我写了一篇检测

p 　　这一过程耗费了他们生命中的很长一段时间，妨碍了对工作、资助和终身教职的申请，并且减缓了研究成果的传播。 /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 667" title=" 2016225942833.jpg" style=" width: 600px height: 667px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201602/noimg/2895905f-02a7-4454-8e79-ac4bc88ec143.jpg" border=" 0" vspace=" 0" hspace=" 0" / /p p style=" text-align: center " 　　图片来源：Matt Murphy /p p 　　当Danielle Fraser首次将论文提交并等待其发表时，她对即将到来的痛苦经历全然不知。 /p p 　　Fraser花了约18个月研究上千个在过去3600万年间遍布北美的化石标本。如今，她获得了一个有趣的结果：动物种群在温暖、湿润气候下的不同纬度间分布最为广泛。这项对Fraser在加拿大卡尔顿大学获得博士学位至关重要的工作，可能被用于预测哺乳动物对气候变化的响应，而这是当下生态学研究中的一个关键问题。因此，在导师的鼓励下，她于2012年10月将此项成果投给《科学》杂志。 /p p 　　10天后，论文被拒。Fraser又将其投给另一家著名期刊——美国《国家科学院院刊》。结果论文再次被拒。下一步，她尝试投给《生态学快报》，但论文被返回。“当时，我失望至极。论文甚至未被评审过，而我很想知道如何完善它。” /p p 　　2013年5月，Fraser将论文提交给其所在领域的高影响力期刊英国《皇家学会学报B》。该期刊将论文送出去评审，而这是在Fraser首次将其投给《科学》杂志的7个月后。“终于成功了!”Fraser想。但她不知道的是，在通往发表的漫长、崎岖之路上，自己仅迈出了第一步：在论文最终发表前，又经历了3次提交、两次被拒、两轮大修和无数次起草。到论文发表时，Fraser几乎不想再多看它一眼。 /p p 　　Fraser的沮丧被感同身受：研究人员正不断质疑在发表成果上所花的时间。很多人表示，他们感觉陷入了一个提交、被拒、接受评审、再次接受评审和再再次接受评审的循环当中。这一过程耗费了他们生命中的很长一段时间，妨碍了对工作、资助和终身教职的申请，并且减缓了研究成果的传播。2012年，纽约洛克菲勒大学神经学家Leslie Vosshall撰写了一篇哀叹科学出版“像冰川移动般缓慢”的评论。“过去3年间，如果有什么区别的话，那就是情况变得更加糟糕。”Vosshall说。 /p p 　　 strong 同行评议 /strong /p p 　　一个争论点在于现在的审稿人要求得更多。当加州大学旧金山分校细胞生物学家Ron Vale分析在1984年前6个月发表于《细胞》《自然》和《细胞生物学杂志》的生物学论文，并将其与2014年前6个月发表在这3本期刊上的论文进行比较时，他发现，作者的平均数量和实验数据中的研究小组数量均增加了2～4倍。Vale认为，这表明发表一篇论文所需的数据量在增加。他怀疑，大多数增加的数据来自试图满足审稿人要求的作者。科学家对这些过分热心的批评者充满了抱怨，因为后者似乎永远想要更多或不同的试验，以揭示某个观点。而英国华威大学细胞生物学家Stephen Royle对其团队发表论文所需时间进行的分析表明，在平均9个月的酝酿期中，有近4个月被用在修改论文并将其再次提交上。 /p p 　　很多科学家还责怪期刊编辑。在他们看来，当评审意见混杂时，编辑们不愿向论文作者提供明确的指导和决定，从而将评审和修改过程没有必要地拖长。期刊负责人并不赞同这一说法，并且表示，他们的编辑很擅长处理混杂的评审意见。《细胞》总编辑Emilie Marcus介绍说，他们的期刊编辑承担着决定论文发表的责任，并且会帮助作者制定修改计划。 /p p 　　Marcus同时表示，《细胞》杂志正通过诸如增加仅经历一轮修改的论文数量，努力缩减审稿时间。2015年，在发表于《细胞》的论文中，有14%做到了这一点。 /p p 　　《自然》杂志编辑部主任Ritu Dhand介绍说，《自然》的编辑也发现，和过去相比，寻找审稿人越来越难。“大概是因为需要评审的论文太多了。” /p p 　　加州大学旧金山分校计算生物学专业研究生Daniel Himmelstein则发现，PubMed数据库中的论文数在2000～2015年间增加了两倍多，目前达到近100万篇。 /p p 　 strong 　技术进步 /strong /p p 　　数字出版可能对缩短“生产”时间——从接收到发表所用的时间——而非审稿时间有好处。在Himmelstein的分析中，自本世纪初以来，用于论文生产的时间减少了一半，稳定在25天的平均值上。 /p p 　　一些新期刊和在线发表平台已承诺进一步加快发表流程。于2013年启动的PeerJ便是若干本如今鼓励开放审稿的期刊之一。这些期刊的审稿人名字和评论都随同文章一起贴出来。人们所希望的是，增加透明度将阻止不必要的耽搁或来自审稿人繁重的修改要求。 /p p 　　生物医学和生命科学领域的期刊eLife于2012年启动，承诺编辑会在几天内作出初步决定并且快速评审完论文。审稿人得到不要建议“完美试验”的严格指令，而且只有当额外的分析工作能在两个月内完成时，才可以对此提出要求。否则，论文将会被拒。加州大学伯克利分校细胞生物学家、eLife总编辑Randy Schekman介绍说，这些政策意味着在期刊接收的论文中，有超过三分之二仅经历了一轮评审。 /p p 　　在一项2015年的分析中，Himmelstein根据3482本期刊的平均评审时间创建了一个排名。这些期刊从2014年1月～2015年7月在PubMed数据库中拥有带着时间标签的论文。分析发现，PeerJ的评审速度相对较快：在提交后的第74天完成评审。eLife需要108天，《科学公共图书馆· 综合》则需要117天。相较之下，《细胞》的评审时间是127天，《自然》是173天，《科学公共图书馆· 医学》是177天，而《发育细胞》是受欢迎生物医学期刊中速度最慢的，需要194天。 /p p 　　 strong 预印本重获考虑 /strong /p p 　　对于生物学家来说，加速论文发表的一种方法是拥抱预印本。《物理评论E》助理编辑、德国马尔堡大学理论物理学家Bruno Eckhardt介绍说，预印本使得研究成果能迅速获得声望和批评。一份提交至bioRxiv——由纽约冷泉港实验室运营的服务器——的预印本在24小时内被在线发表，并且拥有了数字对象标识(DOI)。随后的修改有时间标记，任何人都能阅读和评论文章。更重要的是，支持者认为，预印本的发表能被加入到传统出版流程中。比如，于2012年启动的F1000Research通过先发表论文然后邀请公开的同行评议和修改，实现了这一点。 /p p 　　一些科学家更进一步，正利用各种平台发表研究中随时得出的每个假设、数据集或图表。每个文件能被赋予一个DOI，因此它能被引用和追踪。已将论文作为预印本发表的Himmelstein利用Thinklab平台逐步撰写并发表了自2015年1月起开展的一个新项目取得的成果。 /p p 　　然而，预印本和实时数字出版平台并非万能药。Vosshall表示，很多生物学家对预印本“感到恐惧”，因为他们担心自己的成果被竞争对手抢先发表，或者失去提出某个想法的功劳和知识产权。即便是在预印本发表后，科学家仍会发现自己忙于同行评议以及追求高影响力期刊，以寻求论文的最终发表，从而为他们的简历增光添彩。Vosshall介绍说，科学界依赖于传统期刊充当“声望过滤器”，从而使重要论文获得读者关注。没有它们，“我们如何发现好东西?” /p p 　　对于Fraser来说，当论文经过近两年的等待最终在《科学公共图书馆· 综合》上发表时，她得到了积极的回应。文章被浏览了近2000次、下载280次。此次发表还帮助她守住了现在的职位——史密森学会自然历史博物馆的博士后研究人员。 /p p 　　不过，Fraser并不想再次经受整个过程。因此，目前她更倾向于将论文投给有可能立即发表其成果的中档期刊。“如果我最终的目标是获得一份教职工作，我无法为了一篇论文等上两年。” /p

