蛋白标记物

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蛋白标记物相关的耗材

  • MO-L018 | 最常用 RED-tris-NTA 蛋白标记试剂盒(His-Tag 标记-RED Channel)
    NanoTemper 推出 MO His-Tag 蛋白标记试剂盒,通过产生更高的结合振幅和优化的信噪比,提高了 MST 数据质量,使得研究比较复杂样品结合亲和力变得更容易。该试剂盒可特异性地标记含有组氨酸标签的蛋白或多肽。此试剂盒既可以标记纯化的蛋白,亦可标记粗提蛋白样品(如细胞裂解液),所含的染料最多可做 500 MST 数据点。红色染料适用于配备有红色探测器的 MO NT.115 和 MO NT.Automated 仪器 (Nano 和 Pico)。
  • MO-L003 | BLUE-NHS 蛋白标记试剂盒(氨基标记--BLUE Channel)
    NanoTemper 推出 MO BLUE-NHS 蛋白标记试剂盒(氨基标记),包含所需的标记和染料去除试剂。该染料活性 NHS 酯基可与伯胺(赖氨酸残基)反应形成共价键。该试剂盒适用于标记分子量大于 5 kDa 且浓度介于 2–20 μM 之间的蛋白样品。该染料适用于配备有蓝色探测器的 MO NT.115 系列和 MO NT.Automated 仪器 (Nano 和 Pico)。
  • MO-L011 | 最常用-RED-NHS 蛋白标记试剂盒(氨基标记-RED Channel)
    NanoTemper 推出 MO RED-NHS 蛋白标记试剂盒,有效提高了信号的信噪比,提高数据质量,使得研究复杂样品体系变得更容易。试剂盒含有标记和去除染料所需的所有试剂。该染料活性 NHS 酯基可与伯胺(赖氨酸残基)反应形成共价键。标记适用于蛋白分子量大于 5 kDa 且浓度于 2–20 μM 的样品。红色染料适用于配备有红色探测器的 MO NT.115 系列和 MO NT.Automated 仪器 (Nano 和 Pico)。

