先进的可以自动测定聚氯乙烯(PVC)和其他含氯的高分子材料热稳定性的分析系统。电脑上的StabNet软件完全控制测量仪的运行。在仪器的机身上,每个测量位置都有自己独立的启动按钮。此外,仪器上彩色液晶屏显示每个测量位的状态。一次性的反应管可大大减少实验的清洗工作量,从而节省了时间和成本。特点一览仪器通过电脑可以控制仪器的所有功能每个测量位,有独立测量启动键仪器液晶屏显示每个测量位的状态独特的配件使仪器具有前所未有的测量可靠性和操作简便性价格低廉的一次性玻璃测量附件结实耐用的测量杯盖一体化电导测量池每台仪器有两个加热模块,八个测量位(每个加热模块有四个测量位)。一台电脑最多可以控制四台仪器。软件清晰而布局合理的用户界面数据库有灵活的过滤,排序和统计功能数据结果透明度高,这是由于数据库存储了所涉及的:测量结果、方法、仪器设置参数测量结果的重新评估或重新计算的数据历史高级别的数据安全,来自操作型数据库和自动备份功能客户端服务器带来良好的网络兼容功能用户管理可自由配置的访问权限符合GLP所有的要求895 聚氯乙烯和其他含氯的高分子材料的热稳定性(脱氯化氢方法)基于聚氯乙烯制成的塑料制品在测定的温度下分解释放出气态HCl。按照DIN 53381 part 1或ISO 182 Part 3测定PVC的热稳定性时,塑料制品释放的HCl被流动的氮气转移到装有去离子水的测量池中,引起测量池中溶液电导率的变化。PVC材料的热稳定性通过测定产生HCl的时间来定义的。一般可定义,当测量池的电导率的变化值达到50 &mu s/cm时所需要的时间称为稳定时间。这个方法可以用于整个加工阶段的PVC热稳定性的测定,也可以用来测定其稳定剂的性能。
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  • James Heal Thermaplate耐热色牢度和尺寸稳定性测试仪James Heal热升华仪在纺织实验室及染坊等都得到广泛的应用。它能让用户在同一台设备上测试色牢度、升华牢度和热稳定性,且测试均符合各大知名零售商标准和国际标准。该仪器的加热板尺寸为 210×210mm,即使像 M&SP10 这种要求大样品的标准也完全适用。触屏式用户界面设计师与直接用户和纺织品的专家技术人员近距离接触,只为制造出一款直观的触摸屏方便用户操作。设置直观,导航快捷,确保了测试的简单操作。触摸屏的触摸感觉类似于日常使用的设备,以确保培训。顶板和底板是独立控制的,可单独加热,适用于标准ISO 105-X11 and AATCC 133。样品平台可用于组装复合材料样品,并可快速清除,以准备好对下一个样品进行有效测试的热样品。一旦盖子关闭,按住触摸屏上的“开始”按钮即可激活定时器,加热板也会自动开始升温。测试标准AATCCAATCC 117 / AATCC 133adidasadidas 5.09 ISOISO 105 P01 / ISO 105 X11Marks & SpencerM&S P10 / M&S C13 Other JIS L 0879 / JIS L 0850测试耗用品和配件为了使 Thermaplate 达到效用,你必须使用优质的测试耗材。我们推荐你使用正品的 James Heal 测试耗用品,以确保测试的准确性。下面是配合Thermaplate 测试的耗用品: 1. 欧标多纤附布 Multifibre2. 美标多纤附布 Multifibre3. 机织毛毯4. 白棉布5. ISO 色变和沾色评定灰卡6. AATCC 色变和沾色评定灰卡
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    p  strong仪器信息网讯/strong 材料的热稳定性在不同的学科领域有不同的含义。建筑学:在周期性热作用下,围护结构或房间抵抗温度波动的能力;电器:热稳定性是指电器在指定的电路中,在一定时间内能承受短路电流(或规定的等值电流)的热作用而不发生热损坏的能力;化学:在化学方面,热稳定性反映物质在一定条件下发生化学反应的难易程度;生物:指的是DNA碱基中G与C之间形成3个氢键而A与T之间形成2个氢键,氢键数越多,其DNA分子的热稳定性越好;其他:试样在特定加热条件下,加热期间内一定时间间隔的粘度和其它现象的变化。/ppspan  仪器信息网对涉及材料热稳定性的18条国家标准和22条行业标准进行了汇总,相关标准涉及煤炭、染料、橡胶、稀土、石油、建筑、危险化学品、塑料、核工业、检验检疫、有色金属、半导体、机械、化工等多个行业。/span/ppbr//pp style="text-align: center "strong热稳定性国家标准/strong/ptable border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style="border-collapse:collapse border:none"tbodytr style=" height:18px" class="firstRow"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px word-break: break-all " height="18"pspan