质控样能力验证标准

关于开展2012年国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作的通知 总站统字 [2012]68号 各省(自治区、直辖市)环境监测中心(站)、新疆生产建设兵团环境监测中心站： 　　为了解掌握各级监测站总量减排主要污染物和典型重金属污染物的监测能力现状，促进监测水平提升，根据《2012年全国环境监测工作要点》(环办[2012]22号)有关要求，我站于2012年5月-8月组织开展国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作。 　　现将《2012年国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作方案》(见附件1)印发你们，请按方案要求，认真组织实施。总站外网文件通知栏目下，可下载本方案电子件。 　　为保证考核工作顺利，信息及时沟通，请各省确定1名联系人，于2012年4月23日前将联系信息(见附件2)发至我站环境统计与污染源监测室邮箱。 　　联系人及联系方式： 　　秦承华 010-84943161 　　传真：010-84943136 E-mail：wry@cnemc.cn 　　通讯地址：北京市朝阳区安外大羊坊8号院(乙)中国环境监测总站环境统计与污染源监测室 100012。 　　附件1: 2012年国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作方案 　　附件2:污染源质控样考核联系信息 　　中国环境监测总站 　　二○一二年三月廿八日 2012年国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作方案 　　根据《2012年全国环境监测工作要点》(环办[2012]22号)有关要求，我站于2012年5月-8月组织开展国控重点污染源监测质控样考核暨能力验证工作。 　　一、工作目标 　　了解掌握各级监测站总量减排主要污染物和典型重金属污染物的监测能力现状，促进监测水平的提升。 　　二、考核内容 　　1. 废水质控样考核 　　化学需氧量(COD)、氨氮(NH3-N)。 　　2. 废气质控样考核 　　二氧化硫(SO2)、氮氧化物(NOx)。 　　3. 废水重金属考核 　　汞(Hg)、铅(Pb)、镉(Cd)、铬(Cr)、砷(As)。 　　三、考核范围 　　1. 废水质控样考核 　　各省级环境监测中心(站)，以及辖区内承担废水国控重点污染源监测的地市级环境监测站。 　　2. 废气质控样考核 　　各省级环境监测中心(站)，以及辖区内承担废气国控重点污染源监测的地市级环境监测站。 　　3. 废水重金属考核 　　各省级环境监测中心(站)，重金属污染防治重点企业所在225个地市级环境监测站。 　　四、考核方式与进度安排 　　1.考核样品的发放 　　总站定制考核样品，统一进行编号，分废水、废气考核样品2批次，5月向各省级站快递发放。 　　废水考核样品的发放数量：每个考核项目，每个被考核站高、低浓度样品各1支。 　　废气考核样品的发放数量：10个以下地市的省份，每省1瓶4L气体样品 10-15个地市的，每省2瓶4L气体样品 15个以上地市的，每省3瓶4L气体样品。 　　随每批考核样品一同快递的材料包括：《考核样品信息表》(1份)、《作业指导书》(1套)、《结果报告单》(1套)、《考核样未能测试情况说明》(1份) 上述材料的电子件，请登录总站外网文件通知栏目下载。 　　2. 省级站组织本辖区的考核 　　5-8月，各省级站负责组织本辖区的考核工作：向各地市站分发、交接废水考核样品，携带废气考核样品钢瓶到各地市站供其测试 8月20日前汇总结果报总站。 　　五、注意事项 　　1.对废气考核样品，考核工作完成后，由省级站负责将气体钢瓶快递回我站。请务必寄回，对不寄回的省，将扣减明年监督性监测经费。邮寄地址：北京朝阳安外大羊坊8号(乙)中国环境监测总站 邮编：100012 联系人：秦承华 电话：010-84943161。 　　2.