梅里埃细菌鉴定仪原理

26日，习近平在法国里昂参观了梅里埃生物科研中心。在中法建交50年之际，习近平为何特别在为期三天的对法访问中安排参观梅里埃，这家公司究竟有什么特别之处？梅里埃生物科研中心（Marcy L’étoile）成立于1963年，奠基人马塞梅里埃（Marcel Mérieux）是细菌学之父路易巴斯德（Louis Pasteur）的学生，如今已经传至第四代家族继承人阿兰梅里埃（Alain Mérieux）。创立之初公司只有15 名员工，如今全球雇员已超过7000人。梅里埃专注于微生物的开发和生产，并开发经营相应的仪器、试剂、软件以及服务。其在全球细菌学市场上独占鳌头，市场占有率达42％，同时，公司也是全球第二大感染性疾病诊断厂家，全球市场占有率达13.5%。梅里埃的产品主要用于筛查传染病及癌症、监测药效及心血管突发事件等，此外，公司也涉足食品及化妆品的微生物检验。由于先后与主要从事微生物的研究的API，在微生物自动化方面卓有成就的VITEK的联合，梅里埃形成了一个在微生物鉴定技术领域，从手工到自动化等各方面均居世界领先地位的集团。2006年~2011年是公司扩张期，共发起并购交易9起，2011年斥资1.83亿欧元收购法国体外诊断公司AES Laboratoire，2013年9月，其以4.5亿美金收购BioFire公司。在此次出访中，习近平表示，中国正在推动卫生事业改革发展，完善公共卫生和医疗服务体系是重要工作之一，特别是在重大传染病防治能力建设方面。中法卫生领域交流密切，希望梅里埃集团继续积极促进中法卫生合作。但是梅里埃与中国的渊源却并不源于生物制剂行业的商业合作，而是家族传统。阿兰梅里埃2012年访华时，就受到时任国家副主席习近平的接见。这不是他第一次来中国，1978年他就已经开始来华商谈合作，其父夏尔梅里埃更是中法民间交流与商业合作的破冰者之一，而其岳父贝利埃的汽车合作项目也是中法关系史上的一段佳话。早在中法建交前，贝利埃积极推动两国汽车合作，并得到周恩来、邓小平等中国老一代领导人的赞扬。结缘于此，在中法建交50周年之际，阿兰·梅里埃出任庆祝活动法方赞助委员会主席。

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

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