脚架

下游工艺先进性决定了药品的质量抗体药物生产是个非常复杂的过程，大致分为上游的发酵及下游的分离纯化：上游工艺主要包括细胞复苏、传代、发酵生产。而下游工艺主要包括膜过滤及多步层析分离纯化。过去十多年来，基因工程获得突飞猛进的进步，细胞培养的表达量从原来的不到0.5 g/L 到现在普遍达到5g/L，有的甚至超过10g/L。这些进步是由细胞表达载体的开发，克隆筛选以及细胞培养基优化等技术创新所驱动的。由于发酵产率的大幅度提升，使得上游细胞培养成本大幅度降低，下表是抗体生产成本与表达量的关系。表1.表达量与抗体生产成本关系Titer（g/L）Annualproduction（1000kg）DisposableMaterial物料成本（$/g）Cell Culture PurificationFacilitiesc厂房/设备/人工FormulationCost（$/Vial）Total Cost（$/Vial）100 mg 1 g0.51204100422 134244425413 435102410412 26与上游十多倍生产效率提升相比，下游分离纯化技术进步明显滞后，导致下游工序成为生产瓶颈，抗体主要生产成本也转移到下游。下游工艺在整个生物制药生产中占据60%以上生产成本，也被认为是最需要改进的技术领域。下游工艺先进性决定了药品的质量，及药品生产效率和成本，也成为生物制药企业的核心竞争力所在。由于生物分子由于结构复杂，对外部条件敏感，稳定性差，杂质多，浓度低等特点，且监管部门对生物药的纯度和质量要求越来越高。因此下游的分离纯化成为生物制药的瓶颈，也是生物制药成本最大的一块。层析技术由于具有分离纯化效率高，条件温和且容易保持目标分子的生物活性，因此层析是生物制药分离纯化最主要方法。层析介质的“皇冠之珠”——令人爱恨交加的Protein A生物大分子的层析方法主要分为亲和，离子交换，疏水作用及体积排阻。亲和层析是利用介质上的配基与目标蛋白分子有特异性结合，而对其它的蛋白质及杂质不吸附，因此杂质从层析柱中流出，被吸附的目标生物分子通过改变洗脱液的条件使被分离物质与配基解吸附，即可达到分离纯化的目的。亲和层析无疑是最理想的层析分离方法，其与其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等最大的不同是由于亲和层析只与目标生物分子发生专一性吸附，其它杂质都不吸附，因此亲和层析分离纯化的工艺条件与杂质的组成及含量多少关系不大，从而大大简化亲和分离工艺开发方法，而其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等都是基于目标分子跟杂质分子之间的大小，电荷及疏水强度的差异来分离的，因此即使分离纯化同样的目标分子，但不同样品的杂质组分不同，含量不同，纯化工艺方法就需要重新调整。Protein A填料由于与大多数抗体有特异性吸附，因此被广泛地用于抗体药物生产过程中，极大地提高了抗体的分离纯化效率，毫无疑问Protein A 亲和介质是层析介质的皇冠上的明珠，其价格也是普通层析介质的十几倍。Protein A 亲和层析介质之所以会成为层析介质的贵族与它对抗体有特异性吸附有关。Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一亲和吸附作用从而达到分离纯化抗体的目的。因为配基与目标抗体的作用的专一性，其分离纯化与目标样品抗体纯度无关，也与样品杂质含量和种类多少无关，使用Protein A 填料一步纯化目标抗体就可以达到95%纯度以上，回收率达到90%以上。Protein A 层析介质的出现，让抗体的分离纯化步骤及方法大大简化，使得抗体的分离纯化比其结构简单多的生物分子都要简单。抗体分离纯化基本都是标准化的三步曲，第一步用Protein A进行抗体捕获，第二步用阳离子去除多聚体，第三步用阴离子精纯去除剩余少量杂质。