蛋白标记物相关的仪器

  • 安捷伦宽范围蛋白质 P240 试剂盒旨在为包括单克隆抗体、可溶性组分、膜组分和粗裂解物(分子量最高可达 240 kDa)在内的多种蛋白质提供解决方案。 两次运行之间可完全恢复毛细管电泳环境,确保了蛋白质分析的高度一致性。宽范围蛋白质 P240 试剂盒可在 30 min 内为 10 至 240 kDa 的蛋白的分离提供高分辨率结果。这样可以在单次自动电泳运行中分析宽分子量范围的复杂样品。 快速共价标记法避免了分析区域出现系统峰,同时提供了 3 个数量级的动态范围,能够检测低至 0.1% 的杂质。特性:快速分析 — 在大约 30 min 内平行分离 12 个样品准备时间短 — 只需 10 分钟的手动操作时间即可准备好样品广泛的定量范围 — 支持 2-2000 ng/µ L 的起始样品浓度支持各种样品类型 — 能够可靠地分离各种难分离的蛋白质样品,如膜蛋白和粗裂解物高分辨率 — 明确分离糖基化和非糖基化亚型无系统峰干扰 — 共价标记法可消除分离中的共迁移系统峰适用于多种应用 — 能够在还原和非还原条件下分析样品性能指标:保质期4 个月分子量测定范围LM only: 10 - 240 kDa LM and UM: 10 - 200 kDa bp分析时间30 min / 11 samples + 1 ladder min定量精度 25 % CV定量范围2 - 2,000 ng/µ L for BSA in PBS定量重现性20 - 2,000 ng/µ L BSA: 15% CV, 2 - 20 ng/µ L BSA: 25 % CV样品量1 µ L每个试剂盒的使用次数275灵敏度1 ng/µ L (BSA),CAII 的 PBS 溶液片段大小测定准确度LM only: 15% for BSA, CAII LM and UM: 10% for BSA, CAII片段大小测定分辨率 10% molecular weight resolution between 15 to 150 kDa (based upon ladder) R≥1 NIST mAb NGHC/HC (using reduced conditions) %片段大小测定精度LM only: 8% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1, and NIST mAb (using reduced conditions), 10% CV for intact NIST mAb (using non-reduced conditions) LM and UM: 5% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1 and NIST mAb (using reduced conditions) % CV
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  • 仪器简介:1. Bio-Plex蛋白芯片系统是定量监测生理活动中关键分子的理想工具。在一滴样品(12ul)中,可以同时定量检测100种不同的蛋白、多肽、生物标记分子、或DNA分子的表达或活动水平。2. 使用该蛋白芯片系统,研究者可以从稀有、珍贵或极少量的样品中获得大量有价值的信息,数据管理分析软件可以帮助用户解析有关数据之间的复杂关系,并以直观的统计图标显示出来,同时大幅度地减少操作时间、试剂的消耗和工作量。大大加快药理、病理、药物筛选、临床实验等的进程。3. 仪器配备有校验试剂盒和校验程序,保证检测的准确性和减少系统误差、样品批间误差。4. Bio-Rad公司提供部分检测试剂,并提供半成品试剂盒,用户可以用自己的抗体自己制作检测试剂系统。对于大规模检测的用户,Bio-Rad可以专门为其开发试剂系统。技术参数:1.532nm、635nm双激光检测,灵敏度10pg/ml2.Inter- and Intra-Assay CV10%3.检测范围1-32,000pg/ml4.回收率,血清:80-120%,培养细胞:90-110%5.30分钟检测96个样品,最多可得9600个数据主要特点:1.一滴样品(12ul)可以同时定量检测100种目标分子2.在极短时间里方便地获得大规模高质量的数据3.提供检测试剂盒并可以帮用户开发特定的试剂系统4.计算机自动以直观的统计图显示数据分析结果5.使用96孔酶标板处理样品,与实验室现有系统兼容
