液相色谱手动进样手法

制备液相作为一种高效的分离纯化方法，在生产和研发等领域都有非常广泛的应用，常见的进样方式可分为手动进样（Manual Injection）、自动进样（Auto Sampling）和泵进样（Sampling by Pump）。但进样方式这么多，我该怎么选呢？本期小编就给大家介绍下这几种进样方式的各自特点。1手动进样这是制备液相中比较经济，而且操作简单的进样方式，但需要人工操作，费时费力。进样原理：一般通过注射器吸取一定量的样品溶液，然后注射进入六通阀上的定量环，通过手动扳阀切换转子将定量环与泵及制备柱相连，流动相将样品运送至制备柱完成进样。# 进样过程进样前需要手动洗针并排出注射器中的气泡，进样后需要清洗进样口，具体进样量由定量环和吸取的液体量来确定。# 特点：● 使用简单，易学；● 可通过更换定量环来改变进样量；● 需要人员进行进样操作，无法自动化；● 适用于小规模制备，进样量一般zui大为几十毫升。2自动进样市场上的制备自动进样器种类繁多，但其核心基本都是六通阀，是手动进样的升级版。HT1500L通用款液相色谱仪自动进样器进样原理：通过软件控制自动进样器的吸液装置从进样瓶中吸取一定量的样品溶液然后通过六通阀实现进样。# 特点：● 能够实现多个样品的自动连续进样，极大减轻人工操作；● 进样更加精zhun和稳定，可进行自动清洗，降低残留污染；● 适用于小规模制备，进样量一般zui大为几十毫升。3泵进样大规模制备中的大体积进样，如果采用六通阀类型的进样器会由于定量环的体积过大导致峰的拖尾现象和峰展宽程度增加，所以一般大体积进样会采用泵进样的方式。进样原理：通过进样泵以一定的速度吸取样品溶液，直接注入到制备柱中。进样过程：进样前先平衡制备柱，完成平衡后先停止溶剂泵，启动进样泵抽取样品输送到制备柱中，完成进样后再启动溶剂泵开始样品的分离。# 特点● 进样量大，可以灵活设置不同的进样速度；● 不会因为进样量的增大而导致系统管路长度的增加；● 适用于大规模制备，进样量从毫升级到升级。制备液相进样器应用清单

在制备液相色谱中，样品的上样量是影响分离效果的重要因素之一。要纯化分离的样品应以合适的浓度添加到色谱柱柱床上，以实现窄的水平谱带。如果上样量太大，则谱带变宽，分离效率降低。Flash和Prep HPLC的上样量有很大不同。由于Flash色谱通常用于预纯化，高分辨率不是优先考虑的因素，因此上样量往往比Prep HPLC高。在Prep HPLC中，主要目的是获得最高纯度的物质，故基线必须得到分离。正相和反相二氧化硅（如C-18、氨基或二醇基）的上样量也存在相当大的差异。由于非键合相二氧化硅的表面积大，故这种固定相的载样能力更高。正相二氧化硅的载样能力通常比键合二氧化硅的载样量高约10倍。标准二氧化硅（粒径40-60 μm）通常可接受10%的载样量；在使用较小颗粒（15-30μm）时可以达到30%。然而，重要的一点我们要知道，无论是反相还是正相，上样量由样品的复杂程度决定的。对于含有多种化合物的复杂样品，决定其复杂性的因素是纯化目标化合物与其邻近的洗脱组分的分离程度。通常情况下，复杂样品需要少量多次的上样方式来处理。接下来“小步”同学将分享给大家一篇关于Pure制备色谱上样量的应用文章，来让大家感受下色谱的魅力。?在液相色谱中，样品可以通过两种不同的方式上样：固体或液体。液体上样，是将样品溶解在溶剂中后，直接注入色谱柱上。固体上样，是将粗样品与载体材料（如硅胶）的固体均匀混合物放在色谱柱前面。图1：液体和固体样品每种技术都有其需要考虑的特殊方面，下面将进行更详细的讨论。液体上样是一种将样品很好地溶解在洗脱初始溶剂中的方法，可用于Flash和Prep液相色谱应用中。推荐使用弱极性溶剂，因为强极性溶剂会降低分离度。液体上样被认为是最简单、最快捷的方法，但可能会造成样品损失，需要考虑的因素如下：- 化合物在初始溶剂中的溶解度:样品需要完全溶解，因为进样系统或色谱柱顶部的沉淀可能在系统中产生过大的压力，并最终导致样品流失。- 溶解溶剂的极性：如果使用极性溶剂溶解样品，则它们可能会吸附在极性硅胶柱基质上，并对更多极性化合物（后来在硅胶材料上洗脱的化合物）的分离产生不利影响。- 样品溶剂的体积:体积越大，样品从一开始就迁移到填料柱床中的风险就越高，从而导致谱带变宽、分离度降低。理想的样品体积不应超过色谱柱体积的10%。样品的保留率越高，可装载的体积就越大。- 样品量：每根色谱柱都有规定的装载量。理想的样品量不应超过纯化柱的最大装载量。在Flash液相色谱中，通常是在注射器的帮助下将液体样品手动直接注入到色谱柱顶部（如下图）。由于高背压，无法在Prep液相色谱柱上进行手动上样。因此，它是通过专用的进样阀完成的，如图所示：图2：Flash和Prep HPLC中的液体上样固体上样是仅适用于Flash色谱分离应用的技术，用于只能在强溶剂中溶解的样品，或用于具有难以溶解的粘性或多杂质样品。该方法可以通过减少谱带展宽和随后的拖尾效应来改善分辨率。一般来讲，固体上样分离较慢，但与液体上样相比，分辨率更高。推荐的样品量不应超过色谱柱的最大载样量。固体上样通常通过以下步骤完成：- 将粗样品溶解在合适的极性溶剂中。-然后，将该混合物在超声浴中超声几分钟，以提高溶解度。- 过滤混合物以除去尚未完全溶解的物质。非键合的二氧化硅是最常用的吸附剂，但可能不是最佳的选择。通常，建议使用与色谱柱相同类型的硅胶作为支撑材料。这样可以避免不必要的化学相互作用或样品的不可逆吸附。一种有用的替代材料是 Celithe,由于其中性的化学特性，它不与任何物质发生相互作用。