style="font-family:宋体"标准号/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"标准名称/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"主管部门/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 1573-2018/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"煤的热稳定性测定方法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国石油和化学工业联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 31959-2015/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"碳纤维热稳定性的测定/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国建筑材料联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 2392-2014/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"染料/span span style="font-family:宋体"热稳定性的测定/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国石油和化学工业联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 1670-2008/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"增塑剂热稳定性试验/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国石油和化学工业联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 16998-1997/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"热熔胶粘剂热稳定性测定/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国石油和化学工业联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 1711-1989/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"颜料在烘干型漆料中热稳定性的比较/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国石油和化学工业联合会/span/p/td/trtr style=" height:17px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspanGB/T 14634.3-2010/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspan style="font-family:宋体"灯用稀土三基色荧光粉试验方法/span span style="font-family:宋体"第/spanspan3/spanspan style="font-family:宋体"部份:热稳定性的测定/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspan style="font-family:宋体"国家标准化管理委员会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 23800-2009/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"有机热载体热稳定性测定法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"国家标准化管理委员会/span/p/td/trtr style=" height:17px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspanGB/T 23595.4-2009/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspan style="font-family:宋体"白光/spanspanLED/spanspan style="font-family:宋体"灯用稀土黄色荧光粉试验方法/span span style="font-family:宋体"第/spanspan4/spanspan style="font-family:宋体"部分:热稳定性的测定/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="17"pspan style="font-family:宋体"国家标准化管理委员会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 