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  • Prometheus Panta蛋白稳定性分析仪[ 稳定可靠地提供高分辨率的稳定性表征 ]产品简介:Prometheus Panta蛋白稳定性分析仪可搭载微量差示扫描荧光nanoDSF (nano Differential Scanning Fluorimetry)技术、动态光散射DLS (Dynamic Light Scattering)技术、静态光散射SLS (Static Light Scattering) 技术以及背反射(Backreflection)技术模块,首次实现在整个热升温过程中,【同时且实时地】检测样品构象、粒径和聚集变化,实现对生物制品进行高分辨率、多维度的稳定性表征,监测整个生物制品研发和生产流程中的关键环节,加速生物药开发进程。技术原理PR Panta 可搭载四项技术模块,使您深入洞察目标样本。&bull 差示扫描荧光 (nanoDSF):无标记测量热稳定性或化学稳定性&bull 动态光散射 (DLS):测量样品中分子的大小分布&bull 静态光散射 (SLS):关联散射强度与粒子分子量&bull 背反射 (Backreflection):检测聚集状态产品优势:&bull 四大技术模块:可灵活升级,可同时开启&bull 无需标记样品:利用蛋白质内源荧光检测,无需添加染料,可进行无标记Thermal Shift Assay&bull 操作简便:仅需 10μL 样品,通过毛细作用加载样本,一“吸”一“放”即检测&bull 可升级自动化机械臂,实现全自动无人值守&bull 兼容去垢剂,可检测高粘度样品&bull 无液流系统,免维护应用领域:&bull 抗体等蛋白制品制剂筛选&bull 抗体等蛋白制品长期储存稳定性预测&bull 抗体等蛋白制品质量控制&bull Biosimilar一致性评价&bull 蛋白纯化及储存缓冲液条件筛选&bull 膜蛋白去垢剂筛选&bull 配体结合筛选(TSA试验)案例概述【蛋白液 - 液相分离药物开发】:上海奕拓生物和上海中国科学院生物与化学交叉研究中心朱继东/朱光亚团队合作的研究显示配体活化AR可以形成转录活性的聚合物。AR的结构化和非结构化区域都有助于AR的有效相分离,无序N端起主要作用。AR液-液相分离行为具有转录活性和抗雄激素功效。抗雄激素可以以配体独立的方式促进AR抗性突变体的相分离和转录活性。该研究进行了基于相分离的表型筛选,并鉴定了ET516分子,ET516特异性破坏AR聚合物,有效抑制AR转录活性,并抑制表达 AR抗性突变体的前列腺癌细胞的增殖和肿瘤生长。 通过PR蛋白稳定性分析仪完成了 Thermal Shift Assay,验证了ET516小分子与蛋白间的结合。研究人员还使用Monolith分子互作仪定量检测了ET516小分子与蛋白的亲和力。研究的结果表明液-液相分离是一种新的耐药机制,并表明靶向相分离可能为药物发现提供一种可行的途径。Xie, J., He, H., Kong, W. et al. Targeting androgen receptor phase separation to overcome antiandrogen resistance. Nat Chem Biol 18, 1341–1350 (2022).耗材支持:&bull NanoTemper在线商城小程序(微信搜索)&bull NanoTemper官网关于NanoTemper: 德国NanoTemper始创于2008年,总部位于慕尼黑。作为全球知名的科学仪器制造商,历经十余载发展,在全球13个国家设立分支机构。 我们始终致力于为蛋白质分析研究提供更加优质的解决方案。基于专利微量热泳动技术(MST)、微量差示扫描荧光技术(nanoDSF)和光谱位移技术(Spectral Shift)等创新技术,公司先后推出分子相互作用检测仪(Monolith系列)、蛋白稳定性分析仪(Prometheus 系列)、高通量亲和力筛选系统(Dianthus系列)以及新品蛋白质表达和功能快速筛选系统 ( Andromeda X )。 NanoTemper以优质的产品与服务迅速赢得全球知名药企、生物技术公司、服务公司和科研机构的好评,成为优选合作伙伴。需要更多信息或希望获得个性化解决方案?请随时联系我们~
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蛋白标记物相关的方案

