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基于h-ER基因的水体类雌激素效应测定前言: 写这篇文章源于当时看的一篇《体育学刊》的论文《奥运会我们拿什么招待客人?——环境激素(EDCs)对生物的影响》(http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-TYXK200708030.htm)。水和食物是奥运健儿每天都会接触到的。若水中的类雌激素效应较高,会对运动员内分泌系统造成影响,从而影响比赛成绩,严重者甚至产生长期健康风险(如生殖影响、致癌等)。 之前,环境激素类物质在奥运会水质检测中有涉及,但是仅以GC-MS定性定量,这样做可能会丢掉部分环境激素类物质,如某些重金属和某些大分子的环境激素效应物质。同时环境激素类物质非常之多,采用理化分析不足以将这些物质全覆盖。所以未来分析的导向一定是生物分析,以环境激素效应代替单个的环境激素物质理化测定。下面就为大家分享下我们最近做的一个基于h-ER基因的类雌激素效应测定。摘要:目的:对水样中的环境激素含量进行定量测定。方法:重组h-ER基因酵母特异性地结合水中类雌激素化合物,产生具有生物学活性的酶,通过定量检测酶活,间接测定环境激素含量。结果:10-11~10-9mol/L的17β-雌二醇暴露下,标准浓度与β-半乳糖苷酶活呈S型曲线,相关系数0.984;该方法最佳检测范围为5.88×10-11mol/L~1.44×10-10mol/L;加标回收率在74%~108%之间。结论:该方法灵敏度高,在最佳检测范围内重复性好,能适用于地表水和污水厂进出水等水样的测定。关键词:环境激素 h-ER基因 酵母 环境激素是指能通过干扰内分泌功能,引起个体、后代或人群可逆性或不可逆性生物学效应的化合物,又称内分泌干扰物。随着工业化的进展和环境污染的加剧,环境激素在环境中的存在日益增多。生活中大量使用的化肥、农药、防腐剂、添加剂、洗涤剂、激素类药物等,很多属于内分泌干扰物。环境激素可以模拟或干扰正常激素内分泌调节功能,从而对动物及人类的发育、生殖功能产生不良影响, 甚至与人类某些肿瘤( 如乳腺癌、 卵巢癌等) 的发生有关。目前环境激素的检测方法有基于仪器分析的气质联用法,HPLC法、ICP-MS法等和基于生物检测手段的酶联免疫测定法、个体形态学检测法、实时定量PCR法、重组基因酵母法等等。其中重组基因酵母法具有高反应性和低背景,其检测阈值较低等的优点。1.实验材料和仪器http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208012036_381106_1653274_3.jpg分光光度计(cary50,瓦里安);http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208012200_381136_1653274_3.jpg全温振荡培养箱(SHZ-22,常州若基);http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208012200_381137_1653274_3.jpg恒温平板摇床(Titramax 1000,Heidolph,Germany);[font=Times New R
基因检测行业的发展现状:国内外差距明显此前著名影星安吉丽娜?朱莉切除乳腺一事使得基因检测成为全球关注热点,而近年来随着测序技术发展逐渐成熟和成本的不断下降,利用高通量测序技术开展基因检测项目已逐渐成为一种主流方式。特别是今年国家卫计委发布《关于产前诊断机构开展高通量基因测序产前筛查与诊断临床应用试点工作的通知》和《关于开展高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》后,该技术在基因检测临床应用中已得到国家认可。 基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术。通过基因检测,人们能了解自己的基因信息,预知疾病发生的风险,从而通过有效的干预措施避免或延缓疾病的发生。 基因检测可以用于疾病的预测,也可以用于疾病的诊断。疾病诊断是用基因检测技术检测导致遗传性疾病的突变基因。 目前应用最广泛的基因检测是通过高通量测序技术开展新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和肿瘤疾病的辅助诊断。 国际基因检测行业规范现状 据统计,截至2015年12月3日,全球共有1068家临床机构和670家实验室提供的55125个基因检测项目,涉及4472种相关疾病。 国外基因检测服务开展较早,目前市场已经非常成熟,此外,国外基因检测行业已经相对规范,如美国病理学家协会(CAP)和美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)等都专门针对高通量基因测序的临床应用提出要求。 国内基因检测行业规范现状 同国外相比,国内基因检测的项目偏少,目前明确能在临床开展的基因检测项目只有不到200个,检测项目较多的主要集中在感染性疾病、肿瘤分子生物学检测以及遗传病诊断,也有些项目可应用于产前诊断、预防性诊断等。 