荧光显微成像系统

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荧光显微成像系统相关的仪器

  • 荧光和荧光寿命分子包含多个单能态S0、S1、S2… 和三重态T1… ,每个能态都包含多个精细的能级。正常情况下,大部分电子处在*低能态即基态S0 的*低能级上,当分子被光束照射,会吸收光子能量,电子被激发到更高的能态S1 或S2 上,在S2 能态上的电子只能存在很短暂的时间,便会通过内转换过程跃迁到S1 上,而S1 能态上的电子亦会在极短时间内跃迁到S1 的*低能级上,而这些电子会存在一段时间后通过震荡弛豫辐射跃迁到基态,这个过程会释放一个光子,即荧光。此外,亦会有电子跃迁至三重态T1 上,再由T1 跃迁至基态,我们称之为磷光。荧光特性研究荧光特性时,主要在以下几方面进行分析:激发光谱,发射光谱、荧光强度、偏振荧光、荧光发光量子产率、荧光寿命等。其中荧光寿命(Fluorescence Lifetime)是指荧光分子在激发态上存在的平均时间(纳秒量级)。荧光寿命测试荧光寿命一般在几纳秒至几百纳秒之间,如今主要有两类测试方法:时域测量和频域测量时间稳定性实验测试曲线:1 时域测量由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1,接着测量荧光的发射几率随时间的变化。其中目前广泛应用的是时间相关单光子计数,即TCSPC(Time Correlated Single Photon Counting)时间相关单光子计数(TCSPC) 实现了从百ps-ns-us 的瞬态测试,此方法对数据的获取完全依赖快速探测器和高速电路。用统计的方法计算样品受激后发出的第一个( 也是*一的一个) 光子与激发光之间的时间差,也就是下图的START( 激发时刻) 与STOP( 发光时刻) 的时间差。由于对于Stop 信号的要求,所以TCSPC 一般需要高重复频率的光源作为激发源,其重复至少要在100KHz 以上,多数的光源都会达到MHz 量级;同时,在一般情况下还要对Stop 信号做数量上的控制,做到尽量满足在一个激发周期内,样品产生且只产生一个光子的有效荧光信号,避免光子对的出现。2 频域测量对连续激发光进行振幅调制后,分子发出的荧光强度也会受到振幅调制,两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差,因此可以测量该相位差计算荧光寿命。 左图为正弦调制激发光(绿色)频域显示,发射光信号(红色)相应的相位变化频域显示。右图为对应不同寿命的调制和相位的频域显示。TM- 调制寿命,TP- 相位寿命。[1]显微荧光寿命成像技术(FLIM)显微荧光寿命成像技术(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,FLIM)是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术,由于其不受样品浓度影响,具有其他荧光成像技术无法代替的优异性能,目前在生物医学工程、光电半导体材料等领域是一种重要的表征测量手段。FLIM 一般分为宽场FLIM 和激光扫描FLIM。宽场FLIM(Wide Field FLIM,WFM)该技术是用平行光照明并由物镜聚焦样品获得荧光信号,再由一宽场相机采集荧光成像。宽场FLIM 常用于快速获取大面积样品成像。时域或是频域寿命采集都可以应用在宽场成像FLIM 上。宽场FLIM 有更高帧率和低损伤的优势。2 激光扫描FLIM(Laser Scanning FLIM,LSM)激光扫描FLIM 是针对选定区域内的样品逐点获取其荧光衰减曲线,再经过拟合最终合成荧光寿命图像。相比宽场FLIM,其在空间分辨率、信噪比方面有更大的优势。扫描方式有两种:一种是固定样品,移动激光进行扫描,一种是固定激光,电动位移台带动样品移动进行扫描。显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用材料科学领域宽禁带半导体如GaN、SiC 等体系的少子寿命mapping 测量量子点如CdSe@ZnS 等用作荧光寿命成像显微镜探针钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测铜铟镓硒CIGS,铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测镧系上转换纳米颗粒GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究生命科学领域细胞体自身荧光寿命分析自身荧光相对荧光标记的有效区分活细胞内水介质的PH 值测量局部氧气浓度测量具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分活细胞内钙浓度测量时间分辨共振能量转移(FRET):纳米级尺度上的远差测量,环境敏感的FRET 探针定量测量代谢成像:NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用案例1 用荧光分子对海拉细胞进行染色用荧光分子转子Bodipy-C12 对海拉细胞(宫颈癌细胞的一种) 进行染色。(a) 显微荧光寿命成像图,寿命范围1ns(蓝色)到2.5ns(红色);(b) 荧光寿命直方图,脂肪滴的短寿命约在1.6ns 附近,细胞中其他位置寿命较长,在1.8ns 附近。