  • 人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒
    人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗原、生物素化的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  • 人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)检测试剂盒
    人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)检测试剂盒人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)抗原、生物素化的人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  • 绿色荧光蛋白GFP的应用
    绿色荧光蛋白GFP的应用绿色荧光蛋白GFP的应用主要集中在利用其荧光性质的基础上作为一种标记物。1 绿色荧光蛋白GFP在分子生物学上的应用1.1 绿色荧光蛋白GFP作为报告基因 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的DNA,如传统的荧光素酶(LUX)基因和β-葡萄糖苷酶(GUS)基因。绿色荧光蛋白GFP作为基因报告可用来检测转基因效率,把绿色荧光蛋白GFP基因连接到目的基因的启动子之后,通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前,此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用,特别是在活细胞基因表达的时空成像方面。 1.2 绿色荧光蛋白GFP作为融合标签绿色荧光蛋白GFP最成功的一类应用就是把绿色荧光蛋白GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用,或者靶向标记某些细胞器。在多数情况下,绿色荧光蛋白GFP基因在N-或C-末端与异源基因用常规的分子生物学手段就可以接合构成编码融合蛋白的嵌合基因,其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性,又表现出与天然GFP相似的荧光特性。GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记,不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移,还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化,并依靠荧光共振能量转移即FRET来进行检测。

蛋白标记物相关的论坛

  • 【讨论】CE中蛋白的标记问题

    各位,用标记物对蛋白质进行标记时常用EDC和NHS,有文献标记方法如下:1、先配标记液 标记物+EDC+NHS 2、用标记液对蛋白进行标记。个人现有疑问:EDC作为交联剂,主要使氨基和羧基聚合,如果标记液中EDC过量的话,再用其标记蛋白质,同时应该会使蛋白质自身的氨基和羧基发生聚合反应而降低标记效率,那有什么办法可以消除这种影响呢?希望大家指导!谢谢。顺便有啥好的标记方法请提供参考!再次感谢!