早在2014年之前,我国还未对基因检测行业出台相应的准入标准和管理规范。2014年2月9日,国家食品药品监督管理总局与国家卫生和计划生育委员会叫停了基因检测的临床应用。2014年12月,国家卫计委先后发布了《关于开展高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》和《关于产前诊断机构开展高通量基因测序产前筛查与诊断临床应用试点工作的通知》,这意味着高通量基因测序技术在基因检测的临床应用获得国家的认可。 在国内,利用高通量测序技术开展较多的基因检测项目为无创产前筛查(NIPT),可开展的检测机构包含华大基因、达安基因、贝瑞和康、博奥生物、安诺优达等。
事件一:7月4日,俄罗斯总统普京签署法令,禁止在俄境内种植转基因作物、养殖转基因动物、生产转基因食品,并禁止俄罗斯进口转基因食品,违者将处以罚款。=======================================================================事件二:7月29日,美国总统奥巴马签署了一项有关转基因食品销售的法律,要求生产商在食品包装上标注其是否含有转基因成分,从而让消费者“买得明白”。======================================================================= 美俄两个超级大国在转基因领域的大动作,代表着一个趋势,那就是政府部门对转基因食品的监管会越来越严格,立法越来越完善,因此对检测的技术要求也会越来越高。那么目前国内转基因发展现状,转基因成分的检测技术都有哪些,依据什么原理,准确度怎么样呢,就由小编为大家简单介绍一下。~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~据国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)统计报道,目前国内共批准60项转基因作物事件,分别为转基因玉米17项、转基因阿根廷油菜12项、转基因大豆10项、转基因棉花10项、转基因西红柿3项、转基因水稻2项、转基因杨树2项及转基因甜椒、转基因甜菜、转基因矮牵牛花和转基因木瓜各1项。转基因技术的核心是对物种遗传物质进行人为改造,导入外源基因,从而获得预期的目的性状。因此可以通过检测材料中是否含有外源启动子、终止子、标记基因、目的基因(抗虫、抗除草剂、抗病和抗逆等基因)及其表达产物来判断是否含有转基因成分。目前国内外对转基因成分的检测从原理上可以分为两类,基于外源蛋白靶标检测和基于外源核酸成分检测。基于外源蛋白靶标的检测技术主要是以免疫分析技术为基础,利用转基因作物产生的特定的外源蛋白与抗体的特异性识别进行检测和定量的技术。常见的基于外源蛋白靶标的转基因检测技术包括酶联免疫吸附技术(ELISA)、蛋白印迹(Western blot)检测技术、免疫层析试纸条技术及蛋白质芯片技术(Protein chip)等。ELISA方法和免疫层析试纸条法快速准确,但仅可检测一种目标蛋白,而蛋白质芯片可通过设计不同的探针阵列和特定的检测方法,使一次反应同时检测多个蛋白,具有通量高、微型且自动化等优点,但背景信号高、蛋白质活性难以长久保持。蛋白质检测方法往往不能检测加工食品,而且受目的蛋白质在转基因作物中的表达部位、表达时间及环境等的影响,限制了其应用。而核酸成分,尤其是DNA,因其稳定性好,在加工过程中不易降解,被广泛用于转基因检测中。基于外源核酸成分的检测方法主要包括 PCR 技术、恒温扩增技术、基因芯片技术等。PCR技术已经成为转基因作物及产品日常检测工作中应用最广泛的技术,国内以及国际发布的食品和饲料中转基因产品的检测标准方法大都采用的PCR技术原理,应用普通PCR方法或实时荧光定量PCR可以对检测样品进行定性和定量检测。在此基础上,新的PCR技术如巢式和半巢式 PCR、多重 PCR、PCR-免疫层析等技术也成功应用于转基因成分的检测中。同 PCR 检测技术相比,恒温扩增技术具有特异性强、等温高效、操作简单、耗时较短、产物易检测及设备要求低等优势, 在快速检测中具有良好的前景。基因芯片综合了 PCR 技术和分子杂交的优点,可用于一种转基因作物中多个基因的平行检测或对多种转基因作物进行同时检测,其快速简便、自动化、微型化、高通量、准确度高等优点,使其在转基因作物检测方面具有广阔的应用前景。数字 PCR 是一种基于单分子 PCR 的对DNA分子直接计数的绝对定量方法,不需要标准品作为参考,融合了定量 PCR的准确性及基因芯片的高通量,因此有望成为绝对定量新标准,也有潜力解决转基因检测通量和劳力成本的问题。目前, 国内外针对转基因成分的检测主要以DNA为检测对象的核酸扩增检测技术为主,但是却面临着两大挑战:1、Talen和CRISPR等基因组编辑技术在转基因研发中的应用;2、加工技术水平和加工精度的提高, 导致DNA的提取难度加大,提取质量下降。但是我们相信,正是在这些挑战的激励下,我们的检测技术会不断地发展,检测人员的水平也会不断地提高。行路难!行路难!多歧路,今安在?长风破浪会有时,直挂云帆济沧海。