用荧光分子转子的时间分辨测量*大的好处在于荧光寿命具备足够清晰的标签特性,且与荧光团的浓度无关。[2]2 金属修饰荧光金属修饰荧光:(a) 荧光寿命是荧光团到金表面距离的函数;(b) 用绿色荧光蛋白(GFP)标记乳腺腺癌细胞的细胞膜的共聚焦xz 横截面,垂直比例尺:5m;(c) b 图的FLIM 图,金表面附近的GFP 荧光寿命缩短。[2]3 钙钛矿太阳能电池下图研究中,展示了一种动态热风(DHA)制备工艺来控制全无机PSC 的薄膜形态和稳定性,该工艺不含有常规的有害反溶剂,可以在大气环境中制备。同时,钙钛矿掺有钡(Ba2+) 碱金属离子(BaI2:CsPbI2Br)。这种DHA 方法有助于形成均匀的晶粒并控制结晶,从而形成稳定的全无机PSC。从而在环境条件下形成完整的黑色相。经过DHA处理的钙钛矿光伏器件,在0.09cm小面积下,效率为14.85%,在1x1cm的大面积下,具有13.78%的*高效率。DHA方法制备的器件在300h后仍然保持初始效率的92%。4 MQWs 多量子阱研究在(a) 蓝宝石和(b) GaN 上生长的MQWs 的共焦PL mapping 图像。具有较小尺寸的发光团的最高密度是观察到在GaN 上生长的MQWs。在(c) 蓝宝石和(d)GaN 上生长的MQWs 的共焦TRPL mapping 图。仅对于在GaN 上生长的MQWs,强的PL 强度区域与较长PL 衰减时间的区域很好地匹配。在(e) 蓝宝石和(f)GaN 上生长的MQWs 在A 点和B 点测量的局部PL 衰减曲线,均标记在图中。对于在GaN 上生长的MQWs,点A 和B 之间的PL 衰减时间差更高。显微荧光寿命成像系统FLIM参数配置北京卓立汉光仪器有限公司提供的显微荧光寿命成像系统是基于显微和时间相关单光子计数技术,配合高精度位移台得到微观样品表面各空间分布点的荧光衰减曲线,再经过用数据拟合,得到样品表面发光寿命表征的影像。是光电半导体材料、荧光标记常用荧光分子等类似荧光寿命大多分布在纳秒、几十、几百纳秒尺度的物质的选择。参数指标:系统性能指标光谱扫描范围200-900nm最小时间分辨率16ps荧光寿命测量范围500ps-1μs@ 皮秒脉冲激光器空间分辨率≤1μm@100X 物镜@405nm 皮秒脉冲激光器荧光寿命检测IRF≤2ns配置参数激发源及匹配光谱范围(光源参数基于50MHz 重复频率)375nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:30ps,平均功率1.5mW,荧光波段:400-850nm405nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:25ps,平均功率2.5mW,荧光波段:430-920nm450nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:50ps,平均功率1.9mW,荧光波段:485-950nm488nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:70ps,平均功率1.3mW,荧光波段:500-950nm510nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:75ps,平均功率1.1mW,荧光波段:535-950nm635nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:65ps,平均功率4.3mW,荧光波段:670-950nm660nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:60ps,平均功率1.9mW,荧光波段:690-950nm670nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:40ps,平均功率0.8mW,荧光波段:700-950nm科研级正置显微镜落射明暗场卤素灯照明,12V,100W5 孔物镜转盘,标配明场用物镜:10×,50×,100×监视CCD:高清彩色CMOS 摄像头,像元尺寸:3.6μm*3.6μm,有效像素:1280H*1024V,扫描方式:逐行,快门方式:电子快门电动位移台高精度电动XY 样品台,行程:75*50mm(120*80mm 可选),最小步进:50nm,重复定位精度:< 1μm光谱仪320mm 焦距影像校正单色仪,双入口、狭缝出口、CCD 出口,配置三块68×68mm 大面积光栅,波长准确度:±0.1nm,波长重复性:±0.01nm,扫描步距:0.0025nm,焦面尺寸:30mm(w)×14mm(h),狭缝缝宽:0.01-3mm 连续电动可调探测器:制冷型紫外可见光电倍增管,光谱范围:185-900nm(标配,可扩展)光谱CCD(可扩展PLmapping)低噪音科学级光谱CCD(LDC-DD),芯片格式:2000x256,像元尺寸:15μm*15μm, 探测面:30mm*3.8mm,背照式深耗尽芯片,低暗电流,*低制冷温度-60℃ @25℃环境温度,风冷,最高量子效率值95%时间相关单光子计数器(TCSPC)时间分辨率:16/32/64/128/256/512/1024ps… … 33.55μs,死时间< 10ns,*高65535 个直方图时间窗口,瞬时饱和计数率:100Mcps,支持稳态光谱测试;OmniFluo-FM 荧光寿命成像专用软件控制功能:控制样品平移台移动,通过显微镜的明场光学像定位到合适区域,框选扫描区域进行扫描,逐点获得荧光衰减曲线,实时生成荧光图像等数据处理功能:自动对扫描获得的FLIM 数据,逐点进行多组分荧光寿命拟合(组分数小于等于4),对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示图像处理功能:直方图、色表、等高线、截线分析、3D 显示等操作电脑品牌操作电脑,Windows 10 操作系统软件界面控制测试界面测试软件的界面遵循“All In One”的简洁设计思路,用户可在下图所示的控制界面中完成采集数据的所有步骤:包括控制样品平移台移动,通过显微镜的明场光学像定位到合适区域,框选扫描区域进行扫描,逐点获得荧光衰减曲线,实时生成荧光图像等。