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液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的外标法和内标定量有何区别?是如何处理的?
同一个样品,检测两次,均采用外标法,一个是气相色谱,一个是液相色谱含量差距很多,气相含量是百分之90左右,液相含量是百分之95左右,求大神分析原因?
高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)中外标法是一种常用的定量分析方法,其基本概念是通过测量已知浓度的标样(外标)和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高,从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法,现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法(2025版的公示稿) [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1)外标法的一般步骤:[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41](可以理解为外标法) [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定,精确称取或量取对照品和供试品,配制成溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积,进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图,并测量待测物质的峰面积(或峰高); [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量,其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度,C[sub]R[/sub]是对照品的浓度,A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高),A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积(或峰高)。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系,可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品,或从对照品储备液中精确量取,配制成不同浓度的系列溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量峰响应; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应(或经转换)对浓度绘制标准曲线,并通过最小二乘法计算出回归曲线方程; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下,精确量取供试品溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量待测成分的峰响应; e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应(或经转换)和回归曲线方程,确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线,得出标准曲线方程,再将待测品的峰相应代入方程进行计算,得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1)[b]多点校准(使用校准函数): [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液,这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高,并以此绘制校正曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高,并根据校准函数读取或计算组分的含量; [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b])单点校准: [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液,以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中,所有操作步骤,如进样程序,都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1)校准函数法(多点校准): [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液,这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内; b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析,并注射到色谱系统中; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高,绘制校准曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品,测量待测组分的峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2)单点校准法:[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,选择一个浓度在线性范围内的标准溶液,以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中,所有操作步骤,包括进样程序,都必须在恒定条件下进行,以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下:[/b][/color][size=16px]1)中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述,但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2)欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法,并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。(这两家基本是一 致的描述) [/size][size=16px]3)三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性,以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]