10701-2008/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"石英玻璃热稳定性试验方法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"中国建筑材料联合会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 13464-2008/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"物质热稳定性的热分析试验方法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"应急管理部/span/p/td/trtr style=" height:19px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="19"pspanGB/T 22232-2008/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="19"pspan style="font-family:宋体"化学物质的热稳定性测定/span span style="font-family:宋体"差示扫描量热法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="19"pspan style="font-family:宋体"国家标准化管理委员会/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanGB/T 15595-2008/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px 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valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"煤的热稳定性分级/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"国家安全生产监督管理总局/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanYS/T 1264-2018/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"钛合金热稳定性能试验方法/span/p/tdtd width="225" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan style="font-family:宋体"工业和信息化部/span/p/td/trtr style=" height:18px"td width="147" nowrap="" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspanEJ/T 689-2016/span/p/tdtd width="368" valign="top" style="border: 1px solid rgb(0, 0, 0) padding: 5px " height="18"pspan 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  • ​研究蛋白质热稳定性的几种方法
    研究蛋白质热稳定性的几种方法蛋白跟核酸不一样,核酸都是由四个碱基组成,只是组成的顺序不一样,但是整体的结构都是类似的双螺旋结构。而蛋白由20多种不同氨基酸组成,需要折叠成正确的三维结构才能发挥自身作用。所以每个不同功能的蛋白长得样子其实都是不同的。蛋白的高级结构决定其功能,行使功能需要正确折叠。蛋白由20多种不同氨基酸组成,需要折叠成正确的三维结构才能发挥自身作用。蛋白质在一定的物理和化学条件(加热、加压、脱水、振荡、紫外线照射、超声波、强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基硫酸钠)下,其空间构象容易发生改变而失活,因此研究蛋白的构象和构型变化对其应用有重要的价值。蛋白质的变性作用主要是由于蛋白质分子内部的结构被破坏。天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持的,而变性后次级键被破坏,蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构(但一级结构并未改变)。热变性是蛋白质变性中最常见的一类现象。蛋白质的热稳定性是指蛋白质多肽链在温度影响下的形变能力,主要体现在温度改变时多肽链独特的化学特性和空间构象的变化,变化越小热稳定性越高。蛋白质的热稳定性受到不同温度、pH值、离子强度等外界因素的影响,在生物技术、药物研发以及食品工业等领域,具有重要意义。蛋白质变性温度是生物学家们研究蛋白质的热稳定性的一个重要的概念,是指蛋白质在特定温度条件下受到热力作用时,其结构发生变化的温度点,一般温度较高时,蛋白质从稳定的三维结构变化成松散的无序结构。蛋白质的热稳定性一般使用热变性中点温度(meltingtemperature,Tm)来表示,即蛋白质解折叠50%时的温度。