数据处理界面功能丰富的荧光寿命数据处理软件,充分挖掘用户数据中的宝贵信息。可自动对扫描获得的FLIM 数据,逐点进行多组分荧光寿命拟合(组分数小于等于4),对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示。自主开发的一套时间相关单光子计数(TCSPC)荧光寿命的拟合算法,可对荧光衰减曲线中最多包含4 个时间组分的荧光过程进行拟合,获得每个组分的荧光寿命,光子数比例,计算评价函数和残差。TCSPC 荧光寿命通常并非简单的指数衰减过程,而是与光源及探测器相关的仪器响应函数(IRF)与荧光衰减过程相互卷积的结果,因此适当的拟合方法和参数选择对获得正确可靠的荧光寿命非常重要。该软件可导入实际测量的IRF 对衰减曲线进行卷积计算和拟合。但是大多数情况下, IRF 很难正确的从实验获得,针对这种情况,软件提供了两种无需实验获取IRF 的拟合方法:1.通过算法对数据上升沿进行拟合,获得时间响应函数IRF,然后对整条衰减曲线进行卷积计算和拟合得到荧光寿命。2.对于衰减时间远长于仪器响应时间的,可对衰减曲线下降沿进行直接的指数拟合。该软件经过大量测试,可以很好的满足各种场合的用户需求。MicroLED 微盘的荧光强度像(3D 显示):
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  • 荧光和荧光寿命分子包含多个单能态S0、S1、S2…和三重态T1…,每个能态都包含多个精细的能级。正常情况下,大部分电子处在*低能态即基态S0 的*低能级上,当分子被光束照射,会吸收光子能量,电子被激发到更高的能态S1 或S2 上,在S2 能态上的电子只能存在很短暂的时间,便会通过内转换过程跃迁到S1 上,而S1 能态上的电子亦会在极短时间内跃迁到S1 的*低能级上,而这些电子会存在一段时间后通过震荡弛豫辐射跃迁到基态,这个过程会释放一个光子,即荧光。此外,亦会有电子跃迁至三重态T1 上,再由T1 跃迁至基态,我们称之为磷光。荧光特性研究荧光特性时,主要在以下几方面进行分析:激发光谱,发射光谱、荧光强度、偏振荧光、荧光发光量子产率、荧光寿命等。其中荧光寿命(Fluorescence Lifetime)是指荧光分子在激发态上存在的平均时间(纳秒量级)。荧光寿命测试荧光寿命一般在几纳秒至几百纳秒之间,如今主要有两类测试方法:时域测量和频域测量时间稳定性实验测试曲线:1 时域测量由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1,接着测量荧光的发射几率随时间的变化。其中目前广泛应用的是时间相关单光子计数,即TCSPC(Time Correlated Single Photon Counting)时间相关单光子计数(TCSPC) 实现了从百ps-ns-us 的瞬态测试,此方法对数据的获取完全依赖快速探测器和高速电路。用统计的方法计算样品受激后发出的*一个( 也是唯一的一个) 光子与激发光之间的时间差,也就是下图的START( 激发时刻) 与STOP( 发光时刻) 的时间差。由于对于Stop 信号的要求,所以TCSPC 一般需要高重复频率的光源作为激发源,其重复至少要在100KHz 以上,多数的光源都会达到MHz 量级;同时,在一般情况下还要对Stop 信号做数量上的控制,做到尽量满足在一个激发周期内,样品产生且只产生一个光子的有效荧光信号,避免光子对的出现。2 频域测量对连续激发光进行振幅调制后,分子发出的荧光强度也会受到振幅调制,两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差,因此可以测量该相位差计算荧光寿命。 左图为正弦调制激发光(绿色)频域显示,发射光信号(红色)相应的相位变化频域显示。右图为对应不同寿命的调制和相位的频域显示。TM- 调制寿命,TP- 相位寿命。[1]显微荧光寿命成像技术(FLIM)显微荧光寿命成像技术(Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy,FLIM)是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术,由于其不受样品浓度影响,具有其他荧光成像技术无法代替的优异性能,目前在生物医学工程、光电半导体材料等领域是一种重要的表征测量手段。FLIM 一般分为宽场FLIM 和激光扫描FLIM。宽场FLIM(Wide Field FLIM,WFM)该技术是用平行光照明并由物镜聚焦样品获得荧光信号,再由一宽场相机采集荧光成像。宽场FLIM 常用于快速获取大面积样品成像。