快中速测检测

摘 要 本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。 　　关键词 苏丹红 高效液相色谱 液相色谱-质谱 气相色谱-质谱联用 薄层层析 　　近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。 　　1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测 　　高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。高效液相色谱法主要有以下几种： 　　1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7] 　　该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。苏丹I的检测限是0.013&mu g/ml、最低浓度为0.106&mu g/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。 　　1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法 　　该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。该法用正己烷代替乙睛做提取液，提取后经旋转蒸发仪蒸发浓缩，氧化铝层析柱固相萃取净化后，采用梯度洗脱，用反相高效液相色谱进行色谱分析，外标法定量。 　　检测波长:苏丹红I为478nm 苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV为520nm。于苏丹红I出峰后切换。 　　王艳春[8]等简化了样品的前处理，避免高效液相色谱淋洗液乙睛、丙酮溶液对人体的损害，降低了成本，提高了仪器稳定性[9]。用0.1%甲酸的甲醇溶液作为淋洗液，不用梯度洗脱测定食品中苏丹红含量。研究了用高效液相色谱法测定食品中苏丹红的色谱条件、线性范围。该方法的检出限苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV分别为:11&mu g/kg、10&mu g/kg、8&mu g/kg、8&mu g/kg，相对标准偏差2.6%，回收率为88%～106%。 　　1.3 凝胶柱净化-高效液相色谱法 　　凝胶层析是指混合物随流动相流经作为固定相的凝胶层析柱时，混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术。凝胶颗粒是一类具有三维空间多孔性网络结构的物质，不带电荷，可起过滤或&ldquo 筛&rdquo 的作用，故又称为凝胶过滤或分子筛层析(gel chromatography)[10]。 　　Mazzctti M报道了一种简单而快速的苏丹I检测方法[11]，包括Soxtcc萃取、高压凝胶层析纯化，HPLC紫外/VIS 检测器检测。最低检出限为7&mu g/kg，定量分析限为13&mu g/kg。 　　杨建荣等[12]认为苏丹Ⅰ分子结构上的偶氮键可表现为弱碱性，在低pH值时，偶氮键的氮原子可吸引少量质子H+，增强分子极性，洗脱加快 但洗脱液pH值在2～4.5时， pH值变化对分子极性影响不大，而pH值在4.0～6.0时,分子极性随pH值变化非常明显。并考察了联苯胺、苏丹红Ⅲ、偶氮蓝、丽春红4R四种偶氮染料对苏丹红I色谱分离的干扰，发现以pH值为2.65的冰乙酸水溶液和乙腈为流动相进行线形梯度洗脱，可获得很好的分离效果。杨建荣等[13]考察了不同配比的乙腈-磷酸、乙腈-乙酸乙酯和乙腈-甲酸体系对苏丹红的分离情况。结果表明，采用乙腈-乙酸溶液为流动相体系时，待测物谱峰纯度高。欧盟法[14]流动相为16.5%乙酸水溶液和乙腈，酸度较高，对柱子要求也比较高。张玉黔等[15]分别用0.1%、1%、10%醋酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱。结果表明，醋酸浓度对苏丹红的分离没有影响，但低浓度醋酸对色谱柱的损害相对较小以及在此条件下待测样品的杂峰对苏丹红的测定也无影响，整个分析时间只需32 min。 　　2.LC/MS法对食品中苏丹红的测定 　　色谱-质谱联用技术结合了色谱、质谱两者的优点，故成为仪器分析进展的热点。LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肤、多糖、多聚物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤[16]。MS作为理想的色谱检侧器，不仅特异，而且具有极高的检测灵敏度[17]。因此，色谱-质谱联用长期为人们所关注。随着各种离子化技术的不断出现，液质联用在生物、医学等领域的地位越来越重要[18]。 　　对于复杂食品基质本底或一种新的基质本底，HPLC检测后，通过LC/MS确证苏丹红的存在是必要的。此外，如果光谱分析结果不令人满意(如待分析物浓度较低或可能存在结构类似物时)也可用LC/MS技术进行确证。质谱法比高效液相法灵敏20倍[19]。可检出ppb数量级。由于涉及样品大多是辣椒和番茄制品，样品本身的复杂基质直接干扰仪器检测，且苏丹红具有非离子性脂溶物的特点，导致样品提取、纯化、富集非常困难，采用好的提取溶剂往往造成提取液中混入大量的干扰成分，若考虑低残留量进行富集往往首先浓缩的是样品的内源性物质，结果使得干扰更为严重[20]。由于这类染料的特点，先进国家普遍采用的研究方法是液相色谱-质谱联用技术。欧盟标准方法《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析》中也使用大型液质联用仪。质谱检测仪具有定性优势，是我国标准发布前检测苏丹红常用的办法。有毛细管液相-电喷雾-飞行质谱法[21]，液相色谱-大气压化学电离-多极质谱法[22]和液相色谱-电喷雾质谱法[23]，均属于液相色谱-质谱联用检测法。该方法经过液相分离、光谱定量、质谱定性而最终实现对食品中苏丹红的检测。 　　用LC-ESI/MS法可以分析食品中4种苏丹红色素[10]。样品中的苏丹红用乙睛提取，需纯化。色谱柱为Agilnet C18，流动相为乙睛-0.5%乙酸溶液(体积比72:28)。采用正离子电离方式，每种化合物选择3个碎片离子为定性离子以获得高选择性，选取每个化合物丰度最高的碎片为定量离子以获得高灵敏度。4种苏丹红色素的检出限(LOD)和检量(LQO)均为ng/g水平。标准加入量为0.2&mu g/g水平时的回收率为86%～98%，且重现性良好。仪器分析时间仅需8min，适合于大量样品快速分析。 　　&ldquo 染红食品&rdquo 中苏丹红I、II、III和IV残留量的高效液相色谱(HPLC)初筛、质谱分析方法已经报道[4]。