接到考核样品后，请各省级站对照《考核样品信息表》(随考核样品一起发放)，检查确认样品数量及状态 如果考核样品发生损坏，请及时联系总站补发。如2012年6月1日前尚未接到考核样品，及时联系我站。 　　3.每个废气考核项目，每个被考核站高、低浓度样品各1种，校准仪器用的标准样品请各站自行准备 同一种浓度水平SO2或NOx发放2个或3个气体钢瓶的省份，每个被考核站无需测试各个气体钢瓶，仅测试其中一瓶即可，但应准确记录所测试气体钢瓶的样品编号，随考核结果一并上报。 　　4.为保障所有站的考核，各被考核站要节约使用气类考核样品，每个被考核站只用一种原理的仪器测试，读数稳定后应尽量缩短测试时间 省级站应现场监督各被考核站节约用气，确保辖区内各地市级站均能有足够的考核样品。 　　六、结果报送与通报 　　各被考核站测试结束后，填写附表中的《结果报告单》、《未能测试情况说明》(无未测试样品的，不报此件)，经三级审核签字、盖章后，将原件、电子件报送省级站汇总。 　　2012年8月20日前，省级站负责汇总本辖区内所有被考核站的《结果报告单》、《未能测试情况说明》报送总站，同时将电子件发至wry@cnemc.cn。 　　总站汇总考核结果，通报考核情况。

2018年5月17日，LGC与上海计量院联合举办的“2018年度标准品与能力验证技术交流会”在上海计量院成功举办。此次会议吸引了华东地区的百余位来自食品环境领域的企业检测实验室、出入境检验检疫、疾控、药检、第三方实验室的专业技术人员及高级管理人员出席。主办方特地邀请了多位标准物质研究行业的国内外专家分享了标准品生产、管理、实际应用以及实验室能力验证等方面的知识。2018年5月17日，现场一览上海计量院副院长韩瑜致辞上海计量院韩瑜副院长出席了本次会议，并致欢迎辞。韩院长在致辞中简要介绍了上海计量院的基本情况，并表示上海计量院在持续开展计量技术研究的同时，也非常关注与用户和国际高水平实验室的交流合作。上海计量院曾联合LGC英国总部，面向中国的检测行业专家，在上海组织全英文的“分析方法验证”的专题培训。此次联合举办研讨会更加强了上海计量院与LGC的合作，为持续追踪产业发展需求，对标国际水平提供了更多的平台和机会。LGC标准品中国区总经理孔祥锋致辞LGC标准品中国区总经理孔祥锋对于上海计量院为此次合作所做出的各种支持表达了极高的赞誉，LGC集团前身为英国政府化学家实验室，发展至今已有170余年的历史，在英国还承担着英国国家计量院化学和生物计量所的职能，并在国际计量组织中拥有代表席位，与各个国家计量机构开展合作。此次与上海计量院的合作为华东地区的广大食品环境检测实验室用户提供了一个经验交流与探讨的机会，帮助解决了实验室检测中标准品及能力验证相关的各类问题。随后，来自相关检测单位、研究机构及LGC的专家们在一天的会议里面为参会的客户带来了一场场精彩的技术报告。LGC标准品食品环境全球产品经理Liam Gormley讲解了新版 ISO17025 和CNAS-CL01 对于标准品使用和管理的解读以及使用满足ISO Guide 34的标准品对于实验室质量控制的重要性。浙江省长三角研究院的任一平老师给大家带来了《微量分析质量控制要求》的报告，任老师在现场详细介绍了实验室如何建立质量控制流程以及在实验室中如何正确选择标准物质，同时还分享了使用不正确标准物质影响实验室检测结果的经验及案例。上海计量院生物计量创新团队负责人刘刚博士分享了题为《核酸标准物质的研制和应用》的报告。上海食品所的吴轶老师做了《基质标准物质和质控样在实验室检测和管理中的应用》，分析了目前实验室检测的痛点以及基质标准物质和质控样对实验室检测和管理的作用。LGC中国食品环境专员申杰的报告题目是《实验室如何规范选择、使用和管理标准品》，报告从实验室使用的角度出发，从标准物质如何选择、如何使用以及如何管理三个方面进行了详细介绍。LGC能力验证专员沈晓骅以新版ISO 17025中对能力验证的具体要求为切入点，结合案例说明了能力验证对各个实验室的帮助，以及如何通过分析能力验证报告为实验室提供切实可行方案以确保其检测能力。现场交流