时域或是频域寿命采集都可以应用在宽场成像FLIM 上。宽场FLIM 有更高帧率和低损伤的优势。2 激光扫描FLIM(Laser Scanning FLIM,LSM)激光扫描FLIM 是针对选定区域内的样品逐点获取其荧光衰减曲线,再经过拟合*终合成荧光寿命图像。相比宽场FLIM,其在空间分辨率、信噪比方面有更大的优势。扫描方式有两种:一种是固定样品,移动激光进行扫描,一种是固定激光,电动位移台带动样品移动进行扫描。FLIM 应用材料科学领域宽禁带半导体如GaN、SiC 等体系的少子寿命mapping 测量量子点如CdSe@ZnS 等用作荧光寿命成像显微镜探针钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测铜铟镓硒CIGS,铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测镧系上转换纳米颗粒GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究生命科学领域细胞体自身荧光寿命分析自身荧光相对荧光标记的有效区分活细胞内水介质的PH 值测量局部氧气浓度测量具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分活细胞内钙浓度测量时间分辨共振能量转移(FRET):纳米级尺度上的远差测量,环境敏感的FRET 探针定量测量代谢成像:NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像OmniFluo-FLIM系列显微荧光寿命成像系统应用案例1 用荧光分子对海拉细胞进行染色用荧光分子转子Bodipy-C12 对海拉细胞(宫颈癌细胞的一种) 进行染色。(a) 显微荧光寿命成像图,寿命范围1ns(蓝色)到2.5ns(红色);(b) 荧光寿命直方图,脂肪滴的短寿命约在1.6ns 附近,细胞中其他位置寿命较长,在1.8ns 附近。用荧光分子转子的时间分辨测量*大的好处在于荧光寿命具备足够清晰的标签特性,且与荧光团的浓度无关。[2]2 金属修饰荧光金属修饰荧光:(a) 荧光寿命是荧光团到金表面距离的函数;(b) 用绿色荧光蛋白(GFP)标记乳腺腺癌细胞的细胞膜的共聚焦xz 横截面,垂直比例尺:5 m;(c) b 图的FLIM 图,金表面附近的GFP 荧光寿命缩短。[2]3 钙钛矿太阳能电池下图研究中,展示了一种动态热风(DHA)制备工艺来控制全无机PSC 的薄膜形态和稳定性,该工艺不含有常规的有害反溶剂,可以在大气环境中制备。同时,钙钛矿掺有钡(Ba2+) 碱金属离子(BaI2:CsPbI2Br)。这种DHA 方法有助于形成均匀的晶粒并控制结晶,从而形成稳定的全无机PSC。从而在环境条件下形成完整的黑色相。经过DHA处理的钙钛矿光伏器件,在0.09cm小面积下,效率为14.85%,在1x1cm的大面积下,具有13.78%的*高效率。DHA方法制备的器件在300h后仍然保持初始效率的92%。4 MQWs 多量子阱研究在(a) 蓝宝石和(b) GaN 上生长的MQWs 的共焦PL mapping 图像。具有较小尺寸的发光团的*高密度是观察到在GaN 上生长的MQWs。在(c) 蓝宝石和(d)GaN 上生长的MQWs 的共焦TRPL mapping 图。仅对于在GaN 上生长的MQWs,强的PL 强度区域与较长PL 衰减时间的区域很好地匹配。在(e) 蓝宝石和(f)GaN 上生长的MQWs 在A 点和B 点测量的局部PL 衰减曲线,均标记在图中。对于在GaN 上生长的MQWs,点A 和B 之间的PL 衰减时间差更高。OmniFluo-FLIM系列显微荧光寿命成像系统参数配置北京卓立汉光仪器有限公司提供的显微荧光寿命成像系统是基于显微和时间相关单光子计数技术,配合高精度位移台得到微观样品表面各空间分布点的荧光衰减曲线,再经过用数据拟合,得到样品表面发光寿命表征的影像。是光电半导体材料、荧光标记常用荧光分子等类似荧光寿命大多分布在纳秒、几十、几百纳秒尺度的物质的不二选择。参数指标:系统性能指标光谱扫描范围200-900nm*小时间分辨率16ps荧光寿命测量范围500ps-1μs@ 皮秒脉冲激光器空间分辨率≤1μm@100X 物镜@405nm 皮秒脉冲激光器荧光寿命检测IRF≤2ns配置参数激发源及匹配光谱范围(光源参数基于50MHz 重复频率)375nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:30ps,平均功率1.5mW,荧光波段:400-850nm405nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:25ps,平均功率2.5mW,荧光波段:430-920nm450nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:50ps,平均功率1.9mW,荧光波段:485-950nm488nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:70ps,平均功率1.3mW,荧光波段:500-950nm510nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:75ps,平均功率1.1mW,荧光波段:535-950nm635nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:65ps,平均功率4.3mW,荧光波段:670-950nm660nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:60ps,平均功率1.9mW,荧光波段:690-950nm670nm 