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[font=宋体][font=宋体]重组蛋白([/font][font=Calibri]recombinant protein[/font][font=宋体])是指应用重组 [/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]或重组 [/font][font=Calibri]RNA [/font][font=宋体]技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因([/font][font=Calibri]gene of interest[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]GOI[/font][font=宋体]),连接到适合的表达载体,导入到特定的宿主细胞,利用宿主细胞的遗传系统,表达出有功能的蛋白质分子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]当前重组蛋白的生产主要有四大系统[/b]:原核表达系统:最常用的大肠杆菌蛋白表达,真核表达系统如酵母,哺乳动物细胞蛋白表达(常用的细胞[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体])及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗胰蛋白酶等重要的医药产品。[/font][/font][font=宋体]重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前,重组蛋白试剂已被广泛应用于生物药、细胞免疫治疗及诊断试剂的研发和生产中。其中重组蛋白药物是生物药物的重要组成成分,常被被广泛应用于医疗领域[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]包括肿瘤治疗、免疫调节、神经保护、结缔组织疾病、肾病治疗等。包括细胞因子类、抗体治疗性疫苗、激素及酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州致力于提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白生产[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][b]重组蛋白表达[/b][/url]及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production-systems][b]重组蛋白系统[/b][/url]详情的咨询与解决方案。为实验中特定的应用选择正确的表达系统是成功的关键所在。在选择表达系统时,蛋白溶解度、功能、纯化速度和产量通常是必须考虑的重要因素。此外,每个表达系统都有其独特的优势和挑战,这一点在选择时也需着重考虑。我们的专业团队将为您提供个性化的建议,以帮助您根据实验需求选择最合适的表达系统。[/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font][font=Calibri] [/font]
http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif一种新型的重组蛋白A柱 洗脱条件温和,充分防止蛋白变性蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质,能特异性地与人和哺乳动物抗体(主要是IgG)的Fc区结合。因而,将蛋白A与琼脂糖凝胶以一定的方式结合,可制备用于抗体纯化的亲和填料。早期的蛋白A柱结合的都是天然蛋白A。天然蛋白A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成,分子量约42KD,结构如图一所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强,可以吸附大量的lgG。但同时,天然蛋白A的其他非结合域会和非目标蛋白结合,这样被洗脱下来的蛋白质纯度不够,会影响到后续的试验。为了解决这些问题,科学家们运用基因工程技术,克隆出蛋白A的基因,并对其进行改造,除去了一些不重要的非结合域。偶联这种重组蛋白A的琼脂糖凝胶柱在蛋白质纯化中,的确是提高了产物的纯度。目前,市场上绝大部分重组蛋白A柱都是这种产品。但是,纯化时所用的洗脱液一般为pH=2.7的甘氨酸溶液,如果洗脱效果不是很理想,还要降低pH,采用pH=1.9的甘氨酸溶液。由此可见,此法洗脱条件比较剧烈,最后收集的蛋白质很有可能变性,或者是复性困难。 这种洗脱条件剧烈的柱子结合的重组蛋白A一般具有5个串联结构域:E、D、A、B、C。虽然每个域均可以和IgG的Fc段结合,但不同的域结合强度略有差异。因此洗脱条件不均一,而且经常需要较低的pH值。GE的重组蛋白A柱即为这种类型,如图二所示。考虑到减少串联结构域的个数,并且采取同型结构域串联,就可以避免不同结构域与抗体Fc 段亲和性的差异从而使洗脱条件温和而均一,Putus研制出了含有三个串联B结合域的重组蛋白A,如图二所示。同时,我们用Putus重组蛋白A柱和GE重组蛋白A柱纯化人血浆,纯化的结果用于比较两种纯化柱的纯化效果,结果如图三所示。GE Putus 图二、重组蛋白A结构示意图待纯化样品:人血浆实验材料:GE公司的重组蛋白A柱(E、D、A、B、C结构域串联,见图二)Putus公司的重组蛋白A柱(3个B结构域串联,见图二)实验方法:分别按照每个公司的说明书来操作,洗脱条件分别为pH值3.0和4.5, SDS-PAGE检测结果如下: 上图从左边起,泳道1为标准蛋白Marker,泳道2为经过GE填料洗脱后抗体,泳道3为经过Putus填料洗脱抗体,泳道4为人血浆。从图中,我们可以看出,与GE 重组蛋白A填料从人血浆纯化抗体纯度比较,拥有3个同型结构域的Putus填料可以获得同样纯度的抗体。但是,后者的洗脱条件仅为4.5,高于前者的洗脱条件3.0。由此可见,使用具备较少B结构域的重组蛋白A柱也能获得高纯度的IgG,并且洗脱条件温和,能防止蛋白质聚集,保护蛋白质活性。http://cp00a3cee71b5f96adf6e669b5d7f56a9f11.jpg/http://C:\Documents and Settings\adim\桌面\001.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191653_632703_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187444_1672347_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912021052_187445_1672347_3.jpg
[font=宋体][b]什么是重组蛋白?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连,这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念,融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。融合蛋白又称标签([/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]),常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结:在生物制药领域,重组蛋白具有较高的活性和纯度,更易吸收,安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素:[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统?[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易,应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说,重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务,例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单)[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息,详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]