蛋白质的热变性过程与其空间构象的改变密切相关,Tm值能反映变温过程中蛋白质构象改变的趋势,是衡量蛋白质热稳定性的一个重要指标。蛋白质Tm值的测定在生物医药行业具有广泛的应用,如嗜热蛋白、工业酶等的改造与筛选,蛋白质药物与配体、制剂或辅料的相互作用,蛋白质药物的缓冲液稳定条件筛选等。目前,许多多种方法可以用来测量蛋白质的变性温度,如圆二色光谱法(circulardichroism,CD)、差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)、动态光散射法(DynamicLightScattering)和差示扫描荧光法(differentialscanningfluorimetry,DSF)等。 目前,许多多种方法可以用来测量蛋白质的变性温度,如圆二色光谱法(circulardichroism,CD)、差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)、动态光散射法(DynamicLightScattering)和差示扫描荧光法(differentialscanningfluorimetry,DSF)等。 01 圆二色谱法(CD)圆二色光谱(简称CD),或红外(傅里叶变换红外(FourierTransformInfrared,FTIR)光谱),是应用最为广泛的测定蛋白质二级结构的方法,是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单的方法。圆二色谱法诞生于20世纪60年代,其原理是利用左、右两束偏振光透过具有手性结构的生物大分子等活性介质,获得的圆二色谱来分析其结构特点,是蛋白质、核酸、糖类等生物大分子二级结构分析的常规手段之一。蛋白由α螺旋和β折叠构成,α螺旋和β折叠在红外和紫外光段有特异的光吸收。蛋白质对左旋和右旋圆偏振光的吸收存在差异,利用远紫外区(190~260nm)的光谱特征能够快速分析出溶液中蛋白质的二级结构,进而分析和辨别出蛋白质的三级结构类型,变温过程中测量蛋白等物质的圆二色谱,能反映其随温度升高结构变化的趋势。此外,通过测定蛋白质在不同温度下的平均残基摩尔椭圆度[θ]可以获得蛋白质的Tm值。 特点:圆二色光谱(CD)适用于测定稀释溶液的热稳定性,操作相对简单,成本较低。但是相关仪器很昂贵,对缓冲液要求也高,要求溶液不能有任何的紫外吸收,也很难做到高通量检测。 02 差示扫描量热法(DSC) 蛋白变性时会有温度变化,检测温度变化就能知道蛋白变性程度。差示扫描量热法的应用始于20世纪60年代,是在程序控温下,通过测量输给待测物和参比物的功率差与温度的关系,以获得吸放热量的技术。差示扫描量热法能定量测量热力学参数,可提供与蛋白质热变性过程中构象变化有关的热效应信息。差示扫描量热法(DSC)是一个很经典的一个技术,基于的蛋白变性过程中对热量的吸收。蛋白是有三维结构的,比如氢键,疏水键,范德华力。一旦通过加热然后把结构破坏掉,需要吸收热量。所以可以测量热量变化,就是加热结构变化过程中的热量吸收。通过对参照物和样品同时进行升温或冷却处理,测定两者为保持相同温度所产生的热量差,从而计算蛋白质的Tm值。 特点:差示扫描量热法(DSC)能够提供直接的热量变化数据,定量准确、操作简便。但检测通量低、耗时较长,需要的样品体积和浓度比较大。相关仪器中最核心的部件是样品池,对周围环境要求极高。 03 动态光散射法(DLS)动态光散射是基于光学的方法,检测的是蛋白变性之后会发生聚集,导致颗粒的大小发生改变,对散射信号的影响。蛋白在变性过程中,从一个规则高级折叠结构打开,变成一个线性的松散结构。本来外部是亲水的氨基酸,内部是疏水的氨基酸。一旦打开之后,这些疏水的氨基酸会相互就是结合到一起。就是因为疏水的一个相互作用,然后变成一个球状聚集体。此过程会引起这个光的散射的变化。基于动态光散射的信号随着加热的过程的变化就代表粒径的变化,可以计算出蛋白质的Tm值。动态光散射用于表征蛋白质、高分子、胶束、糖和纳米颗粒的尺寸。如果系统是单分散的,颗粒的平均有效直径可以求出来,这一测量取决于颗粒的心,表面结构,颗粒的浓度和介质中的离子种类。DLS也可以用于稳定性研究,通过测量不同时间的粒径分布,可以展现颗粒随时间聚沉的趋势。随着微粒的聚沉,具有较大粒径的颗粒变多。同样,DLS也可以用来分析温度对稳定性的影响。特点:动态光散射可以做到孔板式的检测,具有比较高的通量。但是对于某些样品的检测有限制,因为并不是所有的蛋白在变异之后都会形成这种聚集体,而有一些可能需要很高的浓度才会提升,浓度较低条件下,就观察不到粒径的变化。 04 外源差示扫描荧光法(DSF)差示扫描荧光(DSF)也被称为热荧光法(ThermoFluor),是一种经济高效且易于使用的生物物理技术,通过检测当温度升高或变性剂存在时荧光发射光谱的相应变化来确定蛋白质的变性温度(热变性温度Tm值或化学变性Cm值)。Pantoliano等最先应用此技术测定了上百种蛋白质的热稳定性。差示扫描荧光法分为添加外源荧光染料与不添加荧光染料两种方式,都是利用加热使蛋白内部疏水基团暴露这一特点进行检测Tm值。传统DSF经常使用350/330比值法来进行数据分析根据荧光源不同分为内源荧光DSF和外源荧光染料DSF。基于外源染料荧光的DSF其原理是利用能与蛋白内部疏水基团相互作用的染料为荧光源。蛋白质加热变性后疏水基团暴露,疏水基团与亲和性染料结合产生荧光信号,检测荧光强度变化测定蛋白质的Tm值。