皮秒脉冲激光器,脉宽:40ps,平均功率0.8mW,荧光波段:700-950nm科研级正置显微镜落射明暗场卤素灯照明,12V,100W5 孔物镜转盘,标配明场用物镜:10×,50×,100×监视CCD:高清彩色CMOS 摄像头,像元尺寸:3.6μm*3.6μm,有效像素:1280H*1024V,扫描方式:逐行,快门方式:电子快门电动位移台高精度电动XY 样品台,行程:75*50mm(120*80mm 可选),*小步进:50nm,重复定位精度:< 1μm光谱仪320mm 焦距影像校正单色仪,双入口、狭缝出口、CCD 出口,配置三块68×68mm 大面积光栅,波长准确度:±0.1nm,波长重复性:±0.01nm,扫描步距:0.0025nm,焦面尺寸:30mm(w)×14mm(h),狭缝缝宽:0.01-3mm 连续电动可调探测器:制冷型紫外可见光电倍增管,光谱范围:185-900nm(标配,可扩展)光谱CCD(可扩展PLmapping)低噪音科学级光谱CCD(LDC-DD),芯片格式:2000x256,像元尺寸:15μm*15μm, 探测面:30mm*3.8mm,背照式深耗尽芯片,低暗电流,*低制冷温度-60℃ @25℃环境温度,风冷,*高量子效率值95%时间相关单光子计数器(TCSPC)时间分辨率:16/32/64/128/256/512/1024ps……33.55μs,死时间< 10ns,*高65535 个直方图时间窗口,瞬时饱和计数率:100Mcps,支持稳态光谱测试;OmniFluo-FM 荧光寿命成像专用软件控制功能:控制样品平移台移动,通过显微镜的明场光学像定位到合适区域,框选扫描区域进行扫描,逐点获得荧光衰减曲线,实时生成荧光图像等数据处理功能:自动对扫描获得的FLIM 数据,逐点进行多组分荧光寿命拟合(组分数小于等于4),对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示图像处理功能:直方图、色表、等高线、截线分析、3D 显示等操作电脑品牌操作电脑,Windows 10 操作系统 FLIM 软件界面控制测试界面测试软件的界面遵循“All In One”的简洁设计思路,用户可在下图所示的控制界面中完成采集数据的所有步骤:包括控制样品平移台移动,通过显微镜的明场光学像定位到合适区域,框选扫描区域进行扫描,逐点获得荧光衰减曲线,实时生成荧光图像等。数据处理界面功能丰富的荧光寿命数据处理软件,充分挖掘用户数据中的宝贵信息。可自动对扫描获得的FLIM 数据,逐点进行多组分荧光寿命拟合(组分数小于等于4),对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示。自主开发的一套时间相关单光子计数(TCSPC)荧光寿命的拟合算法,可对荧光衰减曲线中*多包含4 个时间组分的荧光过程进行拟合,获得每个组分的荧光寿命,光子数比例,计算评价函数和残差。TCSPC 荧光寿命通常并非简单的指数衰减过程,而是与光源及探测器相关的仪器响应函数(IRF)与荧光衰减过程相互卷积的结果,因此适当的拟合方法和参数选择对获得正确可靠的荧光寿命非常重要。该软件可导入实际测量的IRF 对衰减曲线进行卷积计算和拟合。但是大多数情况下, IRF 很难正确的从实验获得,针对这种情况,软件提供了两种无需实验获取IRF 的拟合方法:NO.1 通过算法对数据上升沿进行拟合,获得时间响应函数IRF,然后对整条衰减曲线进行卷积计算和拟合得到荧光寿命。NO.2对于衰减时间远长于仪器响应时间的,可对衰减曲线下降沿进行直接的指数拟合。该软件经过大量测试,可以很好的满足各种场合的用户需求。MicroLED 微盘的荧光强度像(3D 显示):测试案例
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  • 宽场荧光显微成像模组Wide-field Fluorescence Microscope Module以自动化显微镜模组为基础,针对 SiC 等化合物半导体晶圆位错、层错等缺陷检测需求。无须化学腐蚀、解理等样品前处理工艺,非接触、无损、整晶圆检测。产品特性和核心技术:激光自动聚焦。自主研制的激光辅助离焦量传感器。可在紫外激发光照射样品并采集荧光信号的同时工作,实现自动聚焦和表面跟踪。紫外暗场照明。标配波长 275 nm 紫外激发光,可按用户要求定制其它波长激发光。可同位采集明场显微像、可见光波段暗场荧光像、红外波段暗场荧光像,分析样品中位错、层错等。晶格缺陷的分布。全自动操作。自动化的控制软件和数据处理软件,全软件操作。相关国家标准:《中华人民共和国国家标准 GB_T 43493.3-2023 半导体器件 功率器件用碳化硅同质外延片缺陷的无损检测识别判据 第 3 部分:缺陷的光致发光检测方法》(2023 年 12 月 28 日发布,2024 年7月1日实施)性能参数:应用案例:6 英寸 SiC 外延片缺陷检测堆叠层错(SF)基面位错(BPD)
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  • 【原创】如何选购显微数码成像分析系统?