淋巴细胞亚群中的T细胞、B细胞和自然杀伤（NK）细胞，即TBNK 淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，检测其水平变化能提示机体免疫状态的改变。TBNK 淋巴细胞检测已全面应用于艾滋病、严重急性呼吸综合征（SARS）、慢性乙型肝炎、手足口病、Epstein-Barr 病毒（EBV）感染、流行性出血热等多种感染性疾病患者的免疫评估及诊治，也逐渐成为自身免疫病、肿瘤、器官移植、血液系统疾病、重症监护医疗、老年医学及保健等学科的免疫监测辅助工具。国家卫健委于今年4月更新的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》在仪器和项目检测的性能验证及质量控制这块做了大篇幅的更新，从而让TBNK的检测更加规范。而质量控制是结果准确发布的前提，因此做好TBNK的性能验证及质控为临床结果的准确发布保驾护航。今天我们一起来看一看指南的介绍。仪器性能验证01验证时机 新仪器启用前仪器搬移后仪器发生重大维修后（如更换激光、光纤、光电倍增管或流动室等）仪器软件系统更新后仪器性能出现问题或环境严重失控时02验证项目灵敏度散射光灵敏度：采用已知大小的校准微球检测仪器的FSC和SSC。在散射光FSC/SSC散点图上，应检测出直径0.5mm 或更小的微球，或满足仪器出厂声明的要求。荧光灵敏度：流式细胞仪能检测到标准荧光微球上的最少荧光分子数， 可用MESF表示，常用荧光通道应为FITC≤ 200 MESF、PE≤100 MESF 、APC≤200 MESF，或满足仪器出厂声明的要求。以8峰微球检测MESF举例，每个荧光通道获取8峰微球的MFI，根据微球说明书提供的软件，计算相对应荧光通道的MESF。分辨率散射光分辨率：采用EDTA盐或肝素抗凝全血，取适量样品稀释后直接上机测定，标本在FSC/SSC散点图可将红细胞和血小板清晰地区分开；取适量样品裂解红细胞后上机测定，标本在FSC/SSC散点图可将淋巴细胞、单核细胞、粒细胞清晰地区分开，即认为散射光分辨率符合要求。荧光通道分辨率：采用校准微球上机测定，各荧光通道的分辨率CV值应符合制造商声明的要求。荧光通道线性可采用含有不同荧光强度的校准微球（已知其相应荧光素的MESF）进行检测，计算每 一种荧光微球的MFI，以MEFL数（y）和平均荧光强度（x）的线性回归，计算相关系数（r）。相关系数r应≥0.98，此方法适用于校准微球上的荧光素可被定量检测的荧光通道。以FITC/PE通道8峰微球举例仪器稳定性将标准微球充分混匀后上机进行试验，测试完成后利用直方图分析实验结果，计算标准微球的平均荧光强度FL1，连续8小时开机后，再通道条件下重复检测，得到标准微球的平均荧光强度FL2，根据两次检测结果计算偏差，公式见下，每一通道的平均荧光强度变化范围均应在基线值±10%范围内。B=FL1-FL2FL2x 100 %携带污染率使用浓度为5000个/µ L～10000个/µ L的校准微球上机进行测定，获取至少100000个颗粒，连续测定3 次，计算检测通道内设定区域的颗粒数，分别记为H1、H2、H3；再使用空白溶液上机测定，获取颗粒30s，连续测试3次，计算该检测通道内设定区域的颗粒数，分别记为L1、L2、L3。按照此步骤重复循环3 次。携带污染率=L1-L3H3-L3x 100 %取上述公式计算最大值。携带污染率应≤0.5％。TBNK 性能验证01验证时机项目开展初期更换试剂品牌后更换检测系统后仪器的重大部件维修后02验证项目精密度批内精密度：选取至少5个新鲜全血样品，样品的淋巴细胞亚群细胞计数应覆盖低中高水平。每个标品从荧光染 色到上机检测重复3次，并确保所有测试都在同一台仪器的同一批内测定，整个操作过程由同一个操作 人员完成。先计算每个样品重复3次后检测结果的CV,然后计算所有样品的平均CV，所有样品的平均CV 宜＜10％，最大不超过20％。实验室可根据不同水平的淋巴细胞亚群细胞计数设定不同程度的可接受CV 标准。日间精密度：宜使用正常和异常两个浓度水平的全血质控品，每天从荧光染色到上机测定重复操作3次， 至少重 复4天，整个操作过程可由不同操作人员完成。先计算每天每个全血质控品重复3次检测结果的CV值，然 后据此计算每个全血质控品4天的平均CV，最后得出两个全血质控品检测结果的平均CV。