  • 生物素蛋白标记常见问题及注意事项

    [font=宋体][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统 [/font][font=Calibri](biotin-avidin system[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]BAS)[/font][font=宋体],是[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]年代后期应用于免疫学,并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点,两者的亲和常数([/font][font=Calibri]K=1015 mol/L[/font][font=宋体])比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体([/font][font=Calibri]K=105[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]1011 mol/L[/font][font=宋体])至少高[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万倍,是目前已知强度最高的非共价作用,这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品,拥有[/font][font=Calibri]Avi-tag[/font][font=宋体]定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白,覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势,适用于[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biopanning[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SPR / BLI[/font][font=宋体]等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素蛋白标记常见问题:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、什么是生物素标记蛋白[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在生物化学中,生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素亲和常数至少比抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体高一万倍[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此,生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现,也为类似于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验简化了流程,提高了效率。此外,由于生物素的小尺寸([/font][font=Calibri]MW = 244.31g / mol[/font][font=宋体]),不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、生物素标记蛋白有哪些应用?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析,将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液,[/font] [font=宋体]改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢?这需要非常严苛的条件(例如,[/font][font=Calibri]pH=1.5[/font][font=宋体]的 [/font][font=Calibri]GuHCl[/font][font=宋体]),这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质,最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密,但是在降低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]以后,亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低[/font][font=Calibri]pH([/font][font=宋体]约[/font][font=Calibri]pH=4)[/font][font=宋体]从柱子上释放。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫检测中的应用:在常规[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]原理的基础上,结合生物素[/font][font=Calibri](B)[/font][font=宋体]与亲和素[/font][font=Calibri](A)[/font][font=宋体]间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如抗体等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]分子的目的。 这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定,[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]测定,[/font][font=Calibri]western[/font][font=宋体]印迹和其他免疫分析方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]生物素标记注意事项:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类(氨基、醛基或巯基)以及分子的酸碱性,选择相应的活化生物素和反应条件;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、标记反应时,活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例;生物素:[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]用量比[/font][font=Calibri](mg/mg)[/font][font=宋体]宜为[/font][font=Calibri]2:1, IgG[/font][font=宋体]应用浓度[/font][font=Calibri]0.5~5[/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/ml [/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]1~3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ag[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/Ab[/font][font=宋体];[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、为减少空间位阻影响,可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性;标记酶时则结果有不同。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记蛋白[/b][/url]详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font]

  • FITC标记蛋白步骤及常见问题解析

    [font=宋体][font=宋体]荧光素异硫氰酸酯([/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体])是一种常用的荧光染料,它可以与蛋白质分子中的氨基、巯基或羟基等基团结合,从而实现对蛋白质的标记。[/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记的蛋白质可以用于免疫荧光、流式细胞术等实验中,具有很高的灵敏度和特异性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]下面是[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的一般步骤:[/font][/font][/b][font=宋体]①准备蛋白质溶液:将需要标记的蛋白质溶解在适当的缓冲液中,使其浓度达到适当的标记浓度。[/font][font=宋体][font=宋体]②准备 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶液:将 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶解在 [/font][font=Calibri]DMSO [/font][font=宋体]中,制成浓度为 [/font][font=Calibri]1mg/mL [/font][font=宋体]的储备液。使用前,将储备液稀释到适当的标记浓度。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③标记反应:将蛋白质溶液和 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]溶液混合,使蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的摩尔比为 [/font][font=Calibri]1:10 [/font][font=宋体]至 [/font][font=Calibri]1:50[/font][font=宋体]。在反应体系中加入适量的缓冲液,使总体积为 [/font][font=Calibri]100uL [/font][font=宋体]左右。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④反应条件:将反应体系置于室温或 [/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下孵育 [/font][font=Calibri]1-2 [/font][font=宋体]小时,以促进标记反应的进行。[/font][/font][font=宋体]⑤终止反应:标记反应结束后,加入适量的终止液(如甘氨酸或硼酸缓冲液),以终止反应。[/font][font=宋体][font=宋体]⑥纯化标记蛋白:为了去除未结合的 [/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体],可以使用凝胶过滤、透析或离心等方法对标记蛋白进行纯化。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑦储存标记蛋白:将纯化后的标记蛋白储存于适当的缓冲液中,在 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]下避光保存。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]需要注意的是,[/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的效率和特异性可能会受到多种因素的影响,如蛋白质的性质、缓冲液的组成、标记条件等。因此,在进行 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白实验时,需要对每种蛋白质进行优化,以获得最佳的标记效果。同时,在实验过程中应注意避免荧光染料的淬灭和光漂白,以保证实验结果的准确性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]fitc[/font][font=宋体]标记蛋白常见问题解析:[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]哪些因素可能会影响[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白的效率和特异性?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]①蛋白质的性质:不同的蛋白质具有不同的化学性质,例如等电点、亲水性、分子量等,这些性质可能会影响蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的结合效率和特异性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②缓冲液的组成:缓冲液的 [/font][font=Calibri]pH [/font][font=宋体]值、离子强度、添加剂等都会影响蛋白质与 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]的结合效率和特异性。[/font][/font][font=宋体]③标记条件:标记反应的温度、时间、摩尔比等条件也会影响标记效率和特异性。[/font][font=宋体][font=宋体]④未结合的 [/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]:未结合的 [/font][font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]可能会与蛋白质发生非特异性结合,从而影响标记的特异性。[/font][/font][font=宋体]⑤荧光染料的淬灭和光漂白:荧光染料在光照下容易发生淬灭和光漂白,这可能会影响标记蛋白的荧光强度和稳定性。[/font][font=宋体][font=宋体]因此,在进行[/font] [font=Calibri]FITC [/font][font=宋体]标记蛋白实验时,需要对每种蛋白质进行优化,以获得最佳的标记效果。同时,在实验过程中应注意避免荧光染料的淬灭和光漂白,以保证实验结果的准确性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]fitc[/font][font=宋体]标记蛋白注意事项有哪些?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①光照控制:整个标记过程应在避光条件下进行,以减少[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]荧光淬灭的可能性。使用黑色或不透明的容器存储和操作试剂,并确保实验室内光线柔和且避免直射阳光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②温度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值调控:在标记反应过程中,严格控制温度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值。过高或过低的温度都可能影响[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]与蛋白质的结合效果,而[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值的波动也可能导致非特异性结合的增加。因此,应根据实验需求选择合适的反应条件,并进行严格的控制。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③蛋白质稳定性保护:在标记过程中,应采取措施保护蛋白质的稳定性。避免使用可能导致蛋白质变性或降解的试剂和条件,确保蛋白质在标记过程中保持其原有的结构和功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④去除未结合[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的重要性:未结合的[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]可能导致背景荧光增强,从而影响实验结果的准确性。因此,在标记后应彻底去除未结合的[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]。这可以通过多次透析或离心等方法实现,确保标记后的蛋白质纯净且荧光信号清晰。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service][b]重组蛋白服务[/b][/url],更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]重组蛋白标签[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