Protein A亲和层析已经成为平台化技术，被广泛应用在抗体类分子捕获阶段。Protein A与抗体分子之间可特异性结合，特别对IgG1、IgG2、IgG4有较强亲和作用，使得抗体分子与发酵液中不具FC端结构的杂质如宿主蛋白与核酸等有效分离，进而达到纯化目的。亲和特异性赋予了Protein A填料捕获时可接受更宽泛的样品条件，如pH及电导率等。因此，发酵液通过离心、深层过滤后即可直接进行亲和捕获。另外与离子交换、疏水层析等方法相比，Protein A亲和层析纯化抗体料液可以获得更大的纯度，一步就可以获得抗体纯度大于98%，而且在回收率上也有明显优势，亲和捕获回收率可达95%。抗体工作者对Protein A 是爱恨交加，爱的是Protein A 亲和层析的出现大大简化抗体的分离纯化工艺开发,并大幅度提高抗体纯化效率和纯度，而且几乎适用于所有抗体的分离纯化。恨的是Protein A 亲和介质价格贵，寿命短，占据下游分离纯化成主要本。虽然很多科学家曾经致力于研究新的价廉抗体亲和配基以取代昂贵的Protein A亲和配基，但都没有成功找到一个可以取代Protein A 配基的分子。Protein A亲和层析因其高度特异性及同时具有浓缩的效果成为过去近30年里抗体纯化捕获的金标准。Protein A亲和层析介质贵的主要原因有两方面，一方面是Protein A 蛋白配基成本远比传统的小分子配基昂贵，另一方面，Protein A亲和填料寿命较短也是其成本过高的主要因素。一般离子交换填料使用寿命可高达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次。还有Protein A 介质贵与其一直处于高度垄断的局面也有关系，因此Protein A 亲和层析介质国产化以降低抗体的生产成本是必然的发展趋势。ProteinA结构及作用机制ProteinA蛋白是金黄色葡萄球菌细胞壁锚钉蛋白，其C端为细胞壁结合区域，抗体结合区域包括五个同源区域（E、D、A、B、C，N端顺序）。五个domain的序列同源率65-90%（图1）。图1 重组与天然ProteinA基本性质三维空间上，抗体FC端CH2-CH3区域与ProteinA蛋白B结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。抗体与ProteinA结合时，主要依靠的是疏水作用力，其次是氢键和双盐桥作用力。疏水作用主要来自于核心区域组氨酸残基。抗体上高度保守的组氨酸残基与ProteinA上的组氨酸残基发生相互作用。碱性或中性条件下，组氨酸残基不带电荷，其咪唑环的疏水效应的增强促进了FC端与ProteinA的结合。当pH降低至4.5以下时，组氨酸带上正电荷，于是两者产生静电排斥力，抗体从ProteinA上解离。除FC端恒定区域外，可变区VH3也参与了ProteinA结合及洗脱，影响洗脱pH（图2）。图2单抗分子结构 图3 抗体分子与ProteinA作用Protein A来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子Fc段特异性结合的结构域，当其作为亲和配基被偶联到填料基质上后，可特异性地与样品中的抗体分子结合，使其他杂蛋白流穿，借助高效亲和层析仅需一步就可使目标抗体纯度超过95%，此外Protein A也可结合另一些免疫球蛋白，如可用于某些种属IgA、IgM的纯化。由于Protein A亲和层析基于天然存在的生物大分子之间特异性结合为分离机理，这种得天独厚的势使得Protein A亲和层析成为重组蛋白\抗体等分离纯化中的绝佳选择（图3）。下一期，江必旺博士将继续分享Protein A亲和填料的关键考核要素有哪些，敬请持续关注。