以MerckRP-18柱为分析柱，流动相：乙睛：水=90：10，二极管矩阵检测器(PDA)和MAX质谱仪为检测器。平均回收率(%)：87.3、83.0、86.7和90.0。 　　3.GC/MS法对食品中苏丹红的测定 　　用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法(gas chromatography，GC)。它是由惰性气体将气化后的试样带入加热的色谱柱，并携带分子渗透通过固定相，达到分离的目的。气相色谱法具有分离效率高、灵敏度高及速度快的特点。气质联用系统中，质谱仪相当于色谱的定性检测器[16]。 　　气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM)，同时测定了食品中苏丹红I～IV[25]。色谱柱为PR-SR石英毛细管柱载气He: EI离子源，选择m/z77，105，115，143，176，247，248，261，352，380用于SMI检测，并按不同的采样时间分成4组，每组4个离子，分别对应于每种苏丹红进行定性分析确证 选择苏丹红I～IV各自的分子离子峰m/z248，276，352，380作抽出离子图进行定量分析。苏丹红I、II的线性范围为0.01～10.0mg/L，苏丹红III、IV的线性范围为0.1～10.0mg/L 检出限：苏丹红I、II为1&mu g/kg，苏丹红III为5&mu g/kg，苏丹红IV为10&mu g/kg 回收率86%～95%。该法与欧洲健康与消费者保护委员会的方法(HPLC法)相比，灵敏度高1～2个数量级，分析时间缩短，用色谱保留时间，质谱同时定性，消除了食品中杂质的干扰，结果准确可靠，选择性和重复性好，适用于所有食品成品及原料的检验。 　　固相萃取-气质联用被用于测定辣椒油中苏丹红I和苏丹红II[26]。用Strata-X小柱进行辣椒油样品的前处理，用气质联用法对苏丹红I和苏丹红II进行定性和定量分析。对苏丹红I和苏丹红II方法的检出限分别为0.5&mu g/L和0.7&mu g/L，平均回收率分别为93.8%和95.9%，RSD分别为2.7%～6.9%和1.1%～4.4%。 　　气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM)，测定了食品中苏丹红I号[25]。用石英毛细管柱，He载气 EI离子源，选择m/z277、115、143、248离子用于SIM检测，并根据这4个抽出离子的峰面积比进行确证。苏丹红I号的线性范围为0.01～10.0mg/L，相对标准偏差小于6.1%，回收率85%～90%，检出限为0.001mg/kg，每个样品分析时间为5min。该法与欧洲健康与消费者保护委员会发布的方法(HPLC法)相比灵敏度高两个数量级，分析时间缩短，用色谱保留时间，质谱同时定性，消除了食品中杂质的干扰，避免了只用色谱保留时间定性可能产生的错误，结果准确可靠，选择性和重现性好，适用于所有食品成品及原料的检验。 　　4.薄层色谱法对食品中苏丹红的测定 　　薄板和展开剂的选择在薄层色谱法测定中均起着关键作用，也是食品中苏丹红薄层色谱法测定的研究重点。 　　薄板和展开剂对分开样品中苏丹红有重要影响。王鲜俊等[27]比较了同一展开剂甲醇-丙酮-醋酸在硅胶G薄层板、聚酰胺薄层板、硝酸盐-硅胶G板上对苏丹红Ⅰ～Ⅳ的展开效果，发现在聚酰胺薄层板上，苏丹红Ⅰ～Ⅳ快速展开，且斑点集中 而硅胶G薄层板对苏丹红Ⅰ、Ⅱ分不开，硝酸盐-硅胶G板对苏丹红Ⅲ、Ⅳ分不开。张杨[28]采用展开剂正丁醇-无水乙醇-氨水，在聚酰胺薄层板上可将苏丹红Ⅰ～Ⅳ分开，但有拖尾现象。庞艳玲[29]通过对比研究，发现在硅胶G板上，展开剂正己烷-二氯甲烷-氨水可迅速、稳定地分开样液和标液中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ 而展开剂三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷-石油醚、三氯甲烷-石油醚-醋酸不能将苏丹红Ⅰ、Ⅱ分开 展开剂甲醇- 丙酮- 醋酸对苏丹红Ⅰ～Ⅳ均不能分开。 　　5.结束语 　　国内外食品质量安全事件之所以接连发生，除了有关食品质量安全的法规不健全外，食品检测技术不过关、检测仪器使用不方便也是重要的原因。为保护人类健康，对食品中苏丹红染料的测定需要进一步深入研究，尽快建立一种实用、快捷、准确可靠的检测技术。 　　参考文献 　　[1] 李军, 雍炜, 李刚, 等. 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p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/e77b4557-0131-4f53-abc6-dd54c03b641b.jpg" title=" 001.png" / /p p 　　按照《中华人民共和国食品安全法》有关规定，为规范食品快速检测方法使用，我局组织制定了《辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿)》食品快速检测方法，现向社会公开征求意见。请于2018年3月10日前通过电子邮件反馈意见。 /p p 　　联 系 人：金绍明、成长玉 /p p 　　联系电话：010-67095928、010-88331033 /p p 　　电子邮箱：kbsbzglc@cfda.gov.cn /p p 　　附件：辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿) /p p style=" text-align: right " 　　食品药品监管总局办公厅 /p p style=" text-align: right " 　　2018年2月8日 /p p style=" line-height: 16px " img src=" /admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_doc.gif" / a href=" http://img1.17img.cn/17img/files/201802/ueattachment/038d8c4f-6431-48b3-a908-0ee639c80619.doc" style=" color: rgb(0, 112, 192) text-decoration: underline " span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测 胶体金免疫层析法（征求意见稿）.doc /span /a /p