特点:借助荧光定量PCR适用于高通量筛选,信号强度可控,灵敏度和准确性都较高。但添加的外源染料可能会对蛋白质结构和功能产生影响,且操作较复杂,不适用于所有蛋白研究。比如做膜蛋白研究时,溶液环境中需要添加双亲性的分子,一端疏水一端亲水。这种情况荧光分子会直接结合到疏水端,导致直接产生荧光信号。并且染料种类的选择、浓度的选择也很繁琐。外源荧光染料DSF也可能会产生背景荧光以及非特异吸附等假阳性结果。 05 内源差示扫描荧光法(inDSF)内源差式扫描荧光inDSF,基于蛋白质中特定氨基酸的荧光特性。这些氨基酸的荧光强度与其所处的微环境密切相关,因此,当蛋白质的结构发生变化时,这些氨基酸的荧光信号也会随之改变。不需要额外的荧光染料加入到检测体系中,利用蛋白内部芳香族氨基酸的自发光原理。不需要任何额外的标记或固定步骤,避免引入结果的不确定性。研究发现,蛋白质分子中芳香环氨基酸在处于不同极性的微环境时(如疏水或亲水环境中),其被激发的内源荧光的最大发射光谱会发生位移。蛋白质中内源荧光主要来自含芳香环氨基酸如色氨酸(Trp),苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr),其中以色氨酸内源荧光最强。当它在蛋白内部时,发射光主要在330波段,当蛋白一旦去折叠,暴露在溶剂中,发出的光就会从330波长红移到350。所以通过280激发,检测330/350的比值变化,就能测量蛋白质的Tm值。以色氨酸为例,在蛋白质疏水的内核微环境中,其内源荧光最大发射波长在330nm左右,而在亲水的极性微环境中,色氨酸的内源荧光最大发射波长则出现在350nm左右。蛋白质热变性或者化学变性通常会导致色氨酸残基周围微环境的极性发生变化,使通常被包埋于蛋白质疏水内核的色氨酸逐渐暴露于亲水的环境中,从而导致发射内源荧光最大发射波长发生红移(RedShift),即向更大的波长区域移动。特点:内源差式扫描荧光DSF无需复杂的样品处理或标记步骤,实验过程简单方便。但不是所有蛋白质都含有足够的荧光基团,所以对于部分样品检测灵敏度不够,且检测可能会受其他基团影响。 06 技术对比总结总得来说,DSF和DLS法在样品用量及测定效率上更有优势,比较适合进行高通量筛选。但DSF法需要样品含有色氨酸、酪氨酸或额外添加荧光染料,这可能会对样品测量范围带来一定限制,DLS对样品浓度有要求。DLS还可以获取聚集体粒径大小的信息。DSC法虽然在样品用量与检测效率上不及DSF,但作为量热的经典方法仍是不可缺少的Tm值测量手段,在进行批量样品的热稳定性筛选时,可以使用DSF法初筛,DSC法复筛。此外,DSC能测定蛋白质变性过程中的热容变化ΔCp、焓变ΔH、解折叠自由能ΔG、玻璃态转变温度、分子流动临界温度等其他重要热力学参数。CD作为检测蛋白二级结构的经典方法,在Tm值测定方面具有其独特优势和一定的局限性,也是研究加热过程中蛋白结构改变的重要方法。蛋白质Tm值测定具有重要的实际应用价值,例如辅助生物药物开发、生产和质量控制,评估生物相似性、优化蛋白药物配方等,还可以作为探索蛋白质高级结构的手段之一指导蛋白质工程,如比较不同突变对蛋白质稳定性的影响,研究结构域改变与功能活性改变关联性等。比较不同Tm值测定方法,全面了解技术特点及测量效果对于Tm值测定的实际应用具有一定的指导意义,在科研或生产工作中可以灵活选用或联用多种技术来阐明不同条件下的结构变化特点。 07 国产蛋白稳定性分析仪PSA-16 北京佰司特科技有限责任公司于2023-10-01日推出了自主研发的第一款国产蛋白稳定性分析仪,该设备性能和参数达到进口设备的水平,价格却远低于进口产品,弥补了目前国产自主设备在蛋白稳定性专业研究分析领域的空白。多功能蛋白稳定性分析仪PSA-16是一款无需荧光染料、高通量、低样品消耗量的检测蛋白质稳定性的设备。该设备基于内源差示扫描荧光技术(intrinsic fluorescence DSF),通过检测温度变化/变性剂浓度变化过程中蛋白内源紫外荧光的改变,获得蛋白质的热稳定性(Tm值)、化学稳定性(Cm值)等参数。可应用于蛋白缓冲液条件筛选及优化、小分子与蛋白结合情况的定性测定、蛋白质修饰及改造后的稳定性测定、蛋白变/复性研究、不同批次间蛋白稳定性对比等多个方面。 多功能蛋白稳定性分析仪PSA-16应用涵盖植物、生物学、动物科学、动物医学、微生物学、工业发酵、环境科学、农业基础、蛋白质工程等多学科领域。蛋白质是最终决定功能的生物分子,其参与和影响着整个生命活动过程。现代分子生物学、环境科学、动医动科、农业基础等多种学科研究的很多方向都涉及蛋白质功能研究,以及其下游的各种生物物理、生物化学方法分析,提供稳定的蛋白质样品是所有蛋白质研究的先决条件。因此多功能蛋白稳定性分析仪PSA-16在各学科的研究中都有重要的意义。1. 抗体或疫苗制剂、酶制剂的高通量筛选 2. 抗体或疫苗、酶制剂的化学稳定性、长期稳定性评估、等温稳定性研究等3. 生物仿制药相似性研究(Biosimilar Evaluation)4. 抗体偶联药物(ADC)研究5. 多结构域去折叠特性研究6. 物理和化学条件强制降解研究7. 蛋白质变复性研究(复性能力、复性动力学等)8. 膜蛋白去垢剂筛选,膜蛋白结合配体筛选(Thermal Shift Assay)9. 基于靶标的高通量小分子药物筛选(Thermal Shift Assay)10. 蛋白纯化条件快速优化等
  • 【热点应用】揭秘蛋白质的热稳定性!
