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1、标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物 标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。 要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体 应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。 根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂 以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制: 活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型) 右旋糖酐T200.2g 加0.1mol/L PB 至100ml 电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液 放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。 目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。 在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6): 0.1mol/l PB 980.0ml 0.3mol/L EDTA2Na 10.0ml 0.2%洗必泰溶液 10.0ml 溶菌酶 1.0g
1、标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物 标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。 要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体 应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。 根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂 以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制: 活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型) 右旋糖酐T200.2g 加0.1mol/L PB 至100ml 电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液 放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。 目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA• 2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。 在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6): 0.1mol/l PB 980.0ml 0.3mol/L EDTA• 2Na 10.0ml 0.2%洗必泰溶液 10.0ml 溶菌酶 1.0g
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204261141_363473_1699466_3.jpg ACS全自动化学发光免疫分析系统由拜耳公司生产,采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统。20世纪90年代初首次推出全自动化学发光免疫分析系统ACS:180。90年代中期推出第二代产品为ACS:180SE分析系统(图2),最 近该公司又推出了ACS:CENTAUR。第二代产品将微机与主机分开,软件程序加以改进,使操作更灵活,结果准确可靠,试剂贮 存时间长,自动化程度高等优点。 1.仪器测定原理 该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒 极微小,其直径仅1.0µ m,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:⑴竞争反应: 用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与 抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。⑵夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体 -测定抗原-发光抗体的复合物。 上述无论哪种反应凡所结合的免疫复合物均被磁铁吸附于反应杯底部,上清液吸出后,再加入碱性试剂;其免疫复合物被氧化激发,发射 出 430nm波长的光子,再由光电倍增管将光能转变为电能,以数字形式反映光量度,计算测定物的浓度。竞争法是负相关反应。夹心法 是正相关反应。 2.实验操作 本仪器测定所用试剂均包括两种:固相磁粉和液相发光试剂。每套试剂可放置于试剂托盘的任意位置上,由仪器扫描标签条码后自动加样 。根据测定项目不同,试剂用量在50~450µl之间。测定标本必须用血清,禁止用血浆,以防纤维蛋白将管路堵塞。 由于是自动化仪器,其操作极其简单:①将样品编号排入样品盘。②按试验项目将所用试剂放入试剂盘,并观察辅助试剂。③自由编排程 序,按“START”键运行,根据所编工作表,在微机的控制下,仪器自动放置反应杯,自动加样与试剂,并根据实验项目不同进行温育。温育时间一般在 2.5~7.5分。从第一个测定开始至16分钟,分析仪自动计算报告结果。然后每20秒有一个结果报出,即每一分钟报告3个结果 。如果60个样品同时测定,120个实验项目仅用一个小时即可完成。④随时可加入急诊检查项目。⑤打印报告方式可有三种:按测定 混合项目排列报告;按病人编号排列报告;按每一种项目排列报告。 3.仪器组成及特点 该仪器由主机和微机两部分组成。主机部分主要是由仪器的运行反应测定部分组成,它包括原材料配备部分、液路部分、机械传动部分及光路检测部分。微机系统是该仪器的核心部分,是指挥控制中心。该机设置的功 能有程控操作,自动监测,指示判断,数据处理,故障诊断等,并配有光盘。主机还配有预留接口,可通过外部贮存器自动处理其他数据 并摇控操作,以备实验室自动化延伸发展。 ACS:180SE分析仪为台式,其主要特点为:①测定速度:每小时完成180个测试,从样品放入到第一个测试结果仅需要15分 钟,以后每隔20秒报一个结果。②样品盘:可放置60个标本,标本管可直接放于标本盘中,急诊标本可随到随做,无需中断正在进行 的测试。③试剂盘:可容纳13种不同的试剂,因此每个标本可同时测定13个项目。④全自动条码识别系统:仪器能自动识别试剂瓶和 标本管,加快了实验速度。⑤灵敏度:达到放射免疫分析的水平。 4.测定项目 现有检测项目 47项,更多的项目还在开发之中。①甲状腺系统:总、游离T3,总、游离T4,促甲状腺素,超敏促甲状腺素,T3摄取量。②性腺 系统:绒毛膜促性腺激素,泌乳素,雌二醇,雌三醇,促卵泡成熟素,促黄体生成素,孕酮,睾酮。③血液系统:维生素B 12,叶酸,铁蛋白。④肿瘤标记物:AFP,CEA,CA15-3,CA125,CA19-9,β2 微球蛋白,PSA。⑤心血管系统:肌红蛋白,肌钙蛋白T,肌酸激酶-MB。⑥血药浓度:地高辛,苯巴比妥,茶碱,万古霉素,庆大 霉素,洋地黄,马可西平。⑦其他:免疫球蛋白E,血清皮质醇,尿皮质醇,尿游离脱氧吡啶。