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[font=宋体][font=宋体]梯度准确度是衡量一款[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]性能的重要指标,梯度如果不准确,将直接影响色谱峰的峰形、保留时间等,导致分析结果的精密度降低。一般我们认为仪器的梯度准确度在[/font][font=宋体]±[/font][font=Calibri]0.5%[/font][font=宋体]以内对结果的影响是可以接受的。本人根据日常的工作经验,总结了一套[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]梯度准确度的测试方法。[/font][/font][font=宋体]测试条件:[/font][font=宋体][font=宋体]流动相[/font][font=Calibri]A-[/font][font=宋体]纯水,[/font][font=Calibri]B-[/font][font=宋体]甲醇[/font][/font][font=宋体][font=宋体]色谱柱:粒径[/font][font=Calibri]5 um[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]4.6*100 mm[/font][font=宋体],反相[/font][font=Calibri]C18[/font][font=宋体]柱[/font][/font][font=宋体][font=宋体]流速:[/font][font=Calibri]0.5 mL/min[/font][/font][font=宋体]柱温:设定为室温附近[/font][font=宋体][font=宋体]进样量:[/font][font=Calibri]10 uL[/font][font=宋体]满定量环[/font][/font][font=宋体][font=宋体]检测器:[/font][font=Calibri]UV[/font][/font][font=宋体][font=宋体]检测波长:[/font][font=Calibri]272 nm[/font][/font][font=宋体]测试标准品:咖啡因(溶剂纯水)[/font][font=宋体]测试方法:[/font][font=宋体][font=宋体]将流动相比例设置为[/font][font=Calibri]A/B=59.5/40.5[/font][font=宋体],充分平衡色谱柱,[/font][font=Calibri]UV[/font][font=宋体]检测器预热充分,重复进样[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]次,记录检测结果为[/font][font=Calibri]Fai[/font][font=宋体]组。将流动相比例改为[/font][font=Calibri]A/B=60.5/39.5[/font][font=宋体],充分平衡色谱柱后,重复进样[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]次,记录检测结果为[/font][font=Calibri]Fbi[/font][font=宋体]组。设置梯度比例为[/font][font=Calibri]A/B=60/40[/font][font=宋体],[/font][font=宋体]充分平衡色谱柱后[/font][font=宋体],重复进样[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]次,每次进样结束后,将梯度比例更改为任意比例后再改回[/font][font=Calibri]A/B=60/40[/font][font=宋体],并充分平衡色谱柱后再进样,记录测试结果为[/font][font=Calibri]Fi[/font][font=宋体]组。([/font][font=Calibri]Fai[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fbi[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fi[/font][font=宋体]表示各组测试结果中的第[/font][font=Calibri]i[/font][font=宋体]次测试结果)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]将[/font][font=Calibri]Fai[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fbi[/font][font=宋体]组测试结果分别计算加权平均值,近似看作两次流动相比例下的保留时间真值。比较[/font][font=Calibri]Fi[/font][font=宋体]组的测试数据,观察其保留时间是否落在两组的加权平均值的区间之间。[/font][/font][font=宋体]总结:[/font][font=宋体]该方法只能测量梯度准确度的预估值,测量结果并不能代表仪器真实的梯度准确度,因为柱温稳定度、流量稳定性都会影响测试结果。[/font][font=宋体]当我们在日常测试工作中发现结果的紧密度与重现性不符合要求时,可以用此方法来测试仪器的梯度准备度,以此衡量输液系统是否需要维护。[/font]
一次液相输液泵的准确度测试输液泵,作为液相色谱仪的“心脏”,对液相色谱的定量和分离起着关键作用。输液泵的流量准确度、重复性、精确度及稳定性直接影响到实验结果的可靠性。因此为得到高质量、重现性好的实验结果,对泵的技术指标要求日益提高。 下面对实验室所用液相色谱仪进行泵流量准确度、稳定性测试。1. 设备及试剂秒表(分度值不大于0.1s);带探针数字温度计一直(分度值不大于0.1℃);万分之一分析天平一台;备压管,提供8MPa±2MPa备压;锥形瓶;高纯水。2. 实验过程仪器在正常工作条件下开机预热1.5h,实验过程中室温变化不超过3℃。在输液泵的出口连接一8MPa±2MPa备压管,以高纯水为流动相,将数字温度计探针插入流动相瓶中,测量流动相温度。待输液泵运行稳定后,按照检定标准中设定流量值,在流动相的排出口用称重过的锥形瓶收集流动相,同时用秒表准确记录收集时间,每个流量下各测试三次,记录测量数据,按下式计算输液泵流量输出误差Sm及稳定性SR。计算公式:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307191500_452425_1444635_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307191501_452426_1444635_3.jpg式中:Fm-http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307191502_452427_1444635_3.jpg,流量实测值,ml/min; F0-流量设定值,ml/min;t -收集流动相的时间,min;Fmax-同一设定流量三次测量最大值,ml/min;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307191511_452438_1444635_3.jpg-测量流量的平均值,ml/min; Fmin-同一设定流量三次测量最小值,ml/min; 工作温度:室温25℃,查国际温标水密度表,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307191504_452429_1444635_3.jpg=0.9970g/mlhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307201658_452655_1444635_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307201659_452656_1444635_3.jpg 备压管
请教各位专家,用液相色谱方法检测一物质的含量,面积归一化法,用该方法测定物质的含量约在98%,请问应该怎样做此方法验证的准确度呢?很困惑……在此先感谢!