    一、前沿2009年10月6日,瑞典皇家科学院宣布,将2009年诺贝尔物理学奖的一半授予美国科学家威拉德• 博伊尔和乔治• 史密斯,因为他们于1969年发明了半导体集成电路成像技术,CCD感应器。经过四十年的发展,CCD技术由实验室逐步走向了市场,具有越来越广阔的应用。CCD数码成像对摄影产生了革命性的影响。在感光胶片之外,人们可以通过电子电路捕捉图像,这些以数字形式存在的图像更加易于处理和分发。数字图像已经成为许多研究领域中不可替代的重要工具。数码成像技术应用到显微镜上,以替代以往的胶卷拍摄,现在已经广泛应用了。以前我们用胶卷来进行显微拍摄,要等一卷拍完,冲洗出来才能确定拍摄的图像是否清晰,如果拍摄的图像不理想,而显微观察的样品又失效了,就需要重新制作样品,给研究工作带来很大的不便,而现在使用显微数码相机来拍摄显微图像,所见即所得,当时就是保存处理,甚至统计分析,极大的提高了工作效率。二、显微数码成像系统的组成显微数码成像系统包括CCD/CMOS专业相机,图像采集处理软件,显微镜接口,数据传输线等,其中最核心的设备是CCD和CMOS图像传感器,前者由光电耦合器件构成,后者由金属氧化物器件构成。两者都是光电二极管结构感受入射光并转换为电信号,主要区别在于读出信号所用的方法。CCD(Charge Coupled Device ,感光耦合组件)上感光组件的表面具有储存电荷的能力,并以矩阵的方式排列。当其表面感受到光线时,会将电荷反应在组件上,整个CCD上的所有感光组件所产生的信号,就构成了一个完整的画面。CCD的结构分三层 ,第一层“微型镜头”“ON-CHIP MICRO LENS”,这是为了有效提升CCD的总像素,又要确保单一像素持续缩小以维持CCD的标准面积,在每一感光二极管上(单一像素)装置微小镜片。CCD的第二层是“分色滤色片”,目前有两种分色方式,一是RGB原色分色法,另一个则是CMYG补色分色法。原色CCD的优势在于画质锐利,色彩真实,但缺点则是噪声问题。第三层:感光层,这层主要是负责将穿过滤色层的光源转换成电子信号,并将信号传送到影像处理芯片,将影像还原。数码成像的核心器件除CCD,现在越来越多的使用CMOS(Complementary Metal-Oxide Semiconductor,互补性氧化金属半导体,CMOS和CCD一样同在数码相机中可记录光线变化的半导体。CMOS传感器中每一个感光元件都直接整合了放大器和模数转换逻辑,当感光二极管接受光照、产生模拟的电信号之后,电信号首先被该感光元件中的放大器放大,然后直接转换成对应的数字信号。CMOS的优势在于成本低,耗电需求少,便于制造, 可以与影像处理电路同处于一个芯片上,缺点是较容易出现杂点。三 显微镜成像系统相关参数对CCD/CMOS数码成像系统的结构和原理有了一个基本了解后,我们再对成像系统的一些基本参数作一个说明。在实际应用中,很多用户对像素多少很敏感,一上来就提到我要多少万像素的成像系统,其实在专业成像应用中,像素多少只是影响成像的一个因素,还有其他很多指标,包括分辨率,感光器件大小,动态范围,灵敏度,量子效率,信噪比等。感光器件的面积大小是衡量显微成像系统质量的一个重要指标,感光器件的面积越大,捕获的光子越多,感光性能越好,信噪比越低。当前数码成像系统中较常应用的感光器件规格如下:1英寸(靶面尺寸为宽12.7mm*高9.6mm,对角线16mm),2/3英寸, 1/2英寸,1/3英寸,另外有时也用到1/1.8英寸,1/2.5英寸的CCD/CMOS感光器件。 像素是CCD/CMOS能分辨的最小的感光元件,显微数码成像系统的像素由低到高有:45万左右,140万左右,200万左右,300万左右,500万左右,900万像素,甚至还有更高的达到2000万像素以上。一般来说,像素越高,图像分辨率越高,成像也就越清晰,但有时候图像分辨率达到一定程度后,就不是影响成像质量的主要指标了。比如图像分辨率高,噪声也很高时,成像质量也不会很好。暗电流是导致CCD噪音的很重要的因素。暗电流指在没有曝光的情况下,在一定的时间内,CCD传感器中像素产生的电荷。我们在做荧光拍摄的时候,需要的曝光的时候比较长,这样导致CCD产生较多的暗电流,对图像的质量影响非常大。通常情况下通过降低CCD的温度来最大限度的减少暗电流对成像的影响。Peltier制冷技术一般可将CCD温度降低5-30°C,在长时间拍摄或一次曝光超过5-10秒,CCD芯片会发热,没有致冷设备的芯片,“热”或者白的像素点就会遮盖图像,图像会出向明显的雪花点。CCD结构设计、数字化的方法等都会影响噪音的产生。