放射免疫分析仪

1、标准品　　标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。　　按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。2、标记物　　标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。　　要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。3、抗体　　应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。　　根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂　　以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：　　活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）　　右旋糖酐T200.2g　　加0.1mol/L PB 至100ml　　电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液　　放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。　　目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。　　在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。　　在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：　　0．1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml　　0.3mol/L EDTA2Na　　　　　10.0ml　　0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml　　溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g

1、标准品　　标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。　　按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。2、标记物　　标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。　　要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。3、抗体　　应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。　　根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂　　以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：　　活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）　　右旋糖酐T200.2g　　加0.1mol/L PB 至100ml　　电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液　　放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。　　目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。　　在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA• 2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。　　在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：　　0．1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml　　0.3mol/L EDTA• 2Na　　　　　10.0ml　　0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml　　溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g

工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一，为了在操作过程中确保安全，有许多严格的规定和要求。虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的，但这些预防措施必须严格遵守。现对从事这一工作的一些原则作一简述，多半是一些普通的常识，但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果。 1．放射免疫实验室中的放射性危险 对于没有封闭的放射性物质，主要的危险有下面三种： （1）β-或γ-射线的外照射 在放射免疫测定实验中，这方面的危险不大，因为放射性同位素的使用总量相当小，最常用的125I，它的能量也较小（0.027MeV），因此，其穿透能力是很小的。 （2）皮肤污染 这是在放射免疫测定中最常见的危害。高剂量的污染会导致皮肤的坏死，更为严重的是由于不注意手上污染的同位素而非常容易随着吃东西进入体内，随后又分布到全身。 （3）同位素进入人体 这是最主要的危险，通常是由于被那些皮肤或衣服上污染了同位素的人制作食品和饮料所致。同样也可能从空气中吸入。因为125I集中于甲状腺会导致甲状腺严重坏死，而且在体内长期受125I放射损伤还会导致癌症。 2．管理总则 对于操作放射性同位素的实验室应该这样设计：这些实验室应该符合使用和贮存同位素的要求。实验区域应该用国际上所接受的警告标志显示。在一些较大的实验室，对于操作大剂量放射性同位素（1mCi）的设计应该进行特别的审查。实验室内应该有通风良好的通风橱，而且还应该有淋浴的地方以便对可能出现的皮肤污染及时冲洗。对于一些没有经过同位素安全知识训练的人员不能允许进入实验室。 每一个实验室，即使是小实验室，应该指定专人（RSO）负责安全检查，此人将对有关人员进行同位素使用的安全教育，定期检查工作人员和仪器的污染情况，并帮助处理一些事故。该人对进入实验室的的所有放射性物质负责，并按照有关法令来处理同位素。 3．标记规则 下面的规则适用于所有水平的同位素标记工作。 （1）在实验室必须穿上带有从事同位素工作标记的实验服。（2）不准在实验室里吃、喝和抽烟。（3）如果溶液的放射性强度超过0.1μCi/ml，或虽然溶液中放射性强度较低，但总的放射性超过10μCi时，操作时均需戴上手套。（4）当操作的剂量大于1mCi时，手必须要用放射监测仪进行测定，这包括移去手套前后均需测定。（5）所有放射性材料，其浓度大于0.01μCi/ml或总放射强度大于1μCi时，均须标上同位素标签，标明强度、日期和体积； （6）不准用嘴来吸移液管； （7）应该尽可能采用有防护物的吸管装置； （8）所有操作台面需有保护层覆盖，并定期检查，在必要时把保护层换掉； （9）放射活性大于0.1mCi时，所有操作应在盘中进行，并在用过以后立即进行检查； （10）对于非消耗性设备（柱、注射器、吸管），若使用过高剂量放射活性材料后，必须在使用后用自来水冲洗，并浸泡在有去污剂的溶液中，直到下次再用，那些设备应该指定放在同位素实验室，不允许拿到别的地方再去使用；