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蛋白标记物相关的资讯

  • 蛋白组学研究发现癌症早期诊断新标记物
    胰腺癌的早期症状相对不明显,经常导致癌细胞扩散到其他器官之后才被发现。为了改善胰腺癌病人的预后,开发早期胰腺癌检测方法变得非常重要。为了实现这一目标,来自日本的科学家们在血液中发现了一些蛋白能够加强对胰腺癌的检测。结合传统的生物标记物,能够实现对早期阶段胰腺癌的诊断,这在之前是非常困难的。  为了发现可以用于胰腺癌检测的生物标记物,研究人员决定对已经报道过在胰腺癌组织中高表达的基因进行分析。随后他们利用两种类型的蛋白质组学方法检测了大量临床样本,分析候选基因表达的蛋白在胰腺癌病人和健康人血液中的变化情况。最终在130个候选蛋白中找到23个变化显着的蛋白质。  研究人员使用质谱技术和定量蛋白组学技术对这些胰腺癌候选标记物进行了证实。为了更加高效地对大量临床样本进行分析,他们还开发了一种自动分析系统,对65名健康人和38名早期胰腺癌患者血浆中的候选蛋白进行了比对,发现IGFBP2和IGFBP3这两种蛋白在早期胰腺癌患者体内存在显着变化。除此之外,研究人员借助这两个生物标记物在15名病人中诊断出12名早期胰腺癌患者,这些病人在用另外一种叫做CA19-9的标记物进行诊断时呈阴性结果。  研究人员还发现IGFBP2和IGFBP3对于胃癌,胆囊癌,结直肠癌,十二指肠癌以及肝细胞癌的筛查也十分有效。  癌症早发现能够为实现手术完全治愈癌症提供更好的机会,因此研究人员希望这些诊断标记物的发现能够帮助提高病人的预后。相关研究结果发表在国际学术期刊PLOS ONE上。
  • 周斌组合作建立基于膜透过荧光蛋白的邻近细胞标记技术
    1月3日,国际学术期刊PNAS发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)周斌组和复旦大学附属中山医院王立新教授合作的研究成果“Genetic dissection of intercellular interactions in vivo by membrane-permeable protein”。该研究利用表达膜透过性荧光蛋白的遗传工具小鼠,建立了体内邻近细胞标记技术,并利用该技术揭示了肝脏不同区域中内皮细胞的异质性。细胞之间的相互作用对于多细胞生物体生长发育、稳态维持以及损伤修复等过程至关重要,但是监测体内细胞互作的遗传学技术鲜有报道。当前的遗传学手段基本上是针对特定细胞自身进行操作,无法深入研究细胞之间的互作。因此,建立新型邻近细胞标记技术对了解生物体内细胞间互作及其功能具有重要意义。sLP-mCh是脂溶性标签连接mCherry的融合荧光蛋白(Ombrato et al., Nature 2019)。sLP-mCh在供体细胞中表达后,会从供体细胞中释放出去,并进入邻近细胞,将邻近细胞标记为mCherry+。基于sLP-mCh蛋白的特性,为了实现体内邻近细胞标记,研究人员构建了基因敲入小鼠:R26-sLP-mCh-GFP和R26-sLP-mCh。首先以小鼠肝细胞作为供体细胞,表达sLP-mCh和GFP,检测肝细胞周围的其他类型细胞标记情况。研究人员在R26-sLP-mCh-GFP小鼠体内注射特异靶向肝细胞的病毒AAV2/8-TBG-Cre,当病毒进入肝细胞后,Cre重组酶表达并发生Cre-LoxP重组,移除R26-sLP-mCh-GFP位点中间的终止序列,肝细胞启动表达sLP-mCh和GFP荧光蛋白,成为sLP-mCh的供体细胞。研究人员发现肝细胞为GFP+mCherry+,同时也能检测到GFP–mCherry+的非实质细胞,其中肝脏中80%内皮细胞、76%免疫细胞以及54%成纤维细胞被标记。研究人员将这种由Cre诱导的细胞间蛋白标记技术称作CILP。肝脏的基本单位是肝小叶,肝小叶可以分为三个区域(zone),各区域的肝细胞具有不同特性以及分子标记。一区的肝细胞围绕着肝脏门静脉,高表达钙粘蛋白E(E-Cad);三区的肝细胞围绕着肝脏中央静脉,高表达谷氨酰氨合成酶(GS);肝小叶二区位于一区和三区之间,由E-Cad–GS–的肝细胞构成。肝脏中的毛细血管是一类特化的血管网络,称作肝血窦内皮细胞,肝血窦内皮细胞和肝细胞发生着紧密的相互作用,肝脏不同区域的肝细胞可能会受到内皮细胞不同程度的影响。研究人员然后以Mfsd2a+肝细胞为例阐明肝细胞及其邻近内皮细胞之间的互作。当用他莫昔芬诱导双基因型成体小鼠Mfsd2a-CreER R26-sLP-mCh后,Mfsd2a+肝细胞启动sLP-mCh的表达,成为供体细胞。研究人员发现在门静脉周围出现聚集的mCherry信号,且存在mCherry+CDH5+细胞,表明Mfsd2a+肝细胞作为供体细胞表达sLP-mCh后,周围的内皮细胞也被标记为mCherry+。研究人员发现这部分内皮细胞主要分布在门静脉周围,在肝小叶一区中超过90%的内皮细胞为mCherry+,在二区中大约30%的内皮细胞为mCherry+,在三区中几乎检测不到mCherry+的内皮细胞。从以上可知,研究人员通过CILP技术,并结合Mfsd2a-CreER小鼠,实现了肝小叶内皮细胞的区域性标记,高效地标记了肝门静脉周围内皮细胞。