    #本文由马尔文帕纳科医药业务发展经理 韩佩韦博士供稿# 蛋白质的热稳定性研究对于加深对蛋白质的结构和功能的了解有着非常重要的意义。差示扫描量热技术(DSC)是直接测量热转变过程焓变(ΔH)唯一的分析方法,例如蛋白质,核酸或其他生物多聚物的热变性过程,为表征蛋白质及其他生物分子的热稳定性建立“金标准”技术。 一、焓变对于蛋白质的稳定性意味着什么? 1,什么是焓(hán)变(ΔH)? ΔH(焓变)是在恒压状态下将系统升高至温度T过程中摄取的总能量。对于蛋白质而言,这意味着用于使蛋白质发生去折叠所花费的能量(热量),此过程中 ΔH 是为正值,代表这是一个吸热过程。这种能量与蛋白质中所有原子和分子运动相关,以及维系蛋白质保持折叠构象中的键能。 通过将吸热谱图下方的面积进行积分(见图 1)可以计算得到焓变(ΔH)。焓变用每摩尔蛋白质的吸收的卡路里(或焦耳)来表示。由于蛋白质在 DSC 实验中暴露于升高的温度,因此蛋白质开始发生热变性,并伴随着非共价键的断裂。焓变(ΔH)与维系蛋白质天然(折叠)构象中所需的价键数量有关。焓变(ΔH)也取决于我们测量总蛋白质浓度的准确程度。如果蛋白质浓度不是很准确, 则会影响到计算出的ΔH值。 2,焓变(ΔH)值可以在实践中告诉我们什么? 当您比较不同蛋白质的DSC结果时,具有较大ΔH值的蛋白质不一定比具有较小ΔH的蛋白质更稳定。由于ΔH值会对蛋白质摩尔浓度归一化,因此该值通常与蛋白质的尺寸成比例。大多数蛋白质具有相同的键密度(单位体积内的价键数量),因此,期待具有较大分子量的蛋白质也具有较大的焓变(ΔH)值也是合理的。 3,焓变(ΔH)的决定因素是什么? 焓变(ΔH)取决于溶液中天然蛋白质的百分比。 一个非常重要的考虑是DSC仅测量初始处于折叠(天然)构象中的蛋白质的ΔH值。ΔH值取决于具有折叠(活性)构象的浓度。如果初始折叠蛋白质组分小于总蛋白质浓度(即活性浓度小于100%),则计算出的ΔH值将相应地变小。 下图显示了在储存期间的不同时间测量的相同蛋白质的DSC图谱。蓝色曲线图谱表示新鲜制备的蛋白质,是100%天然(折叠)蛋白质。当蛋白质样品在储存期间发生部分变性时,溶液中的天然蛋白质的比例开始下降,导致DSC图谱的焓变降低。当我们拥有100%天然蛋白质的参考DSC图谱时,我们可以根据不同状态样品的相对ΔH值来估计每个样品中的折叠蛋白质比例。 4,如何判断蛋白质是否失活? 到目前为止,我们已提及的焓变是指通过DSC仪器直接测量到的“热”焓,也就是热力学焓变,通常表示为ΔHcal,这是其他任何非量热技术,例如圆二色谱(CD),表面等离子共振(SPR)等技术不能获取的焓变量。 还有另一种其他技术可以获取的焓变类型,即范霍夫焓变 - ΔHVH,我们同样可以通过DSC数据计算得出。范霍夫焓变(ΔHVH)可从通过DSC非两状态模型(non-2-state model)拟合得到。 两种不同的焓变对蛋白质热稳定性的测定又有什么实际意义呢? 在DSC技术中,ΔHcal仅由DSC热转变峰曲线积分的面积来确定,而ΔHVH仅通过热转变峰曲线的形状来确定。转变峰形越尖锐,ΔHVH越大,反之亦然。ΔHcal是具有浓度依赖性的,但ΔHVH不是。 若ΔHcal/ΔHVH比例为1,通常意味着所研究的热转变状态符合两状态去折叠(Two-state unfolding model)模型。如果ΔHcal/ΔHVH比例大于1,则意味着存在显著密集的中间体存在 而ΔHcal/ΔHVH比小于1,则意味着存在分子间相互作用。 使用ΔHcal/ΔHVH可以帮我们估测是否有很大部分蛋白质是失活的。如果我们有一个简单的单结构域蛋白质,并且假定没有中间体,则我们可以预测,其去折叠过程的ΔHcal/ΔHVH的比值不会远离1。因此,如果ΔHcal显著低于ΔHVH,可以表明很大部分蛋白质已经失活。 综上所述,对DSC中ΔH数据的分析可以让我们了解蛋白质的去折叠机制,以及多少蛋白质处于其活性的天然构象。 