p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　 strong 仪器信息网讯 /strong 2020年3月3日，赛默飞液相色谱新品发布会在仪器信息网新品首发栏目举办，本次发布会赛默飞最新的Vanquish Core和变色龙7.3与大家见面。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202003/uepic/e471cbb9-995c-4bfd-9446-422fd88eecd6.jpg" title=" 图片1.png" alt=" 图片1.png" / /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　Vanquish Core是一款最高耐压700 bar的高效液相色谱，基于Vanquish平台，为常规分析实验室设计而成，具有如下特点： /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify text-indent: 2em " 创新的系统健康检查和增强的系统耐用性，确保获得可靠的系统正常运行时间； /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify text-indent: 2em " 借助变色龙色谱数据系统等软件进行控制，轻松集成到现有软件基础架构中； /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　具备合规性的基础架构，可最大程度地减少意外结果和超标事件； /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　系统操作界面直观，用户维护操作简便，增强了实验室人员操作能力； /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　对来自所有常见 HPLC 系统的方法进行无缝方法转移； /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　顺利集成到广泛的赛默飞 LC-MS 系列产品组合中。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　 strong Vanquish Core提供了一些新功能，主要特点和优势有： /strong /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　1.系统健康检查(System Health Check)功能，可在液相运行序列前设定某个时间段(每天或每周或每月)自动开启对系统健康状况的检查，设备长时间运行， 从而交付“一次就成功”的结果。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　2.诊断向导(Diagnose Guide)，新增功能，提供步骤向导，一键式查看如灯、光栅、电机、紧密度等仪器高级参数，以前需要工程师来维护，现在可以实现实验室人员自我诊断仪器，降低维护成本。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　3.Vanquish溶剂监测功能：可以智能化地对流动相容量进行主动测量，可确保系统永不干涸，让溶剂跑空成为历史。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　4.具有连续可调节的梯度延迟体积功能的液相，不光可以模拟任何第三方品牌液相的梯度，而且在谱图质量、保留时间、分离度上有所提升，帮助客户轻松实现方法转移，对于制药客户来说，这种功能是真正可以实现的合规操作，因为这种模拟不是软件层次的模拟，是真正硬件上支持的方法转换。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　5.标配6通道二元泵，二元泵也可以实现6路溶剂可选，提升了二元系统开放方法的便利性。 提供双通道紫外检测器，监测通道较之前有所提升，性能更优异。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　6.Vanquish智能触摸屏：提供内置的维修视频，从更换密封垫，清洗流通池，更换零配件等，均提供中文的维修视频，帮助客户轻松维护系统。且提供可视化的监控屏幕，可抗腐蚀且支持戴手套操作，方便客户操作。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　7.升级版自定义取样功能，方法编辑更简单，设定不同的取样程序，可以帮助实现减低溶剂效应，或提升灵敏度，或改善峰对称性等。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " 　　8.继承了Vanquish的自动进样器设计，流路一直在高压环境下的工作，进样更佳精准。带预压缩的智能进样功能技术，可智能降低压降，有效改善压力波动，可提升重现性并延长色谱柱寿命。 /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp & nbsp 更多发布会及新品信息，请点击新品专题查看： /p p style=" line-height: 1.5em text-align: justify " a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/themosnewLC" target=" _blank" strong https://www.instrument.com.cn/zt/themosnewLC /strong /a /p