推荐厂家
暂无
暂无
分享一个手册,既有原理也有具体操作![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122083]实用哺乳动物细胞培养手册[/url]实用哺乳动物细胞培养手册细胞培养基本概念细胞培养目的与用途细胞培养基本条件细胞培养基种类与基本成分细胞培养环境细胞培养无菌操作基本技术培养细胞生长过程:潜伏期→指数增生期→停滞期培养细胞基本形态细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒细胞培养常用物品哺乳动物细胞冷冻保存
[font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/research/car-t-therapy/car-t-cell-culture][b]T[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/research/car-t-therapy/car-t-cell-culture][b]细胞培养[/b][/url]是指在体外模拟体内环境,使[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞能够生存、生长和繁殖的一种技术。在[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养中,细胞被置于无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件的环境中,以保持其活力和功能。[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养被广泛应用于免疫学、生物医学和药物研发等领域,是研究[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞功能、探索免疫反应机制的重要手段。通过[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养,科学家可以观察和分析[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞因子分泌等过程,了解其在免疫应答中的作用。同时,[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养也为疾病治疗和预防提供了新的思路和手段,如免疫疗法、疫苗研发和细胞治疗等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养的原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是通过复合抗体孵育标记脾脏细胞中除[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞以外的其他细胞,再用磁珠结合抗体,然后用磁极吸附磁珠,那剩下的就是没有结合磁珠的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞了。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]t[/font][font=宋体]细胞培养方法包括以下步骤:[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]①抗体包被培养板:用无菌[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]制备[/font][font=Calibri]5~10 μg/mL[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]抗体,然后在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板的条件孔中,每孔加入[/font][font=Calibri]50 μL[/font][font=宋体]抗体溶液。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②接种细胞:在抗体包被的培养板中接种[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,然后将培养板置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃培养箱中[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]小时或者提前一天准备培养板,置于[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃过夜。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③洗涤和消化:在接种细胞之前,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]将培养孔中的[/font][font=Calibri]50 μL[/font][font=宋体]抗体吸出,然后用[/font][font=Calibri]200 μL PBS[/font][font=宋体]洗涤培养孔并弃去[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]。重复此步骤以去除所有未交联的抗体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入[/font][font=Calibri]1ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]PBS+EDTA[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入[/font][font=Calibri]10mlMEM[/font][font=宋体],混匀,不能吹打,分装[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]瓶。如果细胞没长满就脱落,则只需加入[/font][font=Calibri]5mlMEM[/font][font=宋体],不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]%以上,吸走培养基,加入[/font][font=Calibri]5ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]PBS+EDTA[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入[/font][font=Calibri]1ml0.05%[/font][font=宋体]胰酶,[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]度消化不超过[/font][font=Calibri]3min[/font][font=宋体],细胞完全消化脱壁,取出加入[/font][font=Calibri]10ml[/font][font=宋体]培养基轻微吸打混匀,分装[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]瓶。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤培养:将分装的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞接种到新培养瓶中,通常[/font][font=Calibri]T25[/font][font=宋体]加[/font][font=Calibri]10~12ml[/font][font=宋体]培养基培养,[/font][font=Calibri]2~3[/font][font=宋体]天左右换液一次,若培养基变黄及时换液,以维持一个相对稳定的培养条件,有利于细胞活正常生长。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]不管是我们实验室中常规的细胞培养,还是临床上的[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗等,提高[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的增殖和持久性,以及增强细胞再免疫抑制性[/font][font=Calibri]TME[/font][font=宋体]中的功能,都离不开细胞因子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、[/font][font=Calibri]APSC[/font][font=宋体]多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子可被分为白细胞介素[/font][font=Calibri](IL)[/font][font=宋体]、干扰素[/font][font=Calibri](IFN)[/font][font=宋体]、肿瘤坏死因子[/font][font=Calibri](TNF)[/font][font=宋体]、集落刺激因子[/font][font=Calibri](CSF)[/font][font=宋体]、趋化因子、生长因子[/font][font=Calibri](GF)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子[/font][font=宋体]γ链共受体家族包括[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-15[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体],它们在[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞分化、增殖和内环境稳定中起着关键作用。他们受体包括共同的γ链(γ[/font][font=Calibri]c[/font][font=宋体])和一个各自单独的受体链,下游信号激活[/font][font=Calibri]STAT[/font][font=宋体]信号通路。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/featured-review/t-cell-culture-cytokines-treatment][b]细胞因子[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/featured-review/t-cell-culture-cytokines-treatment[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]
简单介绍一下细胞培养技术,本人这段时间主要做细胞工作,和大家共勉吧!细胞培养技术一、细胞培养的条件和要求 二、细胞分离 三.体外培养细胞龄的计算四.细胞鉴别试验 五、细胞计数六、细胞传代 七、细胞的冻存和复苏 八、细胞培养用水处理 九、选择小牛血清的微量细胞培养检查法 十、葡萄糖测定法 十一、乳酸测定法十二、细胞培养方式