当然通过改善结构、优化方法,同样能减少噪音的产生。显微荧光或其他弱光的拍摄对CCD噪音的降低要求很高,应选用高分辨率数字冷却CCD成像系统,使其能够捕获到信号极其微弱的荧光样品图像,并且能够最大程度的降低噪音,减少背景,提供出色的图像清晰度。所以一般在荧光及弱光观察时需要选择制冷CCD。在显微数码成像过程中,对于荧光及弱光的拍摄,除了制冷降低热噪声外,还可使用 BINNING技术提高图像的灵敏度,BINNING像素合并是一种非常有用的功能,它可被用来提高像素的大小和灵敏度,比如摄像头像素大小为5u,当经过2x2合并后,像素大小为10u,3X3合并后,像素大小为15u, 这是图像的整体像素变少了,但成像的灵敏度可提高9倍。动态范围表示在一个图像中最亮与最暗的比值。12bit表示从最暗到最亮等分为212=4096个级别,16bit即分为216个级别,可见bit值越高能分出的细微差别越大,一般CMOS成像系统动态范围具有8-10bit, CCD以10-12bit为主,少部分可达16bit。对动态范围进行量化需要一个运算公式,即动态范围值 = 20 log (well depth/read noise),动态范围的值越高成像系统的性能就越好。量子效率也称像素灵敏度,指在一定的曝光量下,像素势阱中所积累的电荷数与入射到像素表面上的光子数之比。不同结构的CCD其量子效率差异很大。比如100光子中积累到像素势阱中的电荷数是50个,则量子效率为50%(100 photons = 50 electrons means 50% efficiency)。值得注意的是CCD 的量子效率与入射光的波长有关。对显微数码成像系统的参数有了整体认识后,在实际应用中选择合适型号的产品就比较容易了。高分辨率显微数码成像技术在国外已有二十来年的发展历史,产品目前已比较成熟。国外的专业数码产品有多个品牌,比较著名的有德国的ProgRes,美国Roper Scientific的系列产品,另外OLYMPUS、NIKON、LEICA、ZEISS等显微镜厂家也有一些配套的专业数码成像系统 。其中CCD成像系统主要采用SONY及KODRA公司的芯片,因此相关产品性能差别不是很大。国内专业数码成像产品的设计制造时间还不长,但随着配套技术的成熟,100万像素以上的CCD/CMOS专业数码成像产品开始陆续推出,主要的专业厂家有北京的大恒、微视、杭州欧普林,广州明美等企业。北京大恒早期主要研发生产图像采集卡,目前可以量产140万像素的CCD摄像头,130万/200万/320万/500万像素CMOS摄像头,主要用到工业领域。

  • 【原创大赛】显微荧光成像制冷CCD

    为何荧光显微镜需要使用制冷CCD相机?众所周知,荧光显微镜是利用被观测物体发出荧光来进行观测的显微镜。在外部光源的激发下,被检测物体发出荧光,从而进行观察。与普通显微观察不同的是,荧光显微镜并不直接使用外部光源,而是使用被观测物体发出的荧光。相比普通光源,荧光光源的强度要小得多,反映到成像上面,即意味着相比普通显微拍摄的曝光时间,荧光拍摄的曝光时间要长得多。但是,单方面的延长曝光时间,并不能得到好的显微荧光图像,因为随着曝光时间的增强,噪声也大幅度的的增加,严重影响了成像质量。科学家研究发现,由于曝光时间延长而导致的噪声的增加主要来自于CCD产生的暗电流噪声,于是冷CCD应运而生。所谓冷CCD,就是利用一定的制冷技术对CCD芯片进行制冷,让它在较低的温度下进行工作,从而有效的降低暗电流噪声。所以荧光显微镜的图像采集需要配套制冷CCD才能得到满意的图片,因为荧光的强度不足可见光的万分之一,这就决定采集荧光图像的CCD必须具备很高的灵敏度,为了消除图像采集过程中,因亮度不足而出现的噪点,最好采用制冷CCD来完成。无锡超微光学的LC-140A/500A显微荧光成像制冷CCD,是一款研究级的显微荧光成像专用相机,最适用于极弱光和微光的应用及提供最佳颜色还原和灵敏度的显微荧光成像专业用CCD,图像传感器具有高动态范围,优秀的灵敏性,配合12位数据采样输出,并支持2 x 2,4 x 4硬件binning。,具有小型化、操作简单、性能稳定等特点,适用在Nikon,leica,Zeiss,Olympus等显微镜上。提供企业或研究单位在化学发光成像分析、多色荧光成像分析等之研究及应用领域。

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  • 荧光显微成像系统配件