p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 近年来，重大食品安全事件频发，食品安全问题越来越受到人民的关心和政府部门的高度关注。据国家市场监管总局消息，今年三月以来，各地发生多起餐饮服务食品安全事件，比如3.15期间外婆家被爆出后厨出现活老鼠事件，哈尔滨多家餐厅存在严重的卫生问题等。民以食为天，食品安全是涉及民生的大事。如何利用现代化检测手段提升食品安全管理效率，保证“舌尖上的安全”成为人们十分关切的话题。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " “食品安全快检”是一种快速检测食品安全的方式，可短时间内对可疑食品进行初级筛查和对现场食品安全状况进行初步评判，提升监督成效，预防食品安全事故发生。与传统检测技术相比，快检技术的优势在于样品前处理简单、检测速度快、仪器操作简单且便携性强。当前我国食品安全面临的主要问题有农药兽药残留超标、食品中的非法添加物、食品添加剂添加不规范、微生物、重金属超标、生物毒素等，这些指标除了可以用大型仪器检测外，也可以用快检技术进行检测。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " strong 《食品安全法》第一百一十二条提出：县级以上人民政府食品安全监督管理部门在食品安全监督管理工作中可以采用国家规定的快速检测方法对食品进行抽查检测。 /strong 据了解，目前已发布的食品快检方法共有包括水产品中孔雀石绿的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201701）、食品中呕吐毒素是快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201702）、食品中罗丹明B的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201703）、辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201801）等在内的二十几种。& nbsp & nbsp & nbsp /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 食品快检技术的客户群主要有四类：一、政府执法监管部门，尤其是政府县级、乡镇基层执法部门，由于检测能力和检测实际需求的因素，快速、简单、便携的快检产品需求较大；二、食品生产企业，一些中小型食品企业采购大型检测仪器成本较高，且检测时间较长，而快检产品恰好迎合了中小食品企业需求，目前一些大型食品企业也已大规模使用食品安全快检技术产品；三、餐饮商超，早期快检技术首先用在乳品和畜禽业，之后快检设备登陆大型超市，并且覆盖范围越来越广，现在很多饭店、食堂也开始购置快检产品；四、社会大众，随着互联网技术发展，人民健康意识的提高，一些快检设备应经走进千家万户，提供日常生活检测服务，不断满足大众的健康消费需求。 /p p style=" text-align: left text-indent: 2em " 随着市场需求的不断增长，快检市场规模不断增大。据统计，2016年食品快检市场容量为100亿元，产值过亿的企业有勤邦生物、维德维康、吉大小天鹅、厦门斯坦道、华夏科创等，产值在1000万以上常用的快速检测产品厂商约40家，仪器类的快速检测厂商约170家，预计到2020年，食品安全快检市场容量将达到200亿元。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 目前，市场上的快检技术主要包括酶联免疫技术、免疫胶体金试纸技术、化学比色分析技术、生物芯片技术、荧光定量PCR技术、分子生物学技术等，其中前三种技术是目前市场上应用比较成熟的现场快检方法。 /p p style=" text-align: justify " strong 酶联免疫吸附技术 /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 酶联免疫吸附技术是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行。它是目前应用最广泛的免疫分析之一，属于较成熟的快检方法，在各种毒素、三聚氰胺、抗生素、瘦肉精、兽药残留和转基因检测行业应用广泛。 /p p style=" text-align: justify " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp /p p style=" text-align: center " img title=" 酶标仪_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 酶标仪_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/4b801532-eb1b-44b8-9415-f3bb2077fb24.jpg" / /p p style=" text-align: center " & nbsp & nbsp & nbsp strong style=" text-align: center " 酶标仪 /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 黄曲霉B1试剂盒_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 黄曲霉B1试剂盒_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/b6415788-6225-4d5b-be2d-46f1a62c9677.jpg" / /p p style=" text-align: center " a href=" https://www.instrument.com.cn/zc/998.html" target=" _self" i strong 酶联免疫检测试剂盒 /strong /i /a /p p style=" text-align: justify " strong 免疫胶体金试纸技术 /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 免疫胶体金试纸是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术。目前国内已有相当成熟的商业试纸条，在食品中罗丹明B、毒素、孔雀石绿、水产品中硝基呋喃类代谢物、食品中吗啡、可待因等指标的检测中，已将免疫胶体金试纸法作为标准方法采用。 /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 官网克伦特罗检测卡主图_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 官网克伦特罗检测卡主图_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/f5e41162-c3cb-41b1-82aa-de5083f12eeb.