二、TM值如何与和蛋白质稳定性相关? 中点转变温度TM我们可以从DSC数据中提取多个热力学参数,例如ΔH,ΔHVH(范霍夫焓变),ΔCP和ΔG,但最广泛使用的参数是TM。顺便提一下,这也是最容易和最准确的值 - TM是最大峰值所对应的温度。 “蛋白质稳定性”有多种定义。最常见的是,对于工业上有重要意义的蛋白质,该术语是指在生理温度下的功能(或操作)稳定性 即,他们可以在37°C下发挥多长时间的生物功能?这可以通过需要花几天或数周时间的等温研究来评估,或者,如果使用差示扫描量热法(DSC),则可以在几分钟内变性蛋白质。 通过DSC获得的哪个热力学参数与功能稳定性相关度最佳?事实证明,是TM值。 热力学稳定性(ΔG)是功能稳定性的较差的预测因子 技术上,ΔG仅适用于可逆去折叠过程,此外,它由TM,ΔH和ΔCP计算得到,后者可能很难获取。 一个例子是TM和ΔG与人肉杆菌蛋白抗原血清型C的半数聚集时间(half time)(作为功能稳定性的量度)的相关性,用作模型蛋白。ΔG与T1 / 2 agg. 相关系数(R)仅为0.4,而TM 与 T1 / 2 agg.的相关系数是0.92。(来自J Pharm Sci的数据,2011 Mar 100(3):836-48) 思考TM的一种方式: 如下图所示,假设我们用 DSC 扫描两种不同配方中的蛋白质或两种不同的蛋白质构建体,则 TM 值向低温方向 5℃ 的负偏移(稳定性下降)实际上反映了在 37℃ 条件下的 Fu (蛋白去折叠比例)由2%增加到 3%。温度 T 下的 Fu 蛋白可以通过图像化的方式估算,即温度 T 以下的曲线下阴影区域面积和整个曲线下方面积的百分比。 由于聚集体的生成可能是浓度依赖的过程,因此较高浓度的去折叠蛋白质(红色扫描曲线)将导致较快的聚合(更大组分的去折叠状态(U)才能转换为不可逆变性状态(I)。参见下面的原理图。 这种解析的一个推论是,曲线的整体形状应该是相似的。我们假定这种情况是对于在不同配方中的相同蛋白质或由一个母分子衍生出来的具有相似构建体的蛋白质。但是,对于完全不同的蛋白质,使用TM值作为用于稳定性比较的预测指标则应该谨慎使用。 扩展阅读(www.malvernpanalytical.com)Differential Scanning Calorimetry (DSC): Theory andpracticeDifferential Scanning Calorimetry (DSC) forBiopharmaceutical Development: Versatility and PowerThe Power of Heat: Digging Deeper with DifferentialScanning Calorimetry to Study Key Protein Characteristics PEAQ-DSC 微量热差示扫描量热仪:DSC差式扫描量热法(DSC)是一种直接分析天然蛋白质或其他生物分子热稳定性的技术,无需外在荧光素或者内源荧光,它通过测定在恒定的升温速率下使生物分子发生热变性过程中的热容变化来实现。 马尔文帕纳科 MICROCLA PEAQ-DSC 微量热差示扫描量热仪能够帮助用户快速确认维持高级结构稳定性的最佳条件,提供简介、无缝的工作流程和自动化批量数据分析,其所提供的热稳定性信息被业内视为“金标准”技术,是一种非标记、全局性的数据。 关于马尔文帕纳科马尔文帕纳科的使命是通过对材料进行化学、物性和结构分析,打造出更胜一筹的客户导向型创新解决方案和服务,从而提高效率和产生可观的经济效益。通过利用包括人工智能和预测分析在内的最近技术发展,我们能够逐步实现这一目标。这将让各个行业和组织的科学家和工程师可解决一系列难题,如最大程度地提高生产率、开发更高质量的产品,并缩短产品上市时间。
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