    荧光显微成像系统配件和欧洲进口的显微成像系统,可用于研究细胞形态、荧光探针检测(GFP)、荧光共振能量转移(FRET)和快速分子过程。荧光显微成像系统配件集成方案 使用的现代荧光成像技术极大得帮助科研人员研究细胞形态、荧光探针检测 量转移和快速分子过程。 提供实验所需的曝光时间,根据相机的设置 有效集成并优化同步各种部件 显微成像系统集成方案 已经成为研究活细胞和分子结构比不可少的科研工具 能够以相机的最大速度连续采集一系列图像 可以产生每秒幅的比率图像 在更短的时间内获得更好的实验数据 荧光显微成像系统配件 可编程控制的光源 时成像控制单元 显微成像系统科研型相机 显微镜适配器 成像软件和工作站 价值尽量减少光毒性 显微成像系统特点 时序控制准确: 满幅图像帧频最高可达图像分析灵活: 非常适合单个细胞或一组活细胞的动态过程的研究 荧光显微成像系统配件特点 图像采集和传输的控制达到微秒精度图像采集快速: 软件具有多维图像分析功能和各种应用模块 三维成像要求在轴上能够快速成像,才能获得重建数据 孚光精仪是全球领先的进口科学仪器和实验室仪器领导品牌服务商,产品技术和性能保持全球领先,拥有包括凝胶成像仪在内的全球最为齐全的实验室和科学仪器品类,世界一流的生产工厂和极为苛刻严谨的质量控制体系,确保每个一产品是用户满意的完美产品。 我们海外工厂拥有超过3000种仪器的大型现代化仓库,可在下单后12小时内从国外直接空运发货,我们位于天津保税区的进口公司众邦企业(天津)国际贸易公司为客户提供全球零延误的进口通关服务。 更多关于显微成像系统价格等诸多信息,孚光精仪会在第一时间更新并呈现出来,了解更多内容请关注孚光精仪官方网站方便获取!
  • 多光谱显微镜成像系统配件
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  • 多光谱显微镜成像系统配件 FP-AOTF
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荧光显微成像系统相关的资料

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  • 315万!天津大学AIE研究院超快系统-共聚焦荧光显微成像系统采购项目
    项目编号:TDZC2022J0013项目名称:天津大学AIE研究院超快系统-共聚焦荧光显微成像系统采购项目预算金额:315.0000000 万元(人民币)最高限价(如有):315.0000000 万元(人民币)采购需求:序号产品名称数量简要技术规格备注1超快系统-共聚焦荧光显微成像系统1该系统具有双光子成像和单光子共聚焦成像功能,能够对特定厚度材料及特定量子点探针进行激发成像,成像深度是普通单光子共聚焦10倍左右,在活体高分辨成像中广泛应用。单光子共聚焦具有高分辨成像能力,能够对材料、细胞及生物组织样品进行3D高分辨切片扫描及重构。应能够通过可见激光对,活细胞、组织和切片进行连续扫描,获得精细的单个细胞或一群细胞的各个层面结构(包括染色体等)的三维图像。可利用荧光标记测定细胞内如钠、钙、镁等离子浓度的比率、动态变化及pH值的动态变化。 合同履行期限:收到信用证后120天内交货及到货15天内完成安装调试并具备验收条件等本项目( 不接受 )联合体投标。
  • 100万!华中科技大学全内反射荧光显微镜成像系统采购项目
    项目编号:招案2022-0938(校内编号HW20220083)项目名称:华中科技大学全内反射荧光显微镜成像系统采购项目预算金额:100.0000000 万元(人民币)最高限价(如有):100.0000000 万元(人民币)采购需求:采购1套全内反射荧光显微镜成像系统(详见招标文件第三部分 采购需求);合同履行期限:签订合同后90日历天内完成供货、安装、调试验收;本项目( 不接受 )联合体投标。
  • 210万!上海交通大学高速激光全内反射荧光显微镜成像系统采购项目
    项目编号:1069-224Z20224671(项目编号:招设2022A00206)项目名称:上海交通大学高速激光全内反射荧光显微镜成像系统采购项目预算金额:210.0000000 万元(人民币)采购需求:序号货物名称数量简要技术规格交货期1高速激光全内反射荧光显微镜成像系统1套电动聚焦机构:备有粗微调转换旋钮(最小调焦精度:≤10nm),行程10.5mm,物镜离开 / 回复按键和记忆回位按键,最大移动速度:3mm/秒。收到信用证后180天内交货合同履行期限:收到信用证后180天内交货本项目( 不接受 )联合体投标。

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