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因检测通量较大,最终老板决定买一台全波长的酶标仪缓解分光光度计的压力。前几天设备终于来了是MD的190全波长酶标仪,来了时候就开始测试。因设备自带pathcheck功能可将结果转化成1cm光径OD,但是使用以来发现问题来了:1在利用全波长酶标仪测定磷含量的的时候(波长700nm)测定的结果和紫外分光光度计比较(标曲浓度0.2、0.4、0.6...1.4mg/L)后面几个点数据基本没问题,但是0.2、0.4浓度的点两边数据差别较大,在低浓度下酶标仪检测OD值较分光光度计检测ABS值明显低了很多。然后用酶标仪测定植物酶活(两组实验,分别设置灭活组和非灭活组测定两者吸光值只差),波长为540nm,结果发现用紫外测定时灭活组和非灭活组数据有明显差异且两组数据正常,但是用酶标仪的话灭活组和非灭活组数据差别不大,数据都偏小。所以不敢使用酶标仪检测,还是使用分光光度计检测。等弄清楚问题在用酶标仪,群里有人对这一块熟悉么?
要测胆汁酸含量,我的样品量比较少,想用酶标仪测,但是不知道具体用哪个波长,打算用紫外-可见分光光度计做全波长扫描,请问在酶标仪上可以直接用紫外-可见分光光度仪全扫描的最大吸收波长吗?
分光光度计和酶标仪区别分光光度计:利用单色仪或特殊光源提供的特定波长的单色光通过标样和被分析样品,比较两者的光强度来分析物质成分的光谱仪器。分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为:(1)200~400nm的紫外光区,(2)400~760nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm~400cm)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或(或原子吸收分光光度计)。酶标仪:实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。酶标仪按照功能的不同划分,可以分为(1)光吸收酶标仪(可见酶标仪,紫外/可见酶标仪)(2)荧光酶标仪(3)化学发光酶标仪。分光光度计和酶标板存在一些不同之处,具体差别体现在以下几个方面:(1)盛装待测溶液的容器:分光光度计用的是比色皿,酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用,每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,因此用它作为固相载体,酶标板通常为48孔或96孔,每个微孔可以盛装不同的溶液。(2)光路的方向:分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。(3)光路的长度:由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm,所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。[font=宋体