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实验室常用的ELISA方法可以用来测定抗体,也可以用来测定抗原。我们可以根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。下面就让上海劲马ELISA试剂盒为您分享其中关于双抗体夹心法检测抗原的操作步骤。双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。劲马ELISA试剂盒小提示:双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
[font='calibri'][size=13px]什么是中和抗体?如何检测[/size][/font][font='calibri'][size=13px]假病毒[/size][/font][font='calibri'][size=13px]中和抗体?[/size][/font]什么是中和抗体?中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时,浆细胞会产生病毒特异性抗体,但只有少数是中和抗体。中和机制如下:(1)改变病毒表面的构象;(2)与吸附相关的病毒表位结合,阻断其与宿主细胞受体的相互作用;(3)与病毒形成免疫复合物,易于被巨噬细胞清除;(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体,从而导致病毒裂解。S蛋白(spike protein)是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白,由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白,负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD),被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合,从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此,S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。如何检测假病毒中和抗体?中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。病毒中和试验中和抗体检测的金标准是病毒中和试验,主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合,并接种预先准备好的单层细胞。最后,根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作,这些检测只能在生物安全三级实验室进行,极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。假病毒中和试验目前,越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体,将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白,并引入检测信号分子,例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合,模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2),并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒,不具备自我复制能力,无生物安全危险,所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。替代病毒中和试验替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比,替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。中和检测服务信息由北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)为您提供,如您想了解更多关于SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒中和检测服务报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。具体详情可点击:https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service
[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/anti-idiotype-antibody][b]抗独特型抗体[/b][/url]是一种能够特异性结合另一抗体独特位的抗体。独特型由多个抗原决定簇([/font][font=Calibri]Antigenic determinant[/font][font=宋体])组成,每个抗原决定簇都是一个独特位。抗原决定簇或独特位可存在于重链可变区,也可存在于轻链可变区,或者存在于两条链组成的表面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗独特型抗体在治疗性抗体药物开发过程中有着非常广泛的应用。由于抗独特型抗体与抗药抗体([/font][font=Calibri]Anti-drug antibody, ADA[/font][font=宋体])之间的相似性,抗独特型抗体在免疫原性([/font][font=Calibri]Immunogenicity[/font][font=宋体])分析中可作为阳性对照用于抗药物抗体总量的测定。另外,在抗体药的药代动力学([/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体])和药效学([/font][font=Calibri]PD[/font][font=宋体])分析中,抗独特型抗体可用于检测血液中抗体药物的含量(游离型、结合型和总量)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗独特型抗体的不同应用[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①药代动力学([/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体])分析[/font][/font][font=宋体][font=宋体]药代动力学([/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体])描述并表征了药物在人或动物体内的四个不同阶段:吸收、分布、代谢和排泄(也称为[/font][font=Calibri]ADME[/font][font=宋体])。在药物开发中,[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析提供了药物与身体相互作用以及疗效强度和疗效持续时间的基本信息。在开发生物仿制药时,需要通过比较[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析来评价与原研药在生物活性的潜在差异。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据结合模式和性质的不同,抗独特型抗体可分为三种类型:抗原阻断型、抗原非阻断型和药物靶标复合物型。基于这些特点,可以建立不同形式的[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]检测,以测量血清中的抗体药物含量,包括游离型、结合型或总量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗独特型抗体可用于定量检测动物或人血清中的抗体药物水平,是[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]研究的关键检测试剂。抗体药物定量分析有多种分析方法,其中[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]为最常用的形式。在抗独特型抗体捕获[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中,将抗独特型抗体包被在平板上,再将含有抗体药物的样本加入系统中,然后用特异性结合药物的标记抗独特型抗体定量抗体药物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②免疫原性[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗药抗体([/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体])检测[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫原性评价主要采用抗药抗体([/font][font=Calibri]anti-drug antibody, ADA[/font][font=宋体])分析的方法进行,这是治疗性蛋白药物(如单克隆抗体、[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]和融合蛋白)开发过程中的关键步骤。在这些情况下,通常采用多层次递进式进行(图[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体])。该方法首先采用高灵敏的筛选试验鉴别阳性抗体样本,使用验证性试验尽量减少假阳性结果,然后使用表征试验评估抗体的中和能力。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在整个过程中,抗独特型抗体是必要的试剂。检测[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的检测方法有多种,包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、放射免疫沉淀法([/font][font=Calibri]RIPA[/font][font=宋体])、表面等离子体共振([/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体])和电化学发光检测([/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体])。其中,桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]是最常用方法,可用于检测所有[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]同种型([/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等)。在典型的桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中,将抗体药物预包被在平板上,并将标记的抗体药物与患者样本一起孵育,以检测是否存在[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体](图[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体])。抗独特型抗体将用作阳性对照或参比标准品,用于样本中[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的定性分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/anti-idiotype-antibody-service][b]抗独特型抗体制备[/b][/url][b]套餐[/b][/font][font=宋体][font=宋体]为支持药物开发,义翘神州为客户提供了从抗原制备、抗独特型抗体开发到检测方法建立和试剂盒开发的全方位、一站式的定制抗独特型抗体生产服务。我们拥有丰富的开发经验,包括不同抗体类型如全长[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]bsAb[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白等。定制的抗独特型抗体可用于建立药代动力学([/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体])[/font][font=Calibri]/ADA[/font][font=宋体]检测方法,以测定样本中的特异性抗体药物或[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]水平。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]服务:[/font][font=宋体]①抗独特型兔多抗制备服务[/font][font=宋体]交付内容:[/font][font=宋体]? 纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]周期:[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②抗独特型鼠单抗制备服务[/font][font=宋体]交付内容[/font][font=宋体][font=宋体]? 阳性克隆,[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]管细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 纯化抗体,[/font][font=Calibri]10 mg/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]抗体对(可选)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]周期:[/font][font=Calibri]4~6[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/anti-idiotype-antibody[/font][/font]