免疫共沉淀试剂盒

用酶联免疫试剂盒检测黄曲霉毒素时,试剂盒里面的酶标记物有沉淀,是什么原因？

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，免疫技术已经成为一种重要的研究工具。其中，免疫沉淀（[/font][font=Calibri]Immunoprecipitation[/font][font=宋体]）和免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-Immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是两种常用的技术，它们在探索蛋白质相互作用、定位蛋白质复合物等方面发挥着至关重要的作用。本文将对这两种技术的定义、应用、优缺点以及常见问题进行解析。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、[url=https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service]免疫沉淀与免疫共沉淀[/url]的定义[/font][font=宋体][font=宋体]：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀：免疫沉淀（[/font][font=Calibri]immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性，将抗原（常为靶蛋白）从混合体系沉淀下来，初步分离靶蛋白的一种方法。它通常用于蛋白质的纯化和富集，以便进行后续的分析，如蛋白质谱分析或[/font][font=Calibri]Western blot[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀：免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]co-immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是一种用于检测两种或多种蛋白质之间相互作用的技术。当一种蛋白质与特异性抗体结合后，可以通过共沉淀的方式将与之相互作用的蛋白质一同沉淀下来。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）一般可用于以下的研究分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]磷酸化位点分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]激酶活性分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]乙酰化位点发现与鉴定[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-IP[/font][font=宋体]）一般可用于以下的研究分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]利用质谱鉴定相互作用蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]蛋白相互作用的验证[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]缺失分析联合[/font][font=Calibri]co-IP[/font][font=宋体]进行蛋白互作结构域分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]测定两种目标蛋白质是否在体内结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]确定一种特定蛋白质的新的作用搭档[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、优缺点[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫沉淀：优点在于特异性高，能够有效地将目标蛋白与其他蛋白分离；缺点是需要大量的抗体和较长的实验时间。[/font][font=宋体]免疫共沉淀：优点在于能够直接检测蛋白质间的相互作用，且操作相对简单；缺点是可能会受到非特异性结合的干扰，导致结果出现偏差。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]五、常见问题解析[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫共沉淀中的[/font][font=Calibri]input[/font][font=宋体]是指什么？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]input[/font][font=宋体]是阳性对照。免疫共沉淀实验中，会直接取细胞裂解液进行[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，用于验证细胞裂解液中确实存在目的蛋白，即阳性对照。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）如何避免重链，轻链的影响（点击此链接详述）[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]设计合适的[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]实验；[/font][/font][font=宋体]选择合适种属的抗体；[/font][font=宋体][font=宋体]选择特异性识别重链[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]轻链的二抗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri]Input[/font][font=宋体]对照组出现假阴性结果？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]裂解液过于剧烈，采用温和的裂解条件；[/font][font=宋体]选择目的蛋白或相互作用蛋白含量低的样品：过表达提高目的蛋白的含量，进行免疫共沉淀。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]六、结论[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]总的来说，免疫沉淀和免疫共沉淀是两种强大且常用的免疫技术，各自具有独特的优势和局限性。了解这两种技术有助于我们更准确地理解和应用它们。在未来，随着生物技术的发展，这两种技术也将会更加完善，为科学研究提供更多的可能性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体]染色质免疫共沉淀[/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP[/font][font=宋体]）：[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]是一项比较流行的研究转录因（[/font][font=Calibri]transcriptionfactor,TF[/font][font=宋体]）与启动子（[/font][font=Calibri]promoter[/font][font=宋体]）相互结合的实验技术。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复合物，并通过超声或酶处理将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过抗原抗体的特异性识别反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]相互作用的信息。它能真实、完整地反映结合在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的一种很好的方法。 [/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）实验的优点[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与传统的研究转录因子和[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]相互作用的方法相比，染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）技术是一种在体内研究[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]与蛋白质相互作用的理想方法。染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）的优点在于能够在体内捕获转录因子和靶基因的相互作用，能同时快速地提供一种或者多种基因的调控机制，因此有着非常重要的应用价值。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）实验的局限性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）技术也有一定的局限性：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第一，该技术需要抗目的蛋白或者特殊修饰标签的高度特异性抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第二，假阴性信号可能源于无效的抗体结合或者在交联过程中抗原受到干扰。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第三，甲醛固定可能是暂时的，甚至是非特异的，可能导致相邻的蛋白形成假阳性信号。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第四，难以同时得到多个蛋白质对同一序列结合的信息等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫共沉淀[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀[/font][font=Calibri](Co-IP)[/font][font=宋体]是免疫沉淀的延伸[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]主要用于蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白相互作用检测。如果样品溶液中存在与靶蛋白相互作用的目的蛋白[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]也会被一同捕获及纯化得到[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通过[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western[/font][font=宋体]和质谱等方法鉴定与靶蛋白结合的蛋白。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也会被同时沉淀下来。其基本流程如下[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-IP[/font][font=宋体]） [/font][font=Calibri]/ [/font][font=宋体]免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）技术服务，推荐理由：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]①一站服务[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]方便快捷[/font][/font][font=宋体][font=宋体]您只需提供细胞或组织裂解液，义翘神州助您完成免疫沉淀[/font] [font=Calibri](IP) [/font][font=宋体]和免疫共沉淀 [/font][font=Calibri](Co-IP) [/font][font=宋体]实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②经验丰富[/font][font=宋体][font=宋体]长期从事[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]相关检测的技术团队，具有丰富的实践经验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③价格实惠[/font][font=宋体][font=宋体]使用义翘神州优质的[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]抗体和磁珠[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]胶珠，享受优惠价格。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service[/font][/font]