美国SOC公司与我司合作，在国家遥感中心精准农业应用业务部、国家农业信息化工程技术研究中心遥感技术部举办高光谱成像技术交流会。此次来访的Michael先生介绍了SOC公司在高光谱成像研究领域的卓越成就，并就SOC公司的SOC700系列高光谱成像光谱仪与参会专家进行了详细的技术交流。 　　国家遥感中心精准农业应用业务部、遥感技术部主要业务与研究方向包括：植被定量遥感机理研究、农业遥感应用、生态遥感应用、农业立体污染监测等。本次会议有多位专家与学生参加，并进行了热烈的讨论与交流。 　　SOC710VP便携式可见-近红外成像光谱仪的光谱范围为400-1000nm，在精准农业、林业、矿业、环境科学和海洋学等应用领域内，都是非常理想的高光谱成像系统；SOC710VP具有高性能、超便携、坚固耐用等特点；12-bit动态范围的CCD和精确的出厂标定保证了高质量光谱数据的获取。由于全新的设计，不需要沉重耗电的扫描云台，重量仅3公斤，可以安装在三脚架上进行测量，非常便于野外实验。 　　美国Surface Optics Corporation(SOC)成立于1978年，专门从事表面光学特征研究和表面光学仪器的开发。在过去三十多年里SOC一直和政府和军事部门进行测量合作，并开发了一个广泛的用于各种材料的光学测量数据库。SOC的主要客户有NASA、Air Force、Army、Navy、Boeing-MD、Lockheed-Martin。SOC的实验室光学仪器和高光谱分析工具已经获得卓越的国际声誉。

挑战无线手机热像仪性能比之王！燧石技术IX2 AIR SE发布，售价1499元摘要：新品售价1499元！燧石技术无线手机红外热像仪：真无线热像仪开拓者9月9日，专注于智能光电感知技术创新研发的本土企业——燧石技术，正式发布旗下Raythink品牌无线手机红外热像仪新品：IX2 AIR SE，售价1499元，即刻可在各大电商平台订购，按定单顺序发货。作为燧石技术IX2家族的性价比之王，拥有256×192红外分辨、售价仅1499元的IX2 AIR SE，有哪些惊人之处？IX2 AIR SE通体黑色，外形设计简洁现代，便携小巧。3.2mm的锗单晶红外镜头，内置一颗256×192分辨率红外探测器核芯，下方是用于电源指示的3颗LED灯和开关按钮。机身右侧设计了一个用于充电和数据传输的Type-C接口，底部保留UNC1/4-20螺纹接口，确保IX2 AIR SE可以便捷地固定在三脚架上使用。性能参数方便，Raythink IX2 AIR SE无线手机红外热像仪，使用的是燧石技术母公司睿创微纳（688002.SH）自研氧化钒非制冷红外探测器，分辨率为256×192，输出清晰细腻的红外热图；热灵敏度达到了惊人的40mK，即可分辨0.04℃的温差，提高了热像仪的测量精度，增强检测能力；Raythink IX2 AIR SE无线手机红外热像仪使用的是3.2mm镜头，视场角达为56°，这意味着IX2 AIR SE具有较宽的视野范围，可以捕捉到较大角度内的被测物。同时，其空间分辨率为3.75mrad，还能够分辨出较小的细节。作为一款温度检测设备，Raythink IX2 AIR SE无线手机红外热像仪支持2档测温：-20℃~+150℃，100℃~550℃，满足常见的比如查找空调制冷或供暖不均匀的区域应用场景，以及检测变压器、电缆接头等高温部件，预防过热故障等高温场景的应用。此外，IX2 AIR SE可在最远8m处无线图传，成像距离为0.3m至无穷远。支持iOS和Android 设备，支持OTA升级，使用更灵活。据悉，IX2家族定焦双光版IX2 AIR也已登陆各大电商平台。提起红外热像仪，业内用户第一印象是：真贵呀！接下来的感慨多半是国产热像仪什么时候能顶起来？！破局着会是谁？作为科创板首批上市公司睿创微纳(688002.SH)全资子公司，燧石技术打破品质和实惠难以兼得的局面。Raythink IX2 AIR SE的发布，1499元的价格，256×192的红外分辨率，以实际行动向市场展示了品质与实惠并存的可能性。未来，期待燧石技术这家本土红外技术公司，让更多红外热像仪产品进入普罗大众视野，服务更多的基础用户。