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当我们谈论关键质量属性时在谈论什么？关键质量属性系列文章的第一篇，让我们先来科普一下什么是关键质量属性吧！关键质量属性（CQA）是生物学特征，会影响安全性和有效性，因此必须得到密切监测。生物治疗产品必须经过纯化，产品和所有残留杂质都必须进行表征和定量，因此需要使用各种分析技术对分子进行大量测试。CQA 分几类？CQA 可分为几大类：聚集、序列变异、翻译后修饰 ( PTM ) 、宿主细胞蛋白质以及其他工艺过程产生的杂质。PTM 特别包含各种 CQA，包括氧化、脱酰胺化、磷酸化和糖基化等等。图 1. 潜在的产品相关杂质随着研究人员开发出更多融合蛋白、抗体药物偶联物 ( ADC )、双特异性抗体和其他更复杂的创新抗体杂交体，对分析性能的要求也变得越来越严苛。监测 CQA ？为确保生物治疗药物的有效性和安全性，会对 CQA 进行监测，这些 CQA 可自然存在，也可能在生产、纯化、制剂或储存的任何环节引发。蛋白质特征的多样性、这些属性的异质性以及众多现有分析技术的优缺点意味着要完全表征一种生物治疗药物并监测可能会影响终产品安全性或有效性的所有异构体和工艺杂质，需要用到多种技术并进行大量测试。CQA 测量方法测量 CQA 的方法取决于所需要测量的属性以及所处的产品生命周期阶段，但液相色谱( LC ) 技术始终占主导地位。高分辨质谱仪等高端仪器更常用于在方法开发和初始表征中对色谱峰进行鉴定，而 LC/UV 仪器在 QA/QC 环境中更为常见。重中之重是什么？CQA 监测的重中之重就是聚集体分析。聚集是需要密切监测的一个重要属性，因为它是一种常见的蛋白质应激反应，可能引发不良免疫反应。考虑到聚集很常见且有害，在评估风险时，高分子量聚集体通常被赋予高风险系数 ( RPN )。带 UV 检测器的体积排阻色谱 ( SEC ) 是检测单体与聚集体的金标准，因为它是一种原态分析，保留了非共价聚集的状态，且操作和解析相对简单。图 2. 是 mAb 单体、二聚体和高阶聚集体的 SEC-UV 分离示例。图 2. lgG单体（A）、二聚体（B）和高阶聚集体（C，D）的 SEC-UV 分离SEC 是基于蛋白质在溶液中尺寸的分离，通常用作分子量的近似测量。利用已知分子量的标准蛋白质生成曲线，根据曲线估算样品分子量，并由此推断聚集状态。 动态光散射 ( DLS ) 检测可以进行更精确的分子量测量。这些测量方法不如 MS 精确，但 DLS 比 MS 更容易与 SEC 联用，因为通常用于 SEC 的缓冲流动相不会造成干扰。亚可见颗粒和可见颗粒可以从孔中完全排阻，分析超速离心 ( AUC )、场流分离 ( FFF )、光散射或不透光度法等其他替代方法可能更加合适。mAb 片段也常用 SEC 进行分析，尽管这些片段通常比聚集体更难分离。一般来说，在分子量翻倍的情况下可轻松使用 SEC 进行分离，但分离完整 mAb 与丢失了一条轻链（150 kDa 左右与 125 kDa 左右）的 mAb 是相当困难的。能很好地分离聚集体的孔径尺寸通常不能很好地分离片段，因此有时候需要采用多种方法。较小颗粒的 SEC 柱会产生较高的反压且更易堵塞，但确实可以提供更高的分离度，非常适用于这些片段的分离。对于 mAb 分析，美国药典方法推荐使用毛细管电泳十二烷基硫酸钠 ( CE-SDS ) 作为定量分析低分子量组分的最佳方法。其他增加 SEC 分离信息输出的方法还包括串联一系列不同孔径尺寸的色谱柱，或使用较小直径的色谱柱和挥发性流动相并联用 SEC 和 MS 检测器。关键质量属性系列预告完整蛋白质、电荷异构体和肽谱分离都能提供关于生物治疗产品纯度和均一性（或缺乏均一性）的关键信息。尽管存在一些重叠，但每种分离都揭示了该方法独有的信息以及推进使用某种技术的实际原因。这些内容我们将在后续的“关键质量属性”系列文章中为您一一揭秘。