为了进一步分析肝脏中不同区域内皮细胞的差异,研究人员利用FACS将mCherry阳性和阴性内皮细胞分选并进行转录组测序。通过主成分分析显示,这两群内皮细胞分别成群,互相具有较大差异。门静脉周内皮细胞的特征基因Dll4、Lama4、Msr1和Ltbp47在mCherry+内皮细胞中显著上调,中央静脉周内皮细胞特征基因Rspo3、Wnt9b、Cdh13和Thbd7在mCherry–内皮细胞中显著上调。对差异基因进行热图分析显示,与血管新生、调节细胞黏附和生长因子应激相关基因的表达在mCherry+内皮细胞中显著上调,而与胞外基质组成、化学趋化和组织形态发生相关基因的表达在mCherry+内皮细胞中显著下调。综上,研究人员开发了一种体内邻近细胞标记新技术CILP。CILP利用了一种细胞膜透过性的荧光蛋白,当这种荧光蛋白在供体细胞中表达后,可以释放到细胞外,并进入邻近细胞,从而实现对邻近细胞的标记。研究人员利用CILP技术成功标记了小鼠肝脏中肝细胞的邻近细胞,并利用Mfsd2a+肝细胞作为供体细胞,标记并分析了肝脏门静脉周内皮细胞的特征。分子细胞卓越中心博士后张少华为该论文的第一作者,分子细胞卓越中心周斌研究员和复旦大学附属中山医院王立新教授为该论文共同通讯作者。该工作得到了香港中文大学吕爱兰教授和西湖大学何灵娟研究员的大力支持。感谢分子细胞卓越中心动物平台和细胞分析技术平台对本研究的大力支持,感谢中科院、基金委、科技部以及上海市科委等部门的经费支持。图:(A)sLP-mCh荧光蛋白从供体细胞进入受体细胞。(B和C)遗传工具小鼠构建以及实验策略。(D–F)以肝细胞作为供体细胞表达sLP-mCh,肝脏中非实质细胞被标记为mCherry+。(G和H)sLP-mCh被用于在胰腺和心脏中标记邻近细胞。
  • 日本宫崎大学近期获得蛋白酶和基因定位标记方法新进展
    由日本宫崎大学医学部的澤口朗教授率领的研究团队,充分发挥低真空电子显微镜对于光学显微镜用的切片在不做任何减轻荷电处理下就能进行观察的特点,开发了在医学、生物学研究领域有重大意义的蛋白酶和基因的定位标记新方法。关于阐述该方法的论文被刊载在了Nature旗下的一本开放获取期刊「Communications Biology」上面。  之前被大家熟知的包埋后标记法是要首先结合金纳米颗粒进行抗体的调制,然后将包埋在树脂里面的观察对象作成超薄的切片然后进行抗体的标记。这一过程需要很长的时间和熟练的技巧。本次新开发出来的研究方法是要将光学显微镜中被广泛使用的石蜡切片或者冻结切片,通过酵素抗体法标识二氨基联苯胺(DAB)后,通过0.01%氯金酸溶液处理后在DAB标识部分形成金纳米颗粒(平均粒子径=6 nm),然后再37℃下将其保存12小时,通过维持高湿度的环境下培育金纳米颗粒(平均粒子径=47 nm)实现可视化的具有划时代意义的新方法,因此备受关注。 论文中证明了15年前被标记DAB的切片上有进行过金纳米颗粒的形成以及培养,使用电子显微镜对在库房保存的光学电子显微镜标本进行了再论证,还记载了CLEM(Correlative Light and Electron Microscopy)免疫电子显微镜标记和in-situ hybridization电子显微镜标记的实际案例。低真空扫描电子显微可以说填补了光学显微镜与电子显微镜之间的空白,新的方法利用了这个特性,今后会在医学・生物学研究方面广泛的应用,对于加速及促进生物组织、构成细胞的组织及机能等的研究将会发挥巨大作用。 一直以来有使用蛋白质的抗体以及标识RNA的In Situ Hybridization法等多种手法,本次发表的内容是通过培养Nanogold颗粒然后使用电子显微镜来进行可视化定位的新方法。本次论文发表的研究过程中,日立的透射电子显微镜和台式电子显微镜发挥了重大作用。           日立透射电子显微镜HT7800 日立台式扫描电子显微镜TM4000 II Communications Biology volume 4, Article number: 710 (2021) 查看更多图文内容,请点击下方阅读原文:https://www.nature.com/articles/s42003-021-02246-3 公司介绍:日立科学仪器(北京)有限公司是世界500强日立集团旗下日立高新技术有限公司在北京设立的全资子公司。本公司秉承日立集团的使命、价值观和愿景,始终追寻“简化客户的高科技工艺”的企业理念,通过与客户的协同创新,积极为教育、科研、工业等领域的客户需求提供专业和优质的解决方案。 我们的主要产品包括:各类电子显微镜、原子力显微镜等表面科学仪器和前处理设备,以及各类色谱、光谱、电化学等分析仪器。为了更好地服务于中国广大的日立客户,公司目前在北京、上海、广州、西安、成都、武汉、沈阳等十几个主要城市设立有分公司、办事处或联络处等分支机构,直接为客户提供快速便捷的、专业优质的各类相关技术咨询、应用支持和售后技术服务,从而协助我们的客户实现其目标,共创美好未来。
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