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 胶体金检测卡 /strong /p p style=" text-align: justify " strong 化学比色分析技术 /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 化学比色分析技术是利用迅速产生明显颜色的化学反应检测待检物质，通过与标准比色卡比较进行目视定性或半定量分析，目前常使用的化学分析比色法包括各种检测试剂和试纸。随着检测仪器的不断发展，与其配套的微型检测仪器也相应出现。该技术在果蔬中有机磷的检测领域有一定应用，食药监批准的快检方法《蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测》就是应用的比色法。 /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" nongcan.png" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" nongcan.png" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/d179b579-eb6b-4694-8bed-103e0bd1778c.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 农残快速检测仪 /strong /p p style=" text-align: justify " strong 生物芯片技术 /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 生物芯片技术是将生命科学领域中不连续的分析过程集成与硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、基因等组分的检测，可实现样品处理在内的“全分析”，主要应用在卫生检疫、动植物检疫、疾病预防控制、水质监测、生物计量等多个领域。 /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 微流控芯片农残速测系统_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 微流控芯片农残速测系统_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/c380c052-fa4f-42e5-8121-098e029b61f5.jpg" / /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " a href=" https://www.instrument.com.cn/zc/540.html" target=" _self" i strong 微流控芯片农残速测系统 /strong /i /a /p p style=" text-align: justify " strong 各种便携仪器的应用 /strong /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 随着科学技术的不调提高，各种简单、便捷的设备不断发展，一些便捷的小型设备开始应用于现场检测。如车载色质谱联用仪、便携式拉曼光谱仪、近红外光谱仪、漫反射紫外可见光谱分析仪、PCR仪等，实现了对多种污染物的现场快速检测工作。 /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 检测车_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 检测车_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/14717aee-5186-4b7f-a418-619232990864.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 食品质量安全检测车 /strong /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 拉曼.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 拉曼.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/59779e6f-9857-4fb4-981a-71e233951e22.jpg" / /p p style=" text-align: justify " strong /strong br/ /p p style=" text-align: center " strong 手持式拉曼光谱仪 /strong /p p br/ /p p style=" text-align: justify " strong /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 胶体金分析仪_副本.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 胶体金分析仪_副本.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/74a518e1-2e53-4f9e-9b0b-3b6c8853f6cf.jpg" / /p p style=" text-align: center " a href=" https://www.instrument.com.cn/zc/1007.html" target=" _self" i strong 物联网配套检测判读仪 /strong /i /a /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 目前，快检产品技术还存在着一些问题，包括方法研发、产品生产、产品技术评价和行业发展等。未来，随着标准化工作的推进和技术的飞速更新，快检技术将会推动我国食品安全检测事业的快速进步与发展。 /p p br/ /p p style=" text-align: center " /p p style=" text-align: center " /p p br/ /p p style=" text-align: center " br/ /p p style=" text-align: center " /p p & nbsp /p p style=" text-align: center " /p p & nbsp /p