判定标准同上。稳定性样品稳定性：验证样品在确定的抗凝及处置条件下的稳定性。采集健康人或患者的样品至少 5 份，即刻染色-裂 解-固定并上机测定，以此结果作为基线参考水平，按照实验室的具体环境温度控制条件和预期的样品待检时间，在抗凝剂保存时间内，设置不同的时间点对上述样品进行重复处理和上机测定，获取检测结果，并与基线水平结果进行比较，以相对偏差或绝对偏差表示，检测结果应符合实验室制定的验证要求。淋巴细胞亚群计数过低者，宜以绝对偏差进行验证；亦可对试剂说明书声明的稳定性条件进行验证。处理后标本稳定性：旨在明确处理后标本的最长待检时间。采集健康人或患者的样品至少5份，对完成染色-裂解-固定 后的标本即刻上机检测结果作为基线水平。按实验室获得检测结果的最长可接受时间为期限，设置不同 的时间点对固定后标本进行上机检测。结果判定同上一条。亦可对试剂说明书声明的稳 定性条件进行验证。线性范围适用于淋巴细胞亚群绝对细胞计数。根据试剂说明书声明的线性范围，取一份淋巴细胞计数或亚群 计数接近线性范围上限的临床样品，采用样品稀释液按照比例制备 5～9 个不同浓度的标本，浓度范围应覆盖临床医学决定水平；通过染色-裂解-固定后，上机测定， 每个标本重复测定 4 次，取均值。分析实际测定的亚群细胞数量均值与理论值之间的相关性，相关系数 r 应≥0.975。可比性抗体试剂批次变更前后的可比性验证：宜使用至少3份健康人的新鲜全血样品和2份不同浓度质控品，采用新批号抗体试剂和当前批号抗体 试剂进行荧光染色、上机检测，以当前批号试剂检测结果为参考，计算相对偏差或绝对偏差。检测结果 应符合实验室制定的验证要求。验证要求的制定应考虑不同水平的淋巴细胞亚群计数设定不同程度的偏 差值，淋巴细胞亚群计数过低者，宜以绝对偏差进行验证。不同检测系统间的可比性验证：宜使用至少 5 份新鲜全血样品（样品的淋巴细胞亚群细胞计数应覆盖低中高水平）和 2 份不同浓度 水平的全血质控品，完成染色-裂解-固定后，分别采用待评价检测系统和比对检测系统进行检测。比对 检测系统应为仪器性能良好、规范开展室内质量控制、室间质量评价成绩合格的淋巴细胞亚群常规检测 系统，以比对检测系统的测定结果为参考，计算相对偏差或绝对偏差。检测结果应符合实验室制定的验 证要求。验证要求的制定应考虑不同水平的淋巴细胞亚群计数设定不同程度的偏差值，淋巴细胞亚群计 数过低者，宜以绝对偏差进行验证。不同检测人员间的可比性验证：宜使用至少5份新鲜全血样品和2份不同浓度水平的全血质控品，分别由实验室内淋巴细胞亚群检测 培训合格的不同检测人员完成染色-裂解-固定、上机检测和数据分析，计算不同检测人员间检测结果的 相对偏差或绝对偏差。验证结果应符合实验室制定的验证要求。准确度可使用室间质评回报结果验证淋巴细胞亚群项目的准确度。TBNK 室内质控01质控品选择应首选商品化全血质控品进行室内质控，并至少包括两个浓度水平，CD4+T细胞的绝对细胞计数应包括低值浓度水平质控。02检测时间检测当日至少做一次质控，质控品应和患者样品同时进行免疫荧光染色，并在患者标本检测前进行上机测定和数据分析。检测完成后做好相应质控记录。03靶值建立实验室应建立每一批次质控品的靶值和可接受范围，不可直接引用说明书提供的质控范围。更换新批号质控品前，可通过每日检测4次质控品（不同时间点），连续5天收集20次数据，计算均值。均值作为新批次靶值，结合既往累计CV值推算SD。04失控判断标准应至少选择13S和22S作为失控判断标准，应有相应的失控纠正措施。如需进一步了解性能验证的内容以及质控品的介绍，可与贝克曼库尔特生命科学的技术支持和销售联系。 ● 参考文献： 1.中华医学会健康管理学分会,TBNK淋巴细胞检测在健康管理中的应用专家共识.中华健康管理学杂志,2023，17(02):85-952.WS/T360—2024,流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南3.WS/T 406-2012 临床血液学检验常规项目分析质